结核分枝杆菌与实验室生物安全

结核分枝杆菌与实验室生物安全广东省结核病防治研究所钟球

钱明附件广东省结核病防治研究所钟球

钱明§结核病的定义§结核病的疫情§结核病病原学§结核病的流行§结核病实验室生物安全§结核病实验室安全防护§结核病实验室废物解决§结核病职业暴露§结核病是由结核分枝杆菌（偶然可由牛型或非洲型分枝杆菌）引发的一种细菌性疾病。结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最为常见。该病含有传染性强，散播面广，不分地区均可发生。结核病可由呼吸道、消化道、皮肤等途径感染，但其重要传输途径是以空气为传输因子的呼吸道传染，而排菌的肺结核病人传染性更大，是传输感染的重要传染源。结核病的疫情n感染人数

约为20亿n新发活动性肺结核病人890万(141/10万)n新发涂阳肺结核病人

390万n结核病发病率每年增加1%n预计患病人数为1550万例（患病率为246/10万）其中涉及HIV+TB38万例n死于结核病为180万例，结核病死亡率为29/10万,其中涉及HIV+TB死亡27万例结核病病原学§结核分枝杆菌是引发人类结核病的重要病原体。1882年由德国医生Koch发现。在微生物分类中，结核分枝杆菌属于厚壁门、裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。分枝杆菌复合群共涉及人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类重要的致病菌。结核分枝杆菌的形态§

结核分枝杆菌菌体含有多形态特性，除正常典型形态外，受不良生长条件的影响。如物理因素、化学因素，特别是药品因素，而呈现异常变化，其多个形态可归纳为杆菌型（基本形态）、滤过型、颗粒型和球菌型（L型）4种类型。§

1.杆菌型（基本形态）结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌。菌体

长1～4μm，宽0.3～0.6μm，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。§

2.滤过型早在19，Foutes在检查细菌滤器滤过的结核分枝杆菌培养滤液时，在电子显微镜下观察到球状微粒体。1991年，Khomeko在豚鼠损坏性肺结核模型中证明了滤过型的存在。此球状微粒体可通过细菌滤膜，称为滤过型。§

3.颗粒型19莫赫(Much)在结核性冷性脓肿、浆液性渗出液、干酪性淋巴结等脓液中观察到革兰染色阳性颗粒，称为莫赫颗粒。莫赫颗粒的重要意义在于这些颗粒型体仍有生机与活力，在适宜的营养条件下，可重新获得增殖，发育生长出典型结核分枝杆菌。§

4.球菌型（L型）结核分枝杆菌在体内外受物理、化学、免疫等因素的影响，维持菌体固有形态的细胞壁缺损或丧失，产生细胞壁缺点型。细胞壁缺点型细菌是1935年Kilienberger在英国Lister医学研究院研究念珠状链杆菌时首先发现的，故以Lister医学研究院的第一种字母，将细胞壁缺点型细菌命名为L型菌。结核分枝杆菌的染色特性§

结核分枝杆菌本身无颜色，观察结核分枝杆菌必须染色后进行。结核分枝杆菌革兰染色阳性，但革兰染色不易着色。经苯胺染料着色后，能抵抗酸和酸乙醇脱色，此种特性称为抗酸性。Z-N染色法为最惯用的一种抗酸染色办法，经此法染色后，分枝杆菌，涉及结核分枝杆菌呈红色，而标本中其它细菌、细胞、杂质等均呈蓝色结核分枝杆菌的生长特性§

结核分枝杆菌生长缓慢，繁殖一代在人工培养基内约需要15～20小时，在静脉感染未经免疫小鼠肺中约需要15小时，在巨噬细胞内约需要15～20小时，在家兔角膜中约需要20～22小时。结核分枝杆菌的抵抗力§

结核分枝杆菌因细胞壁含大量类脂质，特别是腊样物质，含有疏水性，对物理和化学因素的作用均较普通致病菌抵抗力强。§

1.物理因素影响结核分枝杆菌生存能力较强，在温室和阴暗处干燥痰内能够存活6～8个月，粘附在飞扬的空气尘埃中可保持传染性8～10天。结核分枝杆菌普通较耐低温，在-6～8℃能存活4～5年。§

