药物分析(人卫版)第16章

第十六章药品质量控制中的现代

分析方法与技术

基本要求

毛细管气相色谱分析法

手性药物的液相色谱分析法

核磁共振光谱分析法气相色谱-质谱联用技术返回主目录基本要求一、熟悉毛细管气相色谱法、手性药物的高效液相色谱法的基本内容及其在药物分析中的应用。二、熟悉核磁共振光谱分析法的定量方法及其在药物分析中的应用。三了解毛细管电泳分析法、红外光谱法、联用技术在药物分析中的应用。返回

毛细管气相色谱法使用的色谱柱是空心的毛细管柱，叫开管柱：固定液涂渍或固定化在柱管内壁上，而载气和其中的样品从中心的通道上通过。柱材料主要是熔融石英（FSOT）。

一、高分辨气相色谱法（一）色谱柱

1．毛细管柱的类型：

柱类型柱内径柱长液膜厚度

普通开管柱0.2～0.53mm5～60m0.1～1.0μm

壁涂开管柱

多孔层开管柱

担体涂渍开管柱

微内径开管柱﹤100μm

大内径开管柱0.32mm1μm或5μm

2．毛细管柱的选择

常用的固定液有：SE-31、OV-1、SE-54、SE-52、OV-1701、Carbowax20M。

柱的选择：根据样品组分的沸点，一般地，相差2℃或2℃以上的组分，采用非极性毛细管柱分离；若沸点相差在2℃以内的组分，则需在极性较大的毛细管柱上分离。

3．毛细管柱的性能评价

评价指标：分离效率、表面惰性、热稳定性。

评价方法：在一定的色谱条件下，分离各种测试物质，获得的特征性数据和峰对称性，以此来评价柱效和表面活性。在测定了柱效和表面活性之后，用流失速率试验来评价热稳定性。

（二）进样方式

分流进样：使用方便，对分流比、进样温度

样品和载气的情况、进样体积和

浓度、进样重复性需要注意。

不适于痕量分析和宽沸程样。

适合大多数类型的样品，样品浓浓高、各组分的浓度相近

不分流进样：须利用溶剂效应或冷阱，操作较难

特别适用于痕量分析和宽沸程样品

柱头进样：必须使用外径为0.17～0.23mm的

细针，柱内径必须大于0.32mm,

不能通过隔垫进样，缓慢进样

对热不稳定、稀的和宽沸程样品较

理想；能给出定量结果

非挥发物在柱的中积累导致柱变性

和柱效损失

直接进样：样品无须事先浓缩，进样器温度可较低，载气消耗量小，分析所需样量小适用于浓度范围要比不分流进样宽一个数量级以上的样品，有利于对热不稳定的样品；当样品中含有挥发性低的组分时，难于定量分析

（三）应用示例----人尿中劳拉西泮的检测

1.测定意义：劳拉西泮(简称LRZ)上用为催眠、镇静和抗癫痫药物,常被犯罪分子作为麻醉药物用于麻醉抢劫等麻醉后犯罪。为了确证这类案件的性质,经常需要对受害人的血、尿等体液中麻醉药物或其代谢物进行检测。人体摄入该药后其血液中药物浓度较低,且犯罪分子所用药量一般不使受害人死亡,而且此类案件一般报案较迟，因此血中药物浓度较低,对其检测较为困难。该药主要以葡萄糖醛酸苷的形式由尿液排泄。

2.色谱条件：HP-5毛细管柱(30ｍ×0.32mm,膜厚0.1μｍ)。氮磷检测器,不分流进样(阀关闭时间0.75min),进样口温度:280℃,柱温:200℃(1min)20℃/min280℃(15min),载气为高纯氮(2.2ｍml/min),尾吹气为高纯氮(10ml/min)。3.样品预处理----酶解及萃取

取检尿1ml,加10mg/L的羟乙基氟西泮(HEF)标准工作液10μl,再加pH4.8的乙酸盐缓冲液50μl及β-葡萄糖醛酸苷酶溶液0.1μl,置于55℃水浴中水解4ｈ冷至室温后加pH10.8的碳酸盐缓冲液0.5ml及乙醚5ml,涡旋2min,离心,分取上层有机相4ml置于经硅烷化处理的带尾管的鸡心瓶中,加甲醇0.4ml,于40℃水浴中挥发至约0.1ml,进样1μl进行GC分析

4.方法学评价

（1)选择性:空白尿1ml及空白尿1ml加LRZ和HEF标准液,经酶解、萃取后进样分析所得色谱图表明尿中杂质不干扰检测.

（2)线性试验:用空白尿配制不同浓度的LRZ标准液进行酶解、萃取、进样分析,将LRZ与HEF色谱峰面积的比值与LRZ在尿液中的质量浓度进行线性回归,得到工作曲线方程:Y=3.1×10-3X–3.0×10-3,ｒ=0.998。LRZ在尿中的浓度为50～500μg/L范围内呈良好的线性.（3)萃取液的选择及萃取率:作者进行了多种溶剂萃取LRZ的研究,由经萃取与未经萃取所得色谱峰面积比计算LRZ的萃取率,得(mean±SD)为(83.4±3.1)%。

（4）检出限:以3倍信噪比计算检出限,得本法的检出限为5μg/L。

（5)回收率:由工作曲线计算LRZ的质量浓度及其回收率,得(mean±SD)为(103.3±5.1)%。

5.尿液检测:志愿者口服LRZ2ｍｇ后,于32小时内收集其排泄的尿液进行检测,LRZ于9h达尿中最高浓度为444μｇ/L,检测结果表明,本方法适合于麻醉后犯罪案件中ＬＲＺ的检测要求。

返回二、手性药物的高效液相色谱法

（一）手性药物拆分机理

为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映体，就要提供一种手性源，使待拆分的对映异构体（样品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个非对映异构分子的络合物。在对映体拆分理论中颇为流行的是“三点手性识别模式”。

（二）手性HPLC拆分法的类型

直接法：柱前手性衍生化法

间接法：手性流动相拆分法、手性固定相拆分法

1．柱前手性衍生化法：对映体混合物以手性试剂作柱前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固定相分离。

对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。

常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、固相衍生化试剂。

2．手性流动相拆分法（手性洗脱法或手性流动相添加剂法）：将手性试剂加入流动相中，手性添加剂与样品形成手性络合物。

常用的手性添加剂：配基交换