连钱草提取物抗豚鼠离体回肠平滑肌的实验研究

连钱草提取物抗豚鼠离体回肠平滑肌的实验研究

连草是嘴唇科植物的活血丹glechoma（nakai）kubar。干燥的完整草具有润湿、解毒、散瘀、止血的功能。主治尿路感染、疳积、黄疳、感冒、肺痈、咳嗽、小儿惊风、跌打扭伤、骨折、风湿性关节炎。我国大部分省(区)有栽培。在湖北省民间常用于腹泻的治疗,具有较好的疗效。为了探讨连钱草治疗腹泻的作用机理,本研究观察了连钱草提取物对豚鼠离体回肠平滑肌的影响,现将结果报道如下。1材料表面1.1实验动物健康豚鼠,体重250~350g,♀♂兼用,由湖北省卫生防疫站动物实验中心提供。1.2连钱草醇提物的制备盐酸异丙嗪(江苏省金坛市制药厂生产,批号9902042),硫酸阿托品注射液(徐州莱恩药业有限公司生产,批号20020625),盐酸肾上腺素注射液(武汉诺佳药业集团股份有限公司生产,批号20011001)。连钱草为自行采集,并经湖北中医学院中药鉴定教研室陈家春教授鉴定。(1)连钱草水提物的制备:取适量连钱草干品,加蒸馏水浸泡30min后加热煮沸,开始用强火,沸腾后改用文火,30min。搅拌,趁热过滤,药渣再加蒸馏水同法煮沸后30min过滤,合并滤液,水浴浓缩至100%(含生药1g/ml)备用。(2)连钱草醇提物的制备:取连钱草干品适量,加95%的乙醇于圆底烧瓶中,浸泡6h后水浴加热回流1h,趁热过滤,药渣再用75%乙醇加热回流1h,过滤,合并滤液。减压回收乙醇浓缩至100%(含生药100g/100ml)备用。1.3j501型超级升温水浴锅LMS-2B二道生理记录仪(成都仪器厂):YJ501型超级恒温水浴锅(上海跃进医疗器械厂);Bs200s电子天平(Sartorins公司);旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。2方法和结果2.1剖腹分离、纯化健康豚鼠,(体重300±50g)雌雄不限。用木锤敲击动物头部致昏,立即剖腹取出回肠,小心分离去粘膜组织,随后用台氏液将肠内容物洗净,并将肠管分剪成1~2cm长的小段,置于20℃台氏液中备用。2.2有关海豚回族肌肉的函数2.2.1连钱草水提物对lms-2m肠道活动力的影响将上述备用的回肠标本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麦氏浴槽内,通入O2,恒温(38±0.5)℃,张力负荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理记录仪描记运动曲线,稳定后加入不同浓度的连钱草水提物,观察给药前后回肠运动的收缩幅度、频率、张力的变化,比较给药前后的肠道活动力(肠道活动力=平均强度×频率,单位:g/min),结果进行t检验(见表1)。由表1可见,不同浓度的连钱草水提物(0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.3mg/ml)对豚鼠离体回肠平滑肌具有显著的兴奋作用。2.2.2连钱草醇提物对小鼠肠道活动力的影响将上述备用的回肠标本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麦氏浴槽内,通入O2,恒温(38±0.5)℃,张力负荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理记录仪描记运动曲线,稳定后加入不同浓度的连钱草醇提物,观察给药前后回肠运动的收缩幅度、频率、张力的变化,比较给药前后的肠道活动力,结果进行t检验。实验结果见表2。由表2可见,不同浓度的连钱草醇提物(0.05mg/ml,0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.3mg/ml)均能显著抑制豚鼠离体回肠平滑肌的活动。2.3有关各方在动物肠道平滑肌中的受体作用2.3.1肠道活动力的测定—连钱草水提物对豚鼠回肠平滑肌细胞受体的作用:将上述备用的回肠标本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麦氏浴槽内,通入O2,恒温(38±0.5)℃,张力负荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理记录仪描记运动曲线,稳定后加入阿托品、盐酸异丙嗪等各类拮抗剂,待其稳定后加入连钱草水提物,观察两次给药前后回肠运动的变化,比较给药前后的肠道活动力,结果进行t检验。实验结果如表3。由表3可见,连钱草水提物能显著拮抗阿托品和肾上腺素对离体豚鼠回肠平滑肌细胞受体的抑制作用(**P<0.01),而不能拮抗盐酸异丙嗪的抑制作用。2.3.2肠道活动力的测定将上述备用的回肠标本,置于盛有10ml的Tyrode′s液的麦氏浴槽内,通入O2,恒温(38±0.5)℃,张力负荷1g,平衡30min,用LMS-2B二道生理记录仪描记运动曲线,稳定后加入乙酰胆碱、组胺和BaCl2等各类激动剂,待其稳定后加入连钱草醇提物,观察两次给药前后回肠运动的变化,比较给药前后的肠道活动力,结果进行t检验。实验结果见表4。结果可见,连钱草醇提物能够显著拮抗乙酰胆碱、组胺BaCl2对离体豚鼠回肠平滑肌细胞受体的激动作用(P<0.001)。3连钱草醇提物现已证明,胃肠运动的调节由交感神经、副交感神经系统控制。目前研究认为胃肠道上主要存在胆碱能M受体、肾上腺素α和β受体、组胺受体、5-HT受体及多种胃肠激素受体。本研究发现连钱草水提物能明显拮抗阿托品与肾上腺素对豚鼠离体回肠平滑肌的抑制作用,不能拮抗盐酸异丙嗪的抑制作用,而连钱草醇提物能明显的拮抗组胺、乙酰胆碱和BaC