干热对结核分枝杆菌杀伤力弱，痰内结核分枝杆菌在100℃下需要4～5小时被杀灭。湿热对结核分枝杆菌杀伤力强，在60℃30分钟、70℃10分钟、80℃5分钟和90℃1分钟可将其杀死，因此煮沸与高压蒸气消毒是最有效的办法之一。§

结核分枝杆菌对光线和射线敏感，在太阳光直射下2～7小时死亡。病人用过的物品在强阳光下直晒半日，基本可达成消毒的目的。10～1mg/ml菌悬液，液层厚度3mm，用10W紫外线灯在距离确0.5m处持续照射3分钟，在距离1m处持续照射10分钟，经培养无细菌生长。但紫外线穿透力弱，难以透入固体物质内部和液体深层，因此紫外线普通用于空气和物体表面消毒。§

2.化学因素的影响化学消毒剂的种类诸多，其杀菌的机制因化学药品种类不同而异。乙醇使菌细胞蛋白质变性、凝固而产生杀菌作用。结核分枝杆菌直接接触70%～75%乙醇5～30分钟可被杀死，因此可用于皮肤消毒。但由于乙醇能凝固蛋白，使痰表面形成一层把菌体包裹起来的膜，短时间内不能杀死细菌，故乙醇不能用于痰的消毒。§

苯酚重要通过破坏菌细胞膜而致细胞质内容物漏出，使菌体蛋白质变性、凝固，克制菌体脱氢酶和氧化酶等酶系统杀死结核分枝杆菌。2%苯酚

5分钟、5%苯酚1分钟能杀死结核分枝杆菌培养物。5%苯酚与痰液等量混合，24小时才干杀死结核分枝杆菌。煤酚皂溶液作用机制与苯酚相似，0.5%煤酚皂60分钟，1%煤酚皂45分钟，2%煤酚皂10分钟，5%煤酚皂5分钟，即能杀死结核分枝杆菌培养物。5%～10%煤酚皂等量混入痰标本，12小时可杀灭结核分枝杆菌。§

甲醛使菌细胞蛋白质变性凝固，丧失代谢功效致细菌死亡。1%甲醛解决结核分枝杆菌5分钟，可使细菌死亡。5%甲醛和痰液等量混合，解决12小时以上才干达成杀菌作用。§

“84”消毒液是以氯为重要成分的消毒剂。氯是一种氧化剂，能使菌体的酶失活，还能与蛋白质的氨基结合，使菌体蛋白氯化，代谢功效障碍，细菌死亡。0.5%“84”消毒液15分钟可杀死结核分枝杆菌培养物，但对在蛋白质混合液中的结核分枝杆菌几乎无消毒效果。§

结核分枝杆菌对酸、碱抵抗力强，在4%NaOH，3%HCL和6%H2SO4中30分钟仍能存活。临床应用酸或碱加入病人标本，消化蛋白质及杀灭杂菌，以此分离出结核分枝杆菌。结核分枝杆菌对染料，如1∶13000孔雀绿和1∶75000甲紫有抵抗力，普通在培养基内加入一定量的孔雀绿或甲紫克制其它杂菌生长。对普通细菌有较强杀菌作用的新洁尔灭，对结核分枝杆菌几乎无消毒作用。结核分枝杆菌的致病性§

结核分枝杆菌不产生内、外毒素，也无侵袭性酶类。普通认为其致病作用可能与菌体表面构造及某些菌体成分，如脂质、某些菌体蛋白、多糖等多个物质有关，重要是有毒结核分枝杆菌菌株在易感机体内顽强增殖和与机体互相作用的成果。结核病流行§

