复方酮康唑凝胶的制备及质量控制

复方酮康唑凝胶的制备及质量控制

丙酮醇是咪唑类广泛的抗真菌药物，对不同类型的细菌、酵母菌和皮肤细菌都有很强的抑制作用。对局部和全身真菌感染的治疗效果最好。曾有酮康唑霜乳膏、洗剂、滴耳剂、搽剂等的报道。笔者在处方筛选的基础上,采用酮康唑为主药,辅以尿素溶解角质层以利于酮康唑的渗透;同时以月桂氮酮作透皮促进剂;用高分子材料卡波姆-940为凝胶基质,用三乙醇胺调节稠度,甘油作保湿剂同时具有防腐作用,制成了复方酮康唑凝胶剂。并用高效液相色谱法(HPLC)测定其中酮康唑的含量,经临床应用疗效显著,现报道如下。1药品、化学品和仪器Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Cary-100紫外分光光度计(美国Varian公司);PB20酸度计(德国赛多利斯公司);BT25S精密电子天平(德国赛多利斯公司);酮康唑对照品(中国药品生物制品检定所,含量99.9%);甲醇(色谱用);乙醇(分析纯);重纯化水(本院制剂室自制);尿素(药用);月桂氮酮(药用)。2处方和准备2.1月桂氮酮纯化水酮康唑5.0g,尿素10.0g,月桂氮酮2.0g,卡波姆-9403.0g,甘油30mL,三乙醇胺适量,纯化水加至100g。2.2化合物的溶解取卡波姆-940加甘油充分搅拌成糊状,加入溶解好的尿素水溶液搅拌使成胶浆液,用三乙醇胺调节pH值,加入月桂氮酮搅匀。另取酮康唑加适量乙醇,水浴加热(温度不超过70℃)使其溶解。在不断搅拌下加入到上述胶浆液中,最后加水至全量,搅匀即得。3质量控制3.1外观本品为无色或淡粉红色半透明半固体凝胶,外观均匀细腻,稠度适中,涂展性好。3.2酮康唑橙红色沉淀的制备酮康唑:取本品1g,加(9→1000)盐酸液5mL,搅拌,使酮康唑溶解后过滤,取滤液,加碘化铋钾试液,生成橙红色沉淀。尿素:取本品1g置试管中,加氢氧化钠试液,加热即有氨臭,并能使湿润的红色石蕊试纸变蓝。3.3检查3.3.1ph值取本品5g置烧杯中,加水25mL搅拌均匀,测得pH值为6.5～7.0,符合规定。3.3.2卫生考试随机抽取3批样品,按照《中华人民共和国药典》2005年版二部附录第93页检验,真菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等均符合规定。3.4酮康唑含量测定取酮康唑对照品配成一定浓度的溶液,在200～400nm范围内进行扫描,结果在242nm处酮康唑有最大吸收,空白基质在此波长处也有吸收,干扰测定,故采用HPLC法测定酮康唑的含量。3.4.1测定条件及色谱图色谱条件:流动相:甲醇-水(75:25),流速1.0mL·min-1,检测波长242nm,在此色谱条件下,配制酮康唑对照品溶液(10μg·mL-1),取复方酮康唑凝胶剂适量配制样品溶液及不含酮康唑的附加成分的溶液,各进样20μL,结果酮康唑的保留时间约为5.6min,理论塔板数为5182,与杂质的分离度为3.5。结果见图1。3.4.2标准曲线及线性范围精密称取酮康唑对照品20mg(含量99.9%)置100mL容量瓶中,加乙醇水浴加热使其溶解,加乙醇至刻度,摇匀,精密量取此液2,3,4,5,6,7,8mL置100mL容量瓶中,加乙醇至刻度摇匀,然后在“3.4.1”项色谱条件下进样20μL测定峰面积,将测得的峰面积对浓度进行线性回归,结果回归方程为A峰=27.465C-1.820(r=0.9999),线性范围4.0～16.0μg·mL-1。3.4.3精密度实验取高、中、低3种浓度的标准溶液,分别在日内及日间进行测定,每个浓度测5次,结果日内RSD为0.86%,日间RSD为1.02%。