临床微生物学检验：实验七 肠道杆菌的检验（二）

实验七肠道杆菌的检验（二）目的要求：1熟悉肠道杆菌的分离鉴定程序及临床意义；2掌握肠道杆菌的生化反应特点和数值鉴定方法；3掌握鉴定肠道杆菌的生化反应试验和血清学试验的操作方法和结果分析实验内容（第二次实验）：1.细菌选择培养基培养后菌落形态观察；2.培养物涂片革兰染色显微镜观察细菌形态和染色性；3.培养物氧化酶试验；4.KIA、MIU接种（2人一套）；5.微量生化管接种（2人一组，小组作）。肠道细菌（主要为杆菌）的分离鉴定程序介绍

粪便标本

直接分离

SS琼脂平板或EMB平板副溶血性弧菌选择培养基挑选无色小菌落

双糖铁培养基进一步生化反应血清学试验菌落形态生化反应

药敏试验结果报告1.选择培养基上细菌形态、菌落观察Mac琼脂平板/麦康凯琼脂平板SS琼脂平板

营养成分(蛋白胨/Nacl)；成分：抑杂菌剂（胆盐/煌绿/结晶紫)

；

乳糖（初步区分致病菌非致病菌）；酸碱指示剂（如中性红，酸为红色碱为无色）

革兰染色镜检观察细菌的形态、染色性和排列细菌名称生长状况良好否菌落颜色其它菌落特征革兰染色镜检结果Mac平板大肠埃希菌良好粉红圆形光滑湿润菌落G-b，散在排列变形杆菌良好无色圆/光/湿，迁徙生长G-b，散在排列，两端钝圆，多形性SS平板痢疾杆菌无色无色圆形光滑湿润菌落G-b，散在排列乙型副伤寒杆菌无色无色圆形光滑湿润菌落G-b，散在排列2氧化酶试验（滤纸法，p30）【原理】某些细菌可产生氧化酶（或称细胞色素氧化酶），是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。作氧化酶试验时，此酶首先使细胞色素C氧化，然后氧化型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺氧化，产生颜色反应。【方法】取白色洁净滤纸沾取菌落。加1%盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深。如用盐酸四甲基对苯二胺为蓝色

[结果]肠杆菌科阴性；弧菌科、非发酵菌阳性（个别除外）、奈瑟菌属均阳性。3KIA、MIU接种（下次看结果）

1套/2人

4微量生化管接种（下次看结果）

1套/2人（每套不同11种）KIA试验（克氏双糖铁琼脂培养基试验）：下层接种针穿刺接种，上层划线接种MIU试验（动力/靛基质/尿素酶试验）：穿刺接种微量生化管（1套/2人）：砂轮划一圈安瓿瓶瓶颈折开，接种针接种菌种：大肠埃希菌、变形杆菌；乙型副伤寒沙门菌、痢疾杆菌菌KIA试验（p31）1.原理：KIA琼脂中含有葡萄糖、乳糖、硫酸亚铁及酚红指示剂（酸为黄色，碱为红色）。乳糖浓度是葡萄糖的10倍，分解糖可产酸，使酚红指示剂变色；铁盐可与硫化氢反应，生成黑色沉淀。2.培养基：克氏双糖铁琼脂培养基。3.方法：可疑菌落先穿刺再斜面划线接种，35℃培养18～24h观察结果。4.结果：碱性（K），酸性（A）。产气+/不产气-，H2S试验常见细菌KIA结果（乳糖/葡萄糖/气体/H2S大肠杆菌AA+-痢疾杆菌KA--伤寒杆菌KA-+/-甲型副伤寒杆菌KA+-/+乙型副伤寒杆菌KA++变形杆菌KA++MIU试验(p32)1.原理：将半固体观察动力、靛基质试验和尿素酶试验综合到一起的复合试验。2.培养基：MIU培养基，含尿素（分解产氨为碱性）、蛋白胨（色氨酸分解产生吲哚），指示剂为酚红（酸为黄，碱为红）。3.方法：将可疑菌穿刺接种到MIU培养基内，35℃培养18～24h观察结果,先观察动力和脲酶反应，再滴加吲哚试剂。常见细菌MIU结果（动力/靛基质/尿素酶）大肠杆菌++-痢疾杆菌-+/--伤寒杆菌+--甲型副伤寒杆菌+--乙型副伤寒杆菌+--变形杆菌（普通；奇异）