结核病在人群中流行的三个生物学环节是：

1、传染源，

2、感染传输途径；

3、易动人群。影响结核分枝杆菌传输的重要因素§

1、排菌量痰中结核分枝杆菌越多，传输的危险性越大。病人出现痰涂片阳性若1ml痰液中含菌量为

1000－

10000，其痰涂片阳性率为40%－50%，痰液中含菌量低时，痰涂片阳性率亦低（表l）。表1

痰涂片与痰标本中结核分枝杆菌数§

痰涂片阳性（涂阳）病人的排菌量大，其亲密接触者的结核感染率明显高于痰涂片阴性（涂阴）病人的亲密接触者，英国报告涂阴培阴病人的家庭小朋友亲密接触者结核感染率为17.6%；涂阴培阳病人的接触者结核感染率为26.8%；涂阳培阳病人的接触者结核感染率高达65.0%（表2）。表2不同传染源对15岁下列亲密接触者的感染率（%）§

2．排出飞沫的大小传染源排出的飞沫受压力和粘稠度的影响而大小不一，飞沬核直径1－10μm者在空气中漂浮时间长，可进入人体末梢支气管内；飞沫核直径较大者，则受地心引力的影响而坠落。§3．

患者病变与症状病变广泛、损害严重的患者，特别是病变急剧进展，干酪溶解形成空洞患者的痰中含有大量结核分枝杆菌，是重要的传染源。患者咳嗽、喷嚏或大声说话时都能产生飞沫，有报道，当人咳嗽时每次排出的飞沫数约为3500个，一次喷嚏则可排出飞沫达100万个；日常说话5分钟所排出的飞沫数相称于一次咳嗽，咳嗽是肺结核病人产生飞沫的重要方式。§

表3统计了病人每晚咳嗽次数，并观察其0－14岁家庭接触者的结核感染率每晚咳嗽48次以上患者的家庭接触者感染率为43.9%，而咳嗽12次下列患者的接触者感染率为27.5%。表3传染源咳嗽次数与接触者感染率§

4．接触的亲密程度周边人群与传染源接触越亲密，受感染的机会越多，涂片阳性病人的亲密接触者感染率明显高于偶然接触者（表4）。表4不同接触程度小朋友感染率§

5．环境因素与传染源病人同处在空气不流通的室内的亲密接触者，受结核感染的可能性增大。第二次世界大战时期曾报道潜艇内官兵大批感染和发病，也有民航客机上结核病传染源使同机乘客受感染的报道。传输途径§

呼吸道感染（respiratortractinfection）是肺结核的重要传染途径（routesofinfection），飞沬传染（dropletinfection）为最常见的方式。传染源重要是排菌的肺结核患者（特别是痰涂片阳性未经治疗者）。飞沬核（dropletnuclei）＜10μm时可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打喷嚏时喷出的带菌飞沫而受感染。易感者§

结核分枝杆菌进人人体，引发易感者（susceptible）机体的复杂反映。§

1．人体的防御反映人体的防御反映（defensereaction）有物理、化学和生物学反映。进人呼吸道的结核分枝杆菌飞泳核可被鼻、咽、喉、气管和支气管的粘液吸着、被酶杀灭并随纤毛运动经咳嗽、喷嚏和咳痰等动作排出体外，或被吞噬细胞吞噬杀灭。当防御功效（defensefunction）低下时，结核分枝杆菌进人下呼吸道，引发机体反映。§

2．人体的易感性未受结核感染的人是结核病的易动人群（susceptiblepopulation）一旦受到结核分枝杆菌传输，含有普遍的易感性（susceptibility），进入人体的结核分枝杆菌可在人体内繁殖，结核分枝杆菌的繁殖周期约为10－20小时，一条结核分枝杆菌在体内繁殖1周可达128条菌，繁殖20天将超出100万条菌（表5），体内的大量结核分枝杆菌将使人体患病，引发机体的免疫与变态反映。表5一条结核分枝杆菌在体内的繁殖状况§

3.免疫与变态反映人体对结核分枝杆菌的自然免疫力（naturalimmunity）（先天免疫力）是非特异性的。接种卡介苗（bacillicalmette－guérin，BCG）或受结核分枝杆菌感染后所产生的获得免疫力（acquiredimmunity）（后天性免疫力）则含有特异性，能将入侵的结核分枝杆菌杀死或严密包围，制止其扩散，使病灶愈合。结核病的免疫重要是细胞免疫，体现为淋巴细胞的致敏与吞噬细胞功效的增强。化疗时代的结核病流行§化学疗法的流行病学效果

