icam-1和ifn-在口腔扁平苔藓病损中的表达及意义

icam-1和ifn-在口腔扁平苔藓病损中的表达及意义

扁平口腔是一种常见的非感染性口腔疾病。研究表明:T细胞介导的细胞免疫反应、局部释放因子的作用及角质细胞的凋亡异常可能在OLP病程形成和发展中起重要作用。现已发现干扰素γ(interferon-gamma,IFN-γ)在OLP局部病损中表达上调,可能参与了OLP病损的形成。细胞间黏附分子1(intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1)是一种细胞表面黏附分子,它通过和受体结合参与T细胞与T细胞、T细胞与基质细胞及T细胞与靶细胞间相互作用和炎症反应,调节免疫功能,参与免疫与炎症反应的许多环节。有研究显示ICAM-1高表达可能与IFN-γ有关。本研究通过检测OLP局部病损中ICAM-1和IFN-γ蛋白的表达,探讨OLP局部病损中ICAM-1和IFN-γ表达之间的相关性及其在OLP发生发展中的作用和意义。1材料和方法1.1osp标本的一般资料分布标本来自贵阳医学院附属医院口腔内科,选择2005～2008年临床和病理资料完整且未经任何治疗并不伴有皮损的OLP活检组织标本,经4%甲醛溶液固定、石蜡包埋、常规HE染色及严格的病理诊断。选取拔牙或清创正常口腔黏膜组织10例;OLP组织55例,其中男23例,女32例,年龄18～70岁。OLP标本按临床类型分为糜烂型15例,非糜烂型40例;按病程分为<6个月31例,≥6个月24例。OLP组与正常组在一般资料的分布上无统计学差异。每例标本作4μm连续切片5张。1张HE染色片由2位病理医师盲法重新核实病理学诊断和病理改变程度计分,其余作免疫组织化学染色。1.2ifn-单克隆抗体bsm-需要鼠抗人ICAM-1单克隆抗体(SC-8439)购自美国Santacruze公司;鼠抗人IFN-γ单克隆抗体(bsm-0388M,北京博奥森生物技术有限公司);SP免疫组化抗鼠试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。1.3染色总异性型抗操作步骤严格按SP试剂盒说明书进行,高压抗原修复(0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液pH=6.0)。一抗的工作浓度分别为1∶250(ICAM-1)和1∶300(IFN-γ),每批染色同时设置阳性和阴性对照。ICAM-1和IFN-γ分别以淋巴结和胰腺癌标本作为阳性对照,PBS液代替一抗作为阴性对照。1.4评估结果1.4.1病理改变的结果的确定参考张筱林提出的OLP淋巴细胞浸润程度和基底细胞变性程度的计分标准进行计分,具体计分标准见表1。1.4.2细胞级细胞系统分级ICAM-1染色以细胞膜出现明确的黄色或黄褐色颗粒为阳性细胞;IFN-γ染色以细胞质出现明确的黄色或黄褐色颗粒为阳性细胞。采用盲法每张切片随机选择5个高倍视野(×400),每个视野计数100个细胞,至少500个细胞,计数阳性细胞百分比,取5个视野的平均数参照Shimizu方法进行分级,ICAM-1阳性细胞数分别占上皮细胞和炎细胞数<30%计分为1分;30%～70%计分为2分;>70%计分为3分;IFN-γ参照Tanaka等的方法,IFN-γ阳性细胞数占总淋巴细胞数<10%,计分为1分;11%～30%计分为2分;>30%计分为3分。同时两者均按染色颜色深浅分为3级,浅黄色计分为1分,黄色计分为2分,棕黄色计分为3分。每张切片最终分数按阳性率和染色强度两个参数的乘积计算,0～1分为阴性(-),2～5分为阳性(+),6～9分为强阳性(++),阳性和强阳性都归为阳性。1.5率的分析:相关分析和卡方检验采用SPSS11.5统计软件进行分析,率的比较采用卡方检验、秩和检验;相关分析采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1润程度及基底液化程度对osp组织的影响HE染色显示55例OLP组织均有淋巴细胞浸润和基底细胞液化的病理改变,按计分标准分别计分,其中淋巴细胞浸润程度为1分的OLP组织13例,2分的OLP组织24例,3分的OLP组织18例;基底液化程度为1分的OLP组织29例,2分的OLP组织19例,3分的OLP组织7例。Spearman相关分析显示,OLP病损区淋巴细胞浸润程度与基底细胞液化变性程度之间存在正相关关系(r=0.465,P<0.01)。2.2osp上皮组织的icam-1表达情况在10例正常口腔黏膜中只有ICAM-1阳性表达率为20%(2/10),颜色为浅黄色,主要分布在上皮棘细胞层(图1),其余均为阴性表达(图2)。