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文档简介

1.2

基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作流程

目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因目的基因的获取目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗逆性基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。1）从基因文库中获取目的基因2）利用PCR技术扩增目的基因3）人工合成目的基因的获取方法反转录法化学合成法1）从基因文库中获取目的基因基因文库的概念：将含有某种生物不同基因的很多的DNA片段，导入到受体菌群中储存，每个受体菌含有这种生物不同的基因。基因文库的分类基因组文库部分DNA文库（1）构建基因组文库：

将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，将DNA切成一定大小的DNA片段，然后将这些片段分别与载体连接起来，导入受体菌中储存，这个群体包含了这种生物的所有基因。通过对受体菌的培养而储存基因（2）构建cDNA文库用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段（也叫cDNA），与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体叫做这种生物cDNA文库。cDNA合成过程

基因组文库和部分基因文库原核细胞的基因结构

RNA聚合酶的作用是催化DNA转录为RNA。真核细胞的基因结构编码区是间隔的、不连续的。其中，能够编码蛋白质的序列叫做外显子，一般不能够编码蛋白质的序列叫做内含子。信使RNA的加工：编码区下游编码区上游成熟的信使RNA转录加工初级转录物剪切内含子转录部分拼接外显子转录部分真核生物基因表达的调控如何从基因文库中得到我们所需的目的基因？根据基因的有关信息：如基因核苷酸序列或表达的产物或基因的功能等等。（课本p9）2）利用PCR技术扩增目的基因原理:DNA双链复制前提:要有一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列，以便合成引物。5/3/G—GT—C3/5/G—AC—C5/3/引物ⅡG—G1.加热至90-95度：DNA解链,氢键断裂；2.冷却至55-60度：引物结合到互补DNA链；3.加热至70-75度：Taq酶从引物起始进行互补链的合成5/3/A—G引物Ⅰ利用PCR技术扩增目的基因3）人工合成如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。反转录法化学合成法基因表达载

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