传染性肺结核病人接受抗结核药品化学治疗（chemotherapy）后，肺部病灶中的结核分枝杆菌被杀灭，传染性减小以至消失，传染源的流行病学作用随之消失。实验报告敏感菌在未治疗时相对传染性100%，在治疗中只有25%，耐药病人未治疗时相对传染性为100%。在治疗时则只有27.3%。结核分枝杆菌检查§一、结核分枝杆菌检查的意义结核病是由结核分枝杆菌引发的可致全身器官或组织发生病变，而以肺部病变为常见的传染性疾病。因此，痰结核菌的检查是结核病流行病学、结核病诊疗、拟定化疗方案以及评价治疗效果的重要手段，在当代结核病控制工作中起着不可或缺的重要作用。§结核分枝杆菌检查:

直接涂片;结核分枝杆菌的分离培养和结核分枝杆菌的药品敏感性测定结核病实验室生物安全§一、生物安全的概念

实验室生物安全，是指在以微生物为对象的实验工作中，防止生物危害，保障操作对象、操作者和环境的安全。合理的实验室建筑构造和布局、生物安全柜的对的使用，能够使操作对象和工作人员得到有效的保护，排出的空气经高效滤器滤过也能够保护邻近人员及环境的安全。在没有确保安全的实验室条件下，解决传染性强的实验材料时，防护服、防止免疫和药品防止是实验室生物安全的必要确保。§二、术语与定义(一)生物因子（biologicalagents）一切微生物和生物活性物质。(二)病原体（pathogens）可使人、动物或植物致病的生物因子（涉及微生物、寄生虫等）。(三)危害废弃物（hazardouswaste）有潜在生物危险、可燃、易燃、腐蚀、有毒、放射和起破坏作用的对人、环境有害的一切废弃物。(四)危险（risk）伤害发生的概率及其严重性的综合。(五)气溶胶（aerosols）悬浮于气体介质中的固态或液态微小粒子（粒径普通为0.001-100μm）形成的相对稳定的分散体系。(六)高效空气过滤器[highefficiencyparticulateairfilter（HEPA）]

普通以滤除≥0.3μm微粒为目的，滤除效率符合有关规定的过滤器。(七)安全罩（safetyhood）置于实验室工作台或仪器设备上的负压排风罩，以减少实验室工作者的暴露危险，排风经高效过滤。(八)缓冲间（bufferroom）设立在清洁区、半污染区和污染区相临两区之间的缓冲密闭室，含有通风系统，其两个门含有互锁功效，且不能同时处在启动状态。(九)实验室分区（laboratoryarea）按照生物因子污染概率的大小，实验室可进行合理的分区。(十)气锁（airlock）气压可调节的气密室，用于连接气压不同的两个相邻区域，其两个门含有互锁功效，不能同时处在启动状态。在实验室中用作特殊通道。(十一)定向气流（directionalairflow）在气压低于外环境大气压的实验室中，从污染概率小且相对压力高处向污染概率高且相对压力低处受控制流动的气流。(十二)一级屏障（primarybarrier）是操作者和被操作对象之间的隔离，也称一级隔离。如生物安全柜、个体防护装备等。(十三)二级屏障（secondarybarrier）是生物安全实验室和外部环境的隔离，也称二级隔离。(十四)生物安全实验室（biosafetylaboratory）通过防护屏障和配套管理方法，达成生物安全规定的生物实验室和动物实验室。§三、微生物危害程度分级

微生物按其与否致病、致病力强弱、危害人体的严重性、传染性的大小、临近人群的抵抗力、有无免疫制剂和特效治疗药品等综合评价，可分为四个不同的危害等级。结核分枝杆菌属于3级危险。§

3级危险（对个体含有极大危害，对群体含有较大的危害性）：指有特殊危险的致病菌。感染后症状较重，并可能危及生命，或者缺少有效的防止办法、发病后不易治疗的微生物。实验室感染的因素及防止§（一）技术操作可能造成的感染及其防止方法。