OLP上皮组织中ICAM-1阳性表达率为67.27%(37/55),颜色为黄色或棕黄色,主要分布在上皮的基底层及棘细胞层下部角质形成细胞(图3);OLP组织固有层内ICAM-1阳性表达率为85.45%(47/55),颜色为黄色或棕黄色,主要分布在固有层炎细胞(图4)。ICAM-1在OLP组织中上皮和固有层炎细胞表达阳性率均高于正常口腔黏膜,两者相比差异均有统计学意义(P<0.05,表2)。2.3皮质细胞表达情况IFN-γ在正常口腔黏膜为阴性表达(图5),55例OLP病损区发现36例IFN-γ阳性表达,阳性表达率为65.45%,阳性细胞主要为固有层内浸润的淋巴细胞(图6);OLP组IFN-γ阳性表达率高于正常口腔黏膜组,差异具有统计学意义(P<0.01,表3);OLP上皮组织中ICAM-1的阳性率在IFN-γ阳性组高于IFN-γ阴性组,Spearman相关分析结果显示,IFN-γ和上皮角质细胞表达的ICAM-1呈正相关(r=0.369,P<0.05);但与固有层炎细胞表达的ICAM-1不相关(r=0.256,P>0.05)。2.4基本蛋白表达IFN-γ和ICAM-1在OLP组织中的阳性表达率在不同的基底细胞液化程度组间的差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示上皮ICAM-1和IFN-γ在OLP组织中的阳性表达与基底细胞液化程度相关(r=0.338,P=0.012;r=0.318,P=0.018);但IFN-γ、ICAM-1在不同临床类型、不同病程、不同淋巴细胞浸润程度之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。3icam-1和t细胞间的互联互通口腔扁平苔藓是口腔黏膜慢性炎性疾病,密集淋巴细胞带状浸润和基底细胞液化是OLP的典型的病理学特征。本研究中,OLP淋巴细胞浸润和基底细胞液化计分成正相关,说明OLP组织中固有层浸润的淋巴细胞越多,基底细胞液化变性也越严重,与孙善珍相关研究结果一致,提示基底细胞液化可能与局部浸润的淋巴细胞有关。我们推测浸润T淋巴细胞的细胞毒作用对上皮细胞的免疫性攻击,造成基底层细胞和基底膜损伤,可能是导致基底细胞液化变性的原因之一。ICAM-1属于细胞表面黏附分子免疫球蛋白超家族,与受体结合可以参与细胞黏附、抗原呈递和T细胞活化、细胞介导的细胞毒作用等过程。本研究中,与正常口腔黏膜相比,OLP局部病损上皮细胞和固有层内浸润的炎细胞上ICAM-1表达升高,且OLP上皮ICAM-1阳性表达率与基底细胞液化程度成正相关。已有研究显示在OLP中浸润的T淋巴细胞上ICAM-1的受体表达增加,据此,我们推测OLP病损中基底角质形成细胞的ICAM-1通过和T细胞上的LFA-1结合使角质细胞成为靶细胞而引起角质细胞的凋亡,从而导致基底细胞液化变性的病理改变。本研究还发现ICAM-1阳性表达率在OLP不同临床类型、不同病程之间差异无统计学意义,提示ICAM-1在非糜烂型和糜烂型OLP病损中均起一定作用,与临床类型无关;并且共同参与了OLP的早期与晚期病损形成过程。而OLP组织ICAM-1的表达与淋巴细胞浸润程度不相关,提示ICAM-l分子在角质细胞上的表达不依赖于上皮下浸润淋巴细胞的数量,与国内王增文在皮肤扁平苔藓中的研究结果一致。此外,本研究还发现ICAM-1在OLP固有层中炎细胞的阳性表达率为85.45%(47/55)。炎细胞不仅表达LFA-1分子,与表达ICAM-1分子的其它细胞黏附接触,它们自身也可表达ICAM-1,并且认为ICAM-1阳性T细胞处于激活状态。OLP病损中浸润的多数炎细胞上ICAM-1阳性反应,并且浸润的炎细胞主要以T淋巴细胞为主,说明淋巴细胞不仅通过受体(LFA-1)与角质细胞结合,同时其本身也表达ICAM-1,从而借助ICAM-1/LFA-1途径使淋巴细胞间黏附性增加,淋巴细胞间信号传递功能进一步增强,表明这些细胞处于活化状态,进一步为OLP细胞免疫功能异常提供新的证据。IFN-γ是典型的Th1型细胞因子,可诱导其它细胞因子、MHC类抗原及白细胞粘连分子的表达,从而促进细胞毒性T细胞的细胞毒作用。已有研究表明IFN-γ可诱导体外培养的角质细胞表面ICAM-1分子的表达,与LFA-1结合,在细胞毒反应中起重要作用。本研究中,与正常口腔黏膜相比,OLP局部病损中IFN-γ蛋白表达上调,与相关研究结果一致,提示IFN-γ可能在OLP局部病损形成中起重要作用。OLP上皮组织中ICAM-1表达阳性率在IFN-γ阳性组高于IFN-γ阴性组,IFN-γ和上皮ICAM-1的阳性表达间存