专题19 生物技术实践

(潍坊市临胸县实验中学2020-2021学年高三1月月考)25.微生物培养，是指借助人工配制的培养基和人为创造的培养条件，使某些微生物快速生长繁殖的过程。它可以对已纯化的单一菌种进行培养和利用，也可以对混合菌种或自然样品(如土壤)中的微生物进行培养,然后根据培养基上所生长微生物的种类和数量，可在一定程度上估算微生物的多样性与数量。请分析回答下列问题：将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸岀液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有o氮源进入细胞后，可参与合成的生物人分子有o若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入(显色剂)筛选出能产淀粉酶的微生物。该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是o某同学在使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌时，压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能原因是o为了调查某河流的水质状况，某研究小组采用桶释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是o然后，将ImL水样桶释100倍，在3个平板上用涂布法分别接种入0.lniL稀释液。经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为■用平板划线法分离水样中的细菌，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有(答出两条)。若将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快，分析其原因是。【答案】(1).碳源、水和无机盐(2).蛋白质和核酸(3).碘液(4).淀粉遇碘液呈蓝色，产淀粉酶的微生物能分解淀粉，在菌落周I韦I会形成透明圈(5).未将锅内冷空气排尽(6).检测培养基灭菌是否合格(7).3.8Xl(f(8).接种坏灼烧后没有冷却就开始划线、划线未从第一区域末端开始(9).振荡培养能提高培养液的含氧量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率【解析】【分析】1、微生物培养基的主要营养成分有碳源、氮源、水和无机盐等。2、微生物常用的接种方法有平板划线法、桥释涂布平板法。3、每克样品中的菌株数=（C-V）xM,其中C代表某一桥释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的桶释液的体积（ml）,M代表桶释倍数。【详解】（1）微生物生长繁殖所必需的营养物质主要包扌舌碳源、氮源、水和无机盐等；氮源进入细胞后，可参与合成含氮化合物，其中的生物人分子有蛋白质和核酸；淀粉与碘液可以发生显色反应，使培养基呈蓝色，产生淀粉酶的微生物能分解周I韦I的淀粉，蓝色消失后会出现以菌落为中心的透明圈。（2）采用高压蒸汽灭菌时，若压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气；在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，若空白平板上无菌落形成，则说明培养基灭菌合格；平均每个平板上的菌落数为38,稀释了100倍,取样0.1ml,则每亳升水中的活菌数为38x100-0.1=38000个，则每升水中的活菌数为38000x1000=3.8x0个。（3）接种时常用接种坏，平板划线法要求灼烧的接种环冷却后再划线，否则会灼伤菌株甚至死亡；划线时要从上一次划线的末端开始划线，这样接种环上才有菌株。静置培养时，只有表层营养液中的溶解氧较高，人部分细菌不能得到充足的氧气，同时营养物质也不能得到充分的利用，故细菌生长速度较慢；而震荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高培养液中营养物质的利用率，故细菌生长速度较快。【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法，掌握无菌技术，能结合所学的知识准确答题。（潍坊市临胸县实验中学2020-2021学年高三1月月考）15.我国劳动人民很早就会利用发酵技术制作各种特色美食，如酒、醋、腐乳等，展现了广人人民群众的智慧。下列有关叙述不正确的是（）家庭制作果酒、呆醋和腐乳通常都不是纯种发酵可以通过监测酒精发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸将长满毛每的豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶II处需加人用盐量【答案】D【解析】【分析】1、在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气，在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵：酒精发酵的最佳温度是在18°C〜25°C,pH最好是弱酸性。