1.接种：应使用无弹力的铂丝接种环，结核菌接种后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要特别注意。

2.混匀：吸管吸吹菌液时不要产愤怒泡，应沿容器壁排出。

3.研磨：最佳使用组织研磨器，乳钵易产愤怒溶胶。4.移液：吸管上端的棉花松紧要适度，吸液时要从管底吸取，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免产愤怒泡，形成气溶胶。5.开封：要避免压力和气流的急剧变化。6.离心：离心管套底垫要完好，使用匹配的管、套、离心头，加盖。7.注射：做好个人防护，对的使用注射器。8.搬运：室内移动要避免滑落，移出室外要有坚实密闭的外包装。§（二）生物安全的制度方法

1.无生物安全3级实验室，进行病原的实验操作，要在有缓冲间的无菌室内操作，并使用生物安全柜。2.工作前后要用紫外灯消毒。3.操作台面要铺湿消毒巾。4.按操作病原的危险等级和感染途径做好个人防护。5.操作台附近要常备消毒液，污染物要放入密闭容器及时灭菌。6.实验室内要严防虫、鼠进入。7.根据需要对实验室工作人员进行免疫接种和药品防止。8.有皮肤破损和疾患的人员不得操作3、4级危险性病原。生物安全保障§（一）建筑构造保障——生物安全3级实验室

1.结核分枝杆菌属于生物危害3级的微生物，进行活病原（培养物或感染标本）操作时，应使用本级别实验室。

2.实验室建筑设备规定：双层门或有气幕的出入口；实验室表面可洗刷、消毒；由上至下的气流方向；排气经高效滤器；窗户密闭、工作区可防一切蚊虫进入。3.工作制度规定：非工作人员不得进入；使用实验室专用工作服、鞋；排水经无害化解决；搬出物品规定要灭菌或密闭包装；实验室内严禁进食饮水。§（二）装备保障1.生物安全柜

一级生物安全柜：由外向内的单向气流，只保护人体，不能保护实验材料。可用于痰涂片操作。

二级生物安全柜：有向内气流和经高效滤器的垂直气流，可保护人体和实验材料不受污染。用于病原分离、培养。2.高压灭菌器：运行状态良好。3.消毒防护物品等。§（三）技术保障1.双人原则，不允许单人操作1、2类病原。2.入口处应有危险警示标记，并标明所操作的微生物的种类。3.培训考核上岗，掌握有关技术操作要领，熟悉规章制度，适应工作环境。4.完备的管理方法，技术操作规范。5.良好的工作行为可减少生物危害风险。§六、实验室生物安全水平分级(一)根据所操作的生物因子的危害程度和采用的防护方法，将实验室生物安全防护水平（biosafetylevel，BSL）分为4级，１级防护水平最低，4级防护水平最高。(二)以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表达实验室的对应生物安全防护水平。(三)以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表达动物实验室的对应生物安全防护水平。§七、实验室管理制度(一)实验室管理规章制度：涉及培训制度、准入制度、健康监测报告制度、个人良好行为制度、意外事故报告制度等。(二)原则操作程序：涉及实验废弃物处置原则操作程序、进出实验室原则程序、菌毒种使用原则操作程序、实验室消毒原则操作程序、意外事故解决原则操作程序及多个仪器设备和实验原则操作程序等。结核病实验室安全防护§

各级结核病细菌学实验室必须对工作人员予以充足保护，同时控制对环境造成的污染。在实验室从事实验或工作的人员，应当理解可能接触到的各类危险物品的种类和性质，明确这些危险物对本身和别人及环境含有的潜在威胁。应严格按照实验室操作规程做好安全防护。§一、实验室中的分枝杆菌及分枝杆菌气溶胶

结核病实验室工作人员，在分枝杆菌检查过程中，会接触到多个潜在感染源标本和多个危险物，特别是许多操作易产生分枝杆菌气溶胶。含有结核分枝杆菌的微滴核（1-5微米）通过呼吸进入人体肺泡，能够黏附在肺泡内生长繁殖。因此，首先要对实验室中生物危险物产生的途径和存在的地点有充足的认识，方便明确生物安全防护的环节。§(一)分枝杆菌存在的地点

