中药柴胡及各有效成分对大鼠热反应的影响

中药柴胡及各有效成分对大鼠热反应的影响

柴胡作为一种临床应用广泛的解热药物，具有独特的解热优势，临床上常用于感冒、发热、少阳表面和身体损伤后的感冒，以缓解冷热交换引起的症状。一年。无论是传统中医的方剂,还是现代开发的中成药,从古至今,柴胡作为临床上广泛应用的解表药,被证明其具有很好的解热疗效。但是在现代实验研究中,关于单味中药柴胡解热作用和机制的研究甚少,有些研究只是针对已经开发的柴胡中成药进行简单的药效学初探。鉴于中药柴胡在临床应用中的广泛性和重要性,本实验对柴胡的解热作用、物质基础及机制进行试验研究,对指导临床用药和开发柴胡中成药具有重要意义。1实验动物及分组1.1动物Wistar种大鼠,由山东中医药大学实验动物中心提供,动物许可证号SCXK(鲁)20110003。实验前动物均适应性喂养3天。1.2药物与试剂野生柴胡(山东菏泽泰山中药饮片有限公司生产,批号:120403)。阿司匹林肠溶片(BayerHealthcareManufacturingS.r.l生产,批号:BJ09334)。生理盐水(山东华信制药集团股份有限公司生产,批号:120702E04)。安琪酵母高活性干酵母(安琪酵母股份有限公司生产,批号:121022)。大鼠环磷酸腺苷含量ELISA测定试剂盒(上海江莱生物科技有限公司生产,批号:20130105);大鼠精氨酸加压素含量ELISA测定试剂盒(上海劲马实验设备有限公司生产,批号:20130203)。1.3药物制备采用水蒸气蒸馏法制备柴胡挥发油(相当于生药量447.09g/mL)置冰箱内备用。应用之前需要加入等量吐温-80乳化之后,加蒸馏水配制成所需要的浓度;采用乙醇回流提取法制备柴胡皂苷(相当于生药量为11.7g/mL);水煎法制备柴胡水煎液(相当于生药量1g/mL)。1.4主要仪器DR-01E型数字体温计(武汉科利尔化工有限公司提供);DW-HL668型超低温冷冻储存箱(中科美菱低温科技有限责任公司提供);HC-2518R型高速冷冻离心机(北京科普顺科技有限公司提供);QY-100手动可调移液器(北京青云卓立精密设备有限公司提供);MultiskanMK3型酶标仪[赛默飞世尔(上海)仪器有限公司提供]。1.5实验方法1.5.1柴胡解热作用［2］Wistar雄性大鼠80只,体质量220~240g,常温下喂养3天,每日用体温计测量体温2~3次,间隔1小时,使其适应测肛温操作,减少实验过程中温度对结果的影响。实验当日固定好大鼠,在数字温度计探头上涂抹石蜡插入大鼠直肠4cm,每小时测体温1次,连续测量3次,选取体温在37.0~38.0℃之间、体温变化不超过0.3℃的60只大鼠供实验用,取测量的3次体温的平均值作为基础体温。将实验动物随机分成6组,每组10只,标记后称重。正常对照组背部皮下注射无菌生理盐水10mL/kg;模型对照组、阿司匹林组、柴胡挥发油组、柴胡皂苷组与柴胡水煎液组均背部皮下注射15%干酵母混悬液10mL/kg。致热后4小时测量大鼠体温,同时灌胃给药。正常对照组:生理盐水10mL/kg;模型对照组:生理盐水10mL/kg;阿司匹林组:0.1g/kg;柴胡挥发油组:0.25g/kg;柴胡皂苷组:0.35g/kg;柴胡水煎液组:10g/kg,给药容量均为10mL/kg。首次给药后1小时测量体温,同时再次给药,剂量同前。首次给药后2、3、4小时各测量体温1次,计算与致热4小时后体温之差。1.5.2柴胡对致热大鼠下丘脑cAMP、脑腹中隔区AVP以及血浆中cAMP及AVP含量的影响将实验“1.5.1”项中大鼠测完最后一次体温后,立即麻醉,每只大鼠均腹腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液1mL,麻醉后,解剖大鼠,股动脉取血2mL,置于加有注射用肝素钠的试管中,混合20分钟,低温离心20分钟,2500r/min,仔细收集上清液,移于EP管中,于-70℃冰箱中保存备用。按照大鼠cAMP和AVP含量ELISA测定试剂盒操作要求进行加样测定。上述实验中大鼠取完血后,迅速取出全脑,冰浴下取大鼠下丘脑和脑腹中隔区脑组织,立刻投入液氮中固定20分钟后存放于-70℃冰箱内保存待测。取大鼠下丘脑和脑腹中隔区脑组织50mg,加入一定量PBS(PH7.4),冰浴中充分匀浆(脑组织与PBS缓冲液比例为1∶9),然后离心15分钟,3000r/min,仔细收集上清,移于EP管中,置于-70℃冰箱保存备用。按照大鼠下丘脑cAMP和脑腹中隔区AVP含量ELISA测定试剂盒操作要求进行加样测定。1.6统计学方法数据采用SPSS17.0软件进行统计分析,计量资料组间差异比较采用单因素方差分析,P<0.05表示差异具有统计学意义。2对致热大鼠cag及vep含量的影响2.1对干酵母致热大鼠体温的解热作用与正常对照组比较,模型对照组升温极显著(P<0.01),说明造模成功;与模型对照组比较,首次给药后1、2小时,阿司匹林组解热作用最为显著(P<0.01),首次给药后3、4小时,解热作用显著(P<0.05);与模型对照组比较,首次给药后各个时间段,柴胡挥发油组解热作用极显著(P<0.01);与模型对照组比较,首次给药后1、2小时,柴胡皂苷组解热作用显著(P<0.05),首次给药后3、4小时,解热作用极显著(P<0.01);与模型对照组比较,首次给药后各个时间段,柴胡水煎液组解热作用显著(P<0.05)。见表1。2.2对致热大鼠体内cAMP及AVP含量的影响与正常对照组比较,模型对照组大鼠下丘脑cAMP与脑腹中隔区AVP含量显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,阿司匹林组、柴胡挥发油组、柴胡皂苷组及柴胡水煎液组大鼠下丘脑cAMP与脑腹中隔区AVP含量显著降低(P<0.05)。各组大鼠血浆中cAMP含量相比无显著性差异(P>0.05)。与正常对照组比较,模型对照组大鼠血浆中AVP含量显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,阿司匹林组与柴胡挥发油组大鼠血浆中AVP含量显著升高(P<0.01);与发热模型组比较,柴胡皂苷组大鼠血浆中AVP含量显著升高(P<0.05);与发热模型组比较,柴胡水煎液组大鼠血浆中AVP含量无显著性差异(P>0.05)。见表2。3热法学者对柴油性成分与热作用的认识由国内外的研究动态可知,柴胡的解热药效是确定的,但解热的物质基础和解热机制还是存在着诸多的分歧。薛燕等［3］认为柴胡的主要解热物质基础是挥发油、皂苷和皂苷元成分。张云波等［4］认为柴胡的主要解热物质基础尚不明确,或者是所有成分综合作用的结果。张云波等［4］认为柴胡的解热机制是多种途径和药理作用综合的结果。刘云海等［5］认为柴胡解热是一