病理学技术-特殊染色技术

病理学技术-特殊染色技术大体观察（肉眼观察）组织和细胞学观察（镜下观察）组织化学和细胞化学观察

免疫组织化学观察超微结构观察（电镜观察）流式细胞术图像分析技术分子生物学技术病理学技术结缔组织染色肌肉组织染色糖类染色色素类染色病理内源性沉着物染色病原微生物染色内分泌细胞染色特殊染色结缔组织复合染色法胶原纤维染色网状纤维染色弹性纤维染色结缔组织染色结缔组织（connectivetissue)广泛分布于人体和动物体内，其结构特点是细胞分散，有大量的细胞间质纤维和基质，而化学成分是含有大量的蛋白和多糖。结缔组织一般分为固有结缔组织（其中包括疏松、致密和网状结缔组织等）、软骨组织和骨组织。在病理形态学上用以判定各种组织病变程度与修复情况。对于鉴别梭形细胞软组织肿瘤的来源属于纤维性、肌肉性还是神经性，可用Mallory和Masson三色染色法进行鉴别。结缔组织复合染色Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色（被亮绿所染），肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染)，这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染，肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染，而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小，肌纤维与胞质次之，而胶原纤维具有最大的渗透性。染色原理胶原纤维(collagenfiber)是结缔组织中的三种纤维之一，

分布最为广泛，

其纤维主要是由纤维母细胞产生的一种胶原蛋白绞链而成。此种纤维在HE染色中显示浅红色，

粗细不等，

难以与其它纤维相区别，只有经过特殊的染色法，才能够鉴别。胶原纤维分子中含有碱性氨基酸，

能够与酸性染料进行结合反应，

由于酸性染料具有不同程度的扩散性，

小分子染料扩散性高(如苦味酸)就容易进入结构致密的狭孔组织(如肌纤维)的间隙，

对扩散性低的大分子染料(如丽春红)则只能进入结缔疏松的宽孔组织（胶原纤维）的间隙。胶原纤维染色，常用于鉴定肿瘤的组织来源于纤维细胞、心肌疤痕灶、早期肝硬化、以及其它组织纤维增加或减少等。胶原纤维染色网状纤维(Reticularfiber)是网状结缔组织内的一种纤维，由交错排列纤细的纤维组成，还有大量堆集时则形成致密的网状，

故有网状纤维之称。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，

故又称为嗜银纤维(argentaffinfibres)。其染色的基本原理是由于组织蛋白质与银化合物的结合，

再经过甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及表面的物质。·网状纤维的应用非常广泛，

常用于区别上皮性还是非上皮性来源的恶性肿瘤、血管内皮组胞癌或外皮细胞瘤、恶性淋巴瘤或组织细胞肉瘤、骨异质增生或骨化性纤维瘤、粘液纤维瘤与粘液肉瘤、鉴别脑膜瘤与星形细胞瘤，还可用于判断肝组织的网状支架塌陷破坏或增生的情况。网状纤维染色弹性纤维(elasticfiber)通常被认为是一种凝胶，由随机交联的盘绕肽链组成，其主要成分是由丰富的二硫键(R_s_s_R)组成的糖蛋白，所以又称为弹性蛋白，强嗜酸性易与染色液中的碱基结合。呈平行排列而且也很紧密，在镜下具有折光性，经过特殊染色，就很容易被辨认。弹性纤维常用于鉴别皮肤组织增殖和变化、

呼吸道的支气管扩张、老年性肺气肿的纤维断裂、变性或萎缩、心血管的心内膜弹性纤维异常增殖和高血压小动脉的异常增生、

动脉粥样硬化弹性纤维的崩解、断裂；

肾脏组织和肿瘤组织中的纤维病变，

以及各种实验动物组织中的血管壁纤维损害和增生情况。弹性纤维染色结缔组织染色肌肉组织染色糖类染色色素类染色病理内源性沉着物染色病原微生物染色内分泌细胞染色特殊染色肌组织主要由肌细胞构成，根据结构和功能，又分为骨骼肌、心肌和平滑肌，而前二者的肌纤维含有横纹，所以又称为横纹肌，其基本病变主要是指肌纤维的变性、坏死及修复等。肌组织的特殊染色常用于肿瘤方面的鉴别。包括横纹肌瘤、横纹肌肉瘤和含有成肌细胞的混合性中胚叶肿瘤等，

