脉管通胶囊对血栓闭塞性脉管炎大鼠模型的治疗作用

脉管通胶囊对血栓闭塞性脉管炎大鼠模型的治疗作用

血栓形成性脉管炎（tao）是一种发育于年轻男性四肢远端中小动脉炎的节段性、炎症和梗死疾病的类型。临床发现自制药脉管通胶囊对TAO确有较好的疗效,为了探讨该药作用机理,本文从体征变化、病理切片血栓分级、血液流变学及血浆TXB2、6-K-PGF1α等方面观察了该胶囊对血栓闭塞性脉管炎大鼠模型的影响,并初步探讨其作用机理。现将结果报告如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1动物雄性SD大白鼠72只,7月龄,体重(302±17)g,由湖南中医学院实验动物中心提供。1.1.2试剂与仪器脉管通胶囊(由当归、鸡血藤、丹参、黄芪、赤芍、郁金、牡蛎、皂角刺等14味药物组成,湖南中医学院第一附属医院药剂科制备,批号:980806,0.5g?/粒)、复方丹参片(广东万盛花城制药厂生产,0.3g?/片)、月桂酸(上海化学试剂采购供应站分装厂提供)、ZT快速医用胶(浙江兴华医疗制品厂)、血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α放免试剂盒(购自苏州医学院血栓研究所,批号:0723-9702)。1.2大鼠模型的制备72只大鼠随机分为假手术组、病理模型组(简称模型组)、复方丹参片对照组(简称丹参片组)、脉管通胶囊低剂量组(简称脉通低组)、中剂量组(简称脉通中组)和高剂量组(简称脉通高组)共6组,每组12只。参照文献方法制作大鼠TAO模型:氯铵酮100mg?/kg腹腔注射麻醉,游离股动脉,夹闭阻断血流,假手术组注入0.2mL生理盐水,其余大鼠注入0.2mL月桂酸,ZT快速医用胶封闭针孔。造模3d后假手术组给予蒸馏水灌胃,丹参片组灌胃复方丹参片悬液,脉管通3剂量组灌胃脉管通胶囊悬液,复方丹参片组0.243g?/(kg·d),脉管通胶囊低、中、高剂量组分别为0.405g?/(kg·d)、0.81g?/(kg·d)、1.92g?/(kg·d),低剂量为临床等效剂量。各组均按1mL?/200g体重剂量灌胃,连续30d。1.3指标检测1.3.1病变程度及范围观察大鼠患肢皮肤温度、颜色、动脉搏动、患肢肿胀程度、坏疽和木乃伊化的病变程度和范围。参照王军等采用的分级标准分级,Ⅰ级:病变局限于趾甲部;Ⅱ级:病变局限于趾部;Ⅲ级:病变局限于足爪部;Ⅳ级:病变局限于膝关节以下;Ⅴ级:病变发展到膝关节以上。1.3.2血栓分级标准取大鼠右下肢,10%福尔马林液固定3d后用10%硝酸脱钙,足趾、踝关节上、下及股部4个部位横断切片,HE染色,对血栓进行分级,0级:无血栓;Ⅰ级:1个血栓;Ⅱ级:2～3个血栓;Ⅲ级:4个以上血栓。1.3.3血液流变量检查包括全血粘度、血浆比粘度、红细胞压积、红细胞电泳时间,由湖南中医学院第一附属医院协助测定。1.3.4血浆txb2、6-k-pgf1检测放射免疫法测定。1.4统计方法计数等级资料采用秩和检验,计量资料采用单因素方差分析处理。2结果2.1儿童性动物手术后反应大鼠经股动脉注入月桂酸造模后,约5min后开始出现患肢足爪部变苍白继而青紫,皮肤温度降低,动脉搏动减弱或消失,次日受累的足趾变黑,并逐渐向上发展,形成坏疽和木乃伊化。少数动物手术后表现为患肢疼痛、跛行和曳行现象。2周内多数大鼠出现患侧坏疽部分脱落,模型组的病变最严重,脉通中、高剂量组的病变最轻,与丹参片组比较有显著性差异(P<0.05),而假手术组未出现病变表现,各组与假手术组比较均具有非常显著性差异(P<0.01),见表1。2.2血栓形成状态假手术组手术区组织均有轻微粘连,有轻度炎细胞浸润,以淋巴细胞为主,但股动脉均呈通畅状态,内膜光滑,血管内无血栓形成;经造模后TAO模型大鼠股动脉内均有不同程度的血栓形成,脉通3个剂量组与丹参片组大鼠的血栓数量均明显减少,程度显著降低,其中脉通中、高剂量组未出现血栓机化现象,血栓再通次数增多,结果见表2。2.3各组小鼠血清胞技术指标比较,表现为假手术组与模型组相比,部分血液流变值差异有显著性(P<0.05,P<0.01);实验组与模型组比较,全血比粘度、血浆比粘度明显降低(P<0.05),但红细胞压积、红细胞电泳时间变化不明显;脉通高组与丹参片组比较,全血比粘度低切值明显降低,差异具有显著性意义(P<0.05),结果见表3。2.4各组患者6-k-pgf1、txb2、t/k比值对模型组与假手术组比较,血浆6-K-PGF1α含量降低,TXB2、T/K比值明显升高(P<0.01);脉通各剂量组与模型组相比,6-K-PGF1α含量明显升高,TXB2、T/K比值降低(P<0.01),与丹参片组比较,T/K比值降低(P<0.01);丹参片组与模型组比较,T/K比值降低(P<0.01),结果见表4。3脉管通胶囊对患者血流变性指标的影响血栓闭塞性脉管炎属中医“脱疽”范畴。脉管通胶囊是针对本病经络阻隔、气血阻滞的基本病理,在《医林方》当归活血汤基础上加减组方而成,可通血脉之瘀滞,促进血栓机化、吸收。由于血液处于高凝状态,血管内血栓形成,造成微循环障碍是血栓闭塞性脉管炎发病的基本病理特点。本实验研究也发现造模后均有不同程度的血栓形成,而经脉管通胶囊治疗后血栓数量减少,程度降低,中、高剂量组未出现血栓机化现象,血栓再通次数增多,表明以活血化瘀通脉之法对本病确有疗效。研究结果提示脉管通胶囊对血液流变指标中全血比粘度、血浆比粘度有明显改善,但红细胞压积、红细胞电泳时间变化不明显,与关于TAO患者血粘度增高主要与血浆粘度增高和红细胞变形能力低有关,非红细胞数目增多和红细胞压积增高所致的报道是一致的。TAO患者TXB2含量显著升高,TXA2/PGI1α的值显著升高,表明TAO患者TXA2-PGI2系统的失衡加重和促进了TAO的形成和发展,而6-K-PGF1α含量既反应血小板聚集情况,更可反应血管内皮的抗血栓功能。脉管通胶囊各剂量组与模型组相比,6-K-PGF1α含量明显升高,TXB2、T/K比值降低,说明该药能改善血管的抗血栓功能。脉管通胶囊以四物汤(当归、生地、赤芍、川芎)活血通脉,改善血液循环,促进受伤之络脉恢复;并用丹参、全蝎、三棱、乳香活血祛瘀;桑枝、