1、多个临床标本，普通是痰，胃或支气管灌洗液、脑脊液、尿液等。2、被污染的操作台、器械、仪器、试剂等。3、收集的结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌菌株等。4、细菌学实验室的部分区域。§(二)产生分枝杆菌气溶胶1、实验室内可疑肺结核患者痰标本的采集。2、样本的制备和涂片的火焰固定。3、分离培养或接种培养物。4、用火焰烧灼接种环。5、使用移液器混合培养物。6、培养管或培养瓶中含有培养物的滴落物。7、溢出的分枝杆菌悬浮液。8、高速混合含有分枝杆菌的液体。9、转移液态培养物和上清液，或培养液、上清液的倾倒。10、离心过程中离心管的破碎。11、用做原代培养所需的组织匀浆。§二、安全防护(一)严格恪守实验室安全操作规程，任何时侯都要警惕分枝杆菌气溶胶的产生。实验室的技术人员必须通过生物安全培训后方可上岗。(二)实验室应严格限制非实验人员进入，减少实验室内外交叉生物污染。完毕实验工作离开实验室，要关好门窗。(三)进入实验室应避免携带非必需物品。(四)进入实验室，工作人员应穿着工作服，操作时应穿戴防护隔离衣、口罩、帽子和手套，长发者应将头发装束在帽子内。(五)实验过程中绝对严禁吸烟、饮食等，不要以手抚头面部等。(六)实验前须启动紫外线灯对实验室和操作区域进行照射消毒1小时以上；实验结束后，立刻启动紫外灯进行照射消毒2小时以上。(七)任何实验的开始和结束后，操作人员要用70%酒精浸泡双手或认真擦后，用清洁剂或清水洗净。(八)每次实验结束后，必须清理好实验台，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗实验台面。(九)实验室中的生物危险品要根据检查项目和性质不同，局限在对应的实验区间，不得随意将其带到其它的实验室。(十)实验室内任何微生物的样本，废弃物都必须经高温高压灭菌后，方可按普通垃圾解决。§三、安全保障

(一)首先各级实验室应按等级规定完善实验设施，如简易安全柜内的抽气排风功效、紫外灯消毒功效，生物安全柜维护与除菌滤膜定时更换等。

(二)实验室采集病人痰标本时应在户外进行，避免因病人咳漱造成室内气溶胶污染。

(三)普通实验室应注意气流方向，实验过程中尽量避免强气流变化而产愤怒溶胶（如﹕涂片、染色过程中）。

(四)细菌的分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作，各级实验室均应在简易安全柜或生物安全柜中进行。

(五)使用接种环进行操作时，接种环应在工作灯的内焰中燃烧，以避免菌液或菌块飞溅。

(六)稀释菌液时，吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部，小心操作避免产愤怒泡或气溶胶。(七)使用注射器加样时，用过的针头切勿再重新入套或拔开注射器与针头，应直接放入锐器收集器，以免划破皮肤造成接种感染。(八)菌株库要设专人管理，并按照国家微生物菌毒种管理方法执行。(九)进行毒菌操作过程中，不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域，避免由于粗心扩大污染范畴。(十)实验结束后，操作过程中全部可能与生物危险物接触或被污染的实验器械和物品，能够高压消毒的必须高压消毒，不能进行高压消毒的设备、仪器，应使用有效的消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。(十一)实验中发生意外污染状况，应立刻告知主管人员并做好解决污染物和对应区域的准备，不得私自采用其它严禁的办法进行消毒解决。(十二)实验室主任应制订规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊规定(如，通过免疫接种)的人，才干进入实验室。(十三)操作致病性微生物时，实验室入口处应贴有生物危险标志，并显示下列信息：有关病原、生物安全级别、免疫接种规定、研究人员姓名、电话号码、在实验室中必须佩带的个人防护设施、出实验室所规定的程序。(十四)实验室主任为实验室人员特别制订的原则操作程序或生物安全手册中，应涉及生物安全程序。对于有特殊风险的人员，规定阅读并在工作及程序上遵照执行。(十五)实验室主任确保明验及其辅助人员接受适宜的培训，涉及和工作有关的可能存在的风险、避免暴露的必要方法和暴露评定程序。（十六）实验室所用任何个人防护装备应符合国家有关原则的规定。实验室应确保含有足够的有适宜防护水平的清洁防护服供使用。还应穿戴其它的个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。(十七)解决样本的过程中易产生高危害气溶胶时，规定同时使用适宜的个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子的气溶胶，应在适宜的生物安全柜中操作。§