其共同的病理变化特点是肿瘤细胞中可出现横纹肌纤维，用磷钨酸苏木素(pTAH)即可显示肌纤维成分。

横纹肌组织染色结缔组织染色肌肉组织染色糖类染色色素类染色病理内源性沉着物染色病原微生物染色内分泌细胞染色特殊染色糖原系由多糖衍化而来，是单纯的多糖。在正常的动物和人体的肝脏、心肌和骨骼肌含量最多，存在于细胞浆内。糖原能溶于水，在酶的作用下很容易分解为葡萄糖，而葡萄糖更易溶于水，当机体组织死亡后其糖原又很快分解为葡萄糖，根据糖原的特性，必须及时取新鲜组织用特殊固定液才能把糖原保存下来。糖原染色应用于鉴别空泡状变性，证明石蜡切片HE中所出现的细胞浆内空泡是否糖原被水溶性固定液溶解，还是脂肪被脂溶剂溶解，可进行糖原染色；糖原累积疾病和糖尿病器官组织细胞中也有糖原颗粒沉着；肿瘤组织中的肝细胞癌；横纹肌、平滑肌和软骨肉瘤、汗腺瘤的化学感受器瘤等均有糖原的存在。糖类染色-糖原染色在动物体和人体中的各种腺体及许多器官组织细胞都能制造或分泌粘液物质，

由于物质中含酸基的不同，而又分为中性粘液物质(neutralmucosubstanes)、酸性粘液物质(acidmucosubstanes)，和混合粘液物质(mixedmucosubstanes)，也可称为中性粘多糖、酸性粘多糖和混合性粘多糖。中性粘多糖内含有氨基己糖和游离的己糖基，但不含有任何酸根，故称为中性粘多糖；酸性粘多糖中含有氨基己糖，并含有各种酸根成分称为酸性粘多糖。混合性多糖是显示中性与酸性之间的另一种不同的混合性物质。粘液物质用于一般粘液性疾病的鉴别诊断；

肿瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤、软骨粘液样纤维瘤，横纹肌肉瘤等。糖类染色-粘液物质(粘多糖)染色结缔组织染色肌肉组织染色糖类染色色素类染色病理内源性沉着物染色病原微生物染色内分泌细胞染色特殊染色在组织切片中常可见到各种不同的色素，有些是体内产生，均属细胞代谢的正常产物，有些是在病理情况下过量产生或沉着于异常部位的组织中，有些是外生性色素及沉着物，还有是人为色素及沉着物。无论是从体内产生、体外进入或人为因素所引起存在的物质等，都可以被称为色素。黑色素是一种正常的色素，黑色素是稳定的物质，不溶于水和有机溶剂，在强碱中可以被溶解，也可以通过强氧化剂进行脱色，黑色素细胞中含有硫和酪氨酸酶成分能够与硫酸亚铁和铁氰化钾的离子进行结合，黑色素具有强的还原性，能够将银液内的银离子还原成金属银而呈黑色。黑色素的特殊染色常用于鉴别恶性黑色素瘤、淋巴结肿瘤、色素性神经瘤、皮肤性淋巴结炎、红斑狼疮、神经性黑色素病等。色素类染色结缔组织染色肌肉组织染色糖类染色色素类染色病理内源性沉着物染色病原微生物染色内分泌细胞染色特殊染色一、纤维素染色纤维素(fibrin)又称为纤维蛋白，

它是存在于血液内的纤维蛋白原分子聚合而形成的特殊蛋白质。在病理状态下，

血管内和血管外以及其它组织中，均可见到纤维素沉着物。常见于炎症渗出性改变，

弥漫性血管内凝血

、高血压的小血管壁和一些胶原性疾病的疏松纤维，肾小球的毛细血管腔内和基底膜等均有纤维素的存在。纤维素是特殊的蛋白，在形态上可呈滴状及团块状样物质。它能够与嗜酸性染料进行结合，HE染色呈红色，但是显示的结果较差，辨别较困难，因此可用甲紫、MSB和PAS等染色法以显示纤维素成分。病理内源性沉着物染色二、淀粉样物质淀粉样物质是一种嗜伊红性物质，其性质一般认为属于糖蛋白成分。组织中出现此种物质称为淀粉样变性，可分为原发性和继发性病变，其分布广泛，以浸润的形式多见于肝脏、脾脏、肾脏和肾上腺等，也可见于心脏、神经、肠壁、皮肤，还常用于肿瘤的诊断和鉴别。淀粉样物质的鉴别常用刚果红染色，在偏光显微镜下呈现出特殊的折射。病理内源性沉着物染色结缔组织染色肌肉组织染色糖类染色色素类染色病理内源性沉着物染色病原微生物染色内分泌细胞染色特殊染色微生物(microorganisms)的基本形态可分为细胞形态和非细胞形态。在细胞形态中，

