不同产地半夏总生物碱含量测定

不同产地半夏总生物碱含量测定

半夏来自天南星科植物半夏属（thunb.）的干燥块根。其作为一味常用中药,不仅供中医临床配方使用,也是多种中成药的原料,其综合利用价值高,开发前景广阔。而且近几年来,随着世界各国对半夏研究的不断深入,以半夏为主原料的产品源源不断地推入国际市场,故半夏具有巨大的市场潜力。我国半夏资源分布广泛,国内除内蒙、吉林、黑龙江、新疆、青海、西藏外,其余省区均有分布。而半夏种茎的质量是半夏药材品质及质量控制研究的关键,为了评价全国不同产地半夏尤其是四川片区半夏种茎的质量,本研究收集川产半夏与其他产区的野生和栽培半夏,对其进行了化学成分的比较研究。半夏总生物碱具有止呕、抗炎作用,这些药理作用反映了半夏止呕、镇咳的功能与主治,故以半夏总生物碱成分为检测指标,采用紫外分光光度法对其进行含量测定。现报道如下。1实验材料和设备1.1地研究对象本研究共收集了全国不同产地半夏8省22地共22个种质资源样品作为研究对象,样品均系成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定。材料来源详见表1。1.2试剂的配制盐酸麻黄碱购自中国药品生物制品检定所;柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH5.4)、溴麝香草酚蓝标准液均在临用前配制,其余所用试剂均为分析纯。7530G紫外可见分光光度计(安捷伦上海分析仪器有限公司)。2方法和结果2.1对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10.0mg,置50mL容量瓶中,加蒸馏水制成每1mL含0.2mg盐酸麻黄碱溶液,即得对照品溶液。2.2声、氯的提取精密称取半夏样品粉末0.5g,置50mL三角瓶中,加浓氨水1mL,湿润后,加氯仿10mL,称定重量。冷浸3h后分别超声提取60min,加氯仿补足减失的重量,过滤,残渣以10mL氯仿分3次洗涤,合并滤液与洗液,40℃以下回收氯仿至干。加入8mL氯仿使溶解并转移至25mL分液漏斗中,再依次加入10mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和1mL溴麝香草酚蓝标准液,充分振摇后,静置15min,分取氯仿层,水层再用氯仿同法萃取两次,每次8mL。合并氯仿层,用氯仿定容于25mL容量瓶内,即得供试品溶液。2.3界定波长的确定按供试品溶液的制备方法,不称取半夏样品粉末制备空白对照液。将对照品溶液、样品供试液和空白对照液在200～800nm波长范围内进行全波长光谱扫描。以对照品溶液和样品供试液均有最大吸收,而空白对照液无干扰处作为测定波长。结果半夏样品供试液和对照品溶液在418nm处都有最大吸收,故本含量测定最终确定418nm波长作为半夏总生物碱含量的测定波长。见图1、图2。2.4制备空白的制备分别精密吸取一定量的盐酸麻黄碱对照品溶液至分液漏斗中,加蒸馏水至2.0mL,加入8mL氯仿,再依次加入10mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和1mL溴麝香草酚蓝标准液,充分振摇后,静置15min,分取氯仿层,水层再用氯仿同法萃取两次,每次8mL。合并氯仿层,用氯仿定容于25mL容量瓶内,即得。以相应的试剂同法制作空白。照紫外-分光光度法,在418nm波长处测定吸光度,以吸光度A为纵坐标,对照品浓度C为横坐标,绘制标准曲线,回归方程:A=25.853C+0.0767,r=0.9982。结果表明盐酸麻黄碱在0.0016mg/mL～0.0160mg/mL的范围内线性关系良好。见图3。2.5样品溶液的制备精密称取半夏样品粉末0.5g,按照2.2项下确定的方法制备供试品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作为空白对照液。在418nm处测定其吸收度,重复测定5次,测定结果见表2。结果表明:仪器精密度良好。2.6样品溶液的制备精密称取取半夏样品粉末0.5g,按照2.2项下确定的方法平行制备供试品溶液5份。取氯仿8mL,同法操作,作为空白对照液。在418nm处测定其吸收度,重复测定5次,测定结果见表3。结果表明:该方法重现性良好。2.7样品溶液的制备精密称取取半夏样品粉末0.5g,按照2.2项下确定的方法制备供试品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作为空白对照液。于不同时间在418nm处测定其吸收度,测定结果见表4。结果表明:供试品溶液在3h内保持稳定。2.8空白对照液制备照2.2项下确定的方法制备供试品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作为空白对照液。在418nm处测定其吸收度,并计算其含量,不同产地半夏总生物碱测定结果见表5。3川、川产夏的总生物含量3.122个不同产地半夏种茎的总生物碱平均含量为0.03891%,其中最高为0.07270%,最低为0.01194%,相差约4倍,不同产地半夏种茎总生物含量差异较大。说明虽然半夏是一种分布很广的植物,但是其质量各地差异极大,急需建立半夏的种子种苗质量标准,提供半夏高产优质种子,从源头上控制半夏的质量。3.2四川半夏种茎中总生物碱含量在0.03028%～0.06843%,平均值为0.0489%;省外半夏种茎的总生物碱含量范围在0.01194%～0.0727%,平均值为0.0342%。川产半夏的总生物碱含量较省外半夏高,并且省外半夏中以重庆半夏的总生物碱含量最高,而重庆的气候、地理环境与四川极其相近,说明环境因素对半夏总生物碱含量影响较大,并且半夏作为川产道地药材是有其依据的。3.3通过全国范围收集半夏,发现栽培半夏直径远远超过药典规定,外形与天南星极为相似,与传统的野生半夏经验鉴别大相径庭,急需一种全面评价栽培和野生半夏内在品质差异的方法以控制半夏的质量,保证临床用药