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文档简介

（1）（3）中，在带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的（MCACLB、氨苄青霉素、WashingBufferElutionBufferIPTG、蒸馏水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠仪器、耗材：摇床、离心机、层析柱、离心管、移液枪、枪头盒、烧杯、棒LBTrytone10g，yeastextract5g，NaCl10g1000mLWashingBuffer：100mMNaH2PO4，10mMTris，8MUrea，pH6.3ElutionBuffer：100mMNaH2PO4，10mMTris，8MUrea，500mMImidazole，pH8.0。IPTG：100mMIPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷：2.38gIPTG溶于100mlddH2O中,0.22μm滤膜抽滤，-20℃保存。通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点，PCR逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。PCRT4DNADH5α，根据重组载体的标志（Amp）作筛以此重组质粒DNABL215mLLB基中（含100ug/mL氨苄青霉素，37℃震荡培养过夜。100ug/mL氨苄青霉素）LB37OD600=0.6-0.8（0.6310ul样品用于SDS分析。mmol/l3712000rpm离心10min，弃上清，菌体沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。去离子水，8mL60min，4℃12000rpm离心30上清样品用于分析。10-15mL/h流速上Ni2+-NTA10ulSDSWashingBuffer10-15mL/h流速洗柱，直至OD2803-4h10ulSDS分析。El

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