3.4.4加样回收率试验精密称取酮康唑适量,按模拟样品配制复方酮康唑凝胶剂50g,精密称取模拟样品2g,用乙醇水浴加热使酮康唑溶解,并加乙醇至100mL,摇匀过滤,取滤液按“3.4.1”项下的色谱条件进样20μL进行测定,将测得的峰面积代入回归方程计算浓度,其结果平均回收率99.5%,RSD=0.80%。见表1。3.4.5样品含量测定精密称取样品2g,用乙醇水浴加热使酮康唑溶解,并加乙醇至100mL,摇匀过滤,取滤液1mL,加乙醇稀释成100mL,摇匀,按“3.4.1”项下的色谱条件进样20μL进行测定,将测得的峰面积代入回归方程计算浓度并计算样品中酮康唑的含量,结果4批自制样品含量分别为97.23%,98.56%,102.45%,101.36%。4稳定实验4.1耐寒试验取包装好的样品4盒,其中2盒置60℃恒温干燥箱恒温6h,另2盒置-15℃冰箱24h,结果凝胶无分层现象。4.2离心实验取样品10g,装入带刻度的离心管中,2500r·min-1离心30min,结果凝胶无分层现象。4.3相对湿度取包装后成品3批,置于温度为(30±2)℃,相对湿度(60±5)%环境下,分别在1,2,3,6个月末取样考察性状及含量变化等,结果未见酸败、变色、分层等,含量均符合要求。5安全实验5.1般临床应用指标实验目的:观察家兔完整皮肤及破损皮肤短时间接触复方酮康唑凝胶剂所产生的急性毒性反应。实验材料:成年健康日本大耳白兔12只,雌雄各半,由南通医学院药理教研室提供。方法与结果:取健康家兔随机分为3组,每组4只。A组:空白凝胶基质组;B组:小剂量组,临床应用剂量;C组:大剂量组,药物浓度提高1倍。给家兔在右侧背部脱毛50cm2,24h后分别涂药1g,用纱布固定,连续观察1周家兔的行为活动、皮毛光泽、饮食、体重和死亡情况。并与对照组比较,如对完整皮肤无毒性反应,在左侧背部脱毛,用细砂纸在脱毛部位造成擦伤,使皮肤出现密集出血点,在擦伤部位涂药,观察指标同上。结果复方酮康唑凝胶在小剂量组和大剂量组外用时对完整皮肤和破损皮肤家兔的行为活动、饮食、皮毛光泽、体重无任何影响,连续观察14d,家兔无死亡,未出现任何急性毒性反应。5.2阿斯匹林单次给药后大鼠的出现,总黄斑和拾遗即红外热实验目的:观察豚鼠完整皮肤及接触复方酮康唑凝胶所产生的局部刺激反应实验材料:健康成年豚鼠,雌雄各半,由南通医学院药理教研室提供。实验与结果:取豚鼠12只,分为2组。于给药前24h将两侧去毛,一组在左侧去毛区涂临床应用浓度的复方酮康唑凝胶1g,另一组涂临床应用浓度2倍的复方酮康唑凝胶1g,右侧分别涂空白凝胶基质作为对照,用纱布固定,给药24h后,用温水洗去残留凝胶和空白凝胶基质,观察局部红斑和红肿反应,未见明显红斑和红肿反应。然后连续涂药7d,同样观察72h后的皮肤反应,然后在脱毛部位用细砂纸造成擦伤,以同样方法观察皮肤刺激反应,仍未见明显红斑和红肿反应。5.3保肝作用组采用康唑凝胶剂联合其它治疗条件联合治疗实验目的:通过豚鼠皮肤重复接触复方酮康唑凝胶剂,观察皮肤变态反应。实验材料:健康成年豚鼠20只,体重(283±33)kg,雌雄各半,由南通医学院药理教研室提供。方法与结果:将20只豚鼠背部两侧对称脱毛3cm×3cm,雌雄各半,随机分两组,每组10只。A组:复方酮康唑凝胶剂;B组:空白凝胶基质。脱毛后24h在脱毛区分别涂药0.1g,连用3d,第14天再重复1次,以致敏。此后14d(第28天)再给药以激发变态反应,6h后除掉药物,分别在24,48和72h观察,研究表明,复方酮康唑凝胶剂和空白凝胶基质均未使豚鼠皮肤出现红斑、水肿等变态反应。6检测波长的确定本制剂采用高分子材料卡波姆-940为成膜材