(十八)实验用鞋应舒适，鞋底防滑。应用皮制或合成材料的不渗液体的鞋类。在从事可能出现漏出的工作时可穿一次性防水鞋套。在实验室的特殊区域（例如有防静电规定的区域）或BSL-3和BSL-4实验室规定使用专用鞋（例如一次性或橡胶靴子）。结核病实验室废物解决§一、实验室废弃物解决的目的：

(一)将操作、收集、运输、解决及处置废弃物的危险减至最小；

(二)将实验室废弃物对环境的有害作用减至最小。§二、实验室污物解决及消毒

(一)实验室含有生物危险物的临床标本及被污染的一次性用品，实验完毕后，应在操作台或实验区域内以紫外灯近距离照射消毒2小时以上，再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。

(二)可重复使用的实验用品及器材，完毕实验后，应在操作台或实验区域内经紫外灯近距离照射消毒2小时以上后，再交有关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。(三)实验用的试管、吸管、注射器，须装在加盖不漏的容器内，经高压灭菌后取出。

(四)培养物或实验室垃圾，在丢弃前必须经高压消毒和紫外灯近距离长时间照射解决。不允许积存垃圾和实验室废弃物。已装满的容器应定时运走。在去污染或最后处置之前，应寄存在指定的安全地方，普通在实验室区内。

(五)实验室废弃物应置于适宜的密封且防漏容器中安全运出实验室。有害气体、气溶胶、污水、废液应经适宜的无害化解决后排放，应符合国家有关的规定。(六)实验过程中，如标本或含标本的前消化解决液被打翻污染了操作台或地面，应以吸满70%酒精的卫生纸覆盖污染区，15分钟后来卫生纸方可移去。(七)实验室内未经消毒的污水，严禁直接排入公共排水系统，更不允许混入居民生活垃圾。§三、意外事故的解决

(一)如果发生意外，必须立刻告知实验室主管人员，并在有关人员的指导监督下对出事现场进行解决，绝对严禁未经报告而私自对出事现场予以非规范的解决。(二)实验过程中，如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等状况发生，应立刻停止实验工作进行紧急解决，更换被污染的实验服，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒或酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。(三)如果发生菌液溢出，含菌种的培养管破碎等，造成中、小面积污染，可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区域，边沿用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小时以上（其间适量加溶液避免干燥），再经紫外灯近距离（1米内）照射2小时以上；被污染的器械、容器等立刻浸泡于70%酒精中2小时以上，实验完毕后再进行高压消毒解决。(四)如果发愤怒溶胶污染或大面积污染，应立刻停止实验并关闭实验室，对污染区域进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区进行24小时封闭空气熏蒸消毒（乙醛消毒法﹕5ml乙醛＋2g高锰酸钾/m3空间）。§(五)绝对严禁使用的事故解决办法﹕1.任何有可能造成污染面积扩大的去污办法，如使用70%乙醇或甲酚皂液擦洗被污染的区域。2.直接用火焰对未经任何解决的污染地面、操作台、器械等进行烧灼解决。3.使用消毒效果未经证明的消毒剂进行消毒。4.使用低浓度的消毒剂和紫外灯进行短时间、长距离的照射。结核病职业暴露§一、卫生服务人员与职业暴露

卫生服务人员(health-careperson,HCP)是指在卫生服务部门、实验室以及公共安全环境下其活动与结核病病人或其痰液/体液接触的有关人员。