有致病作用真核微生物的真菌等，原核微生物的细菌和螺旋体等。在非细胞形态中的病毒有包涵体和乙肝炎表面抗原等，这些物质经过组织切片和染色，

都能够在光镜下观察到结果。病原微生物染色真菌(fungus)又称为霉菌，其种类较多，常见的致病菌如毛霉菌、曲霉菌、新型隐球菌、放线菌和白色念球菌等，近年来由于抗生素、激素、化疗和免疫抑制剂的广泛应用，使人体的抵抗力低下，导致了发病率增高，因此病理诊断的范围较为广泛，这就更需要提高准确的染色效果。霉菌的基本结构成分是含有较多的粘多糖和蛋白质。这些物质经过适量的氧化剂和通过一定的氧化时间，就能促使糖类结构分子的乙二醇或氨羟基的碳键断开，生成醛类化合物，然后使暴露的游离基与可靠的Schiff(品红醛试剂)和MethenamineSilVer（六胺银）试剂进行结合，再用对应的复染剂来增强组织结构成分的对比度，进而对其做出鉴定。一、真菌染色细菌(bacteria)是常见的一类病原微生物，其体积较小，一般需放大到百倍(油镜)以上才能看到，根据特殊染色方法可以把细菌分为一般细菌和抗酸杆菌两大类。一般细菌常用的方法是选用革兰氏等染色法，所用的碱性染料在与细菌的核糖酸镁盐一蛋白质复合物结合，因此革兰阳性菌摄取结晶紫多且较牢固，其结果呈蓝色或紫色，而革兰阴性菌缺乏或含核糖酸镁极少，即易被酸性复红和中性红等染成红色。

.抗酸杆菌(acidfastbacteria)体内含有脂质、蛋白质和多糖类并由糖脂形成一个蜡质的外壳，能与苯酚碱性复红结合成复合物，这种复合物能抵抗酸的脱色，

所以称为抗酸杆菌。二、细菌染色病毒是最小的非细胞型微生物，当病毒引起疾病的时候，其感染的细胞内可以形成包涵体，而存在于细胞浆和细胞核内，但有时胞浆和胞核内同时可见到包涵体，在一般的情况下，RNA病毒形成胞浆内包涵体，DNA病毒形成核内包涵体。包涵体病毒在常规的HE染色中，对于比较典型的可以见到，形态大小与红细胞相似，胞核一般呈嗜酸性，周围有透明晕，胞浆呈嗜酸性，少部分呈嗜碱性。但是对于疱疹病毒感染时的核内包涵体和麻疹病毒包涵体，须通过特殊染色方法才能得到证明。三、病毒包涵体染色结缔组织染色肌肉组织染色糖类染色色素类染色病理内源性沉着物染色病原微生物染色内分泌细胞染色特殊染色一、弥散神经内分泌细胞染色(diffuseneuroendocrinesystem，DNES)弥散神经内分泌系统的细胞具有细胞化学、病理和超微结构的形态特点。从生物化学方面而言，这些内分泌细胞都能合成和分泌胺，而且细胞是通过摄取胺前体(氨基酸)经脱羧后产生胺的。随着对细胞研究的深入，发现其不仅产生胺，而且还产生肽。DNES的组成至今已有40多种细胞，分为中枢和周围两大部分。中枢部分包括下丘脑一垂体轴的细胞和松果体细胞。周围部分包括胃、肠、胰、呼吸道和泌尿生殖道的内分泌细胞，以及甲状腺滤泡旁组胞，甲状旁腺细胞，嗜铬细胞，颈动脉体细胞等。日前证明这些细胞的染色方法较多，但常用的是使用亲银和嗜银反应来鉴别细胞浆中的银颗粒。内分泌细胞染色肾上腺的髓质中含有嗜铬细胞，这种细胞的形态不一，成多形性，成