2、醋酸菌为好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸：醋酸菌生长的最佳温度是在30°C〜35°C。3、豆腐的主要营养成分是蛋白质和脂肪，都是人分子有机化合物，难以消化、吸收，毛霉、酵母菌等多种微生物分泌的蛋白酶，能将蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸，在多种微生物的协同2豆腐转变成腐乳。制作过程中需要加盐腌制。【详解】A、家庭制作果酒、果醋和腐乳都没有经过严格的灭菌，通常都不是纯种发酵，A正确；B、酵母菌无氧呼吸町将葡萄糖分解形成酒精，町以通过监测酒精发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵，B正确；C、条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸，C正确：D、长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，接近瓶II处易被污染，需加大用盐量，以防止空气中微生物的污染，D错误。故选D。（名校联盟2020-2021学年高三下学期开学考试）13.中国酸菜历史悠久，早在北魏的《齐名要术》中就记载了用白菜等原料腌制酸菜的多种方法。酸菜不仅II感好，而且对人体有益。下列说法错误的是（）酸菜制作过程中，主要起作用的微生物是乳酸菌真空包装的酸菜可能会因杂菌污染而发生“胀袋”腌制过程中，坛中水分会因蔬菜细胞渗透失水而増多酸菜的腌制时间越长，II感越好，营养价值越高【答案】D【解析】【分析】泡菜的制作及亚硝酸盐含量的测定1、原理（1）泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。（2）测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件卞，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N1蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测对比，可以人致估算出亚硝酸盐的含量。2、流程（1）泡菜的制作：（2）亚硝酸盐含量的测定操作过程:配制溶液|f|制备标准显色液Z|制备样品处理滋f|比色【详解】A、酸菜制作过程中，白菜经乳酸菌发酵后产生人量乳酸，因此起主要作用的微生物是乳酸菌，A正确；B、真空包装的酸菜可能会因杂菌污染而发生“胀袋”，E正确；C、腌制过程中，外界溶液浓度高会使蔬菜细胞渗透失水，导致坛中水分增多，C正确；D、酸菜制作过程中会产生亚硝酸盐，因此并不是腌制时间越长，II感越好，营养价值越高,D错误。故选D。（名校联盟2020-2021学年高三下学期开学考试）14.地衣芽抱杆菌具有调节动物肠道微生态平衡，增加动物机体抗病力的功能。仔兔饲喂地衣芽抱杆菌2040天后，其免疫器官生长发育迅速，血中T淋巴细胞值较对照组高。下列叙述不正确的是（）地衣芽也杆菌若长期保存需置于4°C冷藏可用液体培养基对地衣芽抱杆菌扩人培养使用后的培养基在丢弃前要经过灭菌处理地衣芽也杆菌改变了仔兔肠道菌群的结构【答案】A【解析】【分析】液体培养基的优点：由于营养成分分布均匀，有利于微生物对营养物质的充分接触和吸收。【详解】A、地衣芽葩杆菌若长期保存，可用甘油管藏法，需置于-20°C冷冻，A错误；B、液体培养基会使菌种与培养液更好的接触，有利于菌种的培养，E正确：C、使用后的培养基在丢弃前要经过灭菌处理，防止对坏境造成污染，C正确：D、地衣芽也杆菌调节动物肠道微生态平衡，改变了仔兔肠道菌群的结构，D正确。故选Ao【点睛】本题考查微生物的培养、保存等相关知识，旨在考查对相关知识的理解能力和综合运用能力。（名校联盟2020-2021学年高三下学期开学考试，不定项）19.在植物有效成分提取过程中,说法错误的是（）玫瑰、橘皮精油都有很强的挥发性、易溶于有机溶剂其成分都是祜类化合物在提取玫瑰精油时，为了使油水混合物分层，应向乳化液中加入无水Na2SO4在蒸馆过程中，要提高产品质量，应该提高蒸馆温度，延长蒸饰时间提取玫瑰精油和橘皮精油的实验流程中共有的操作是分液和过滤【答案】ABC【解析】【分析】植物芳香油的提取方法：蒸馆法、压榨法和萃取法等。（1）蒸蚀法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馆法。根据蒸馆过程中原料放置的位置的标准，将水蒸气蒸馆法划分为水中蒸馆、水上蒸馆和水气蒸饰。（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙瞇、石油瞇等低沸点的有机溶剂中，使芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩卞的就是芳香油。（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的呆皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫压榨法。【详解】A、人部分植物芳香油的主要成分是祜类化台物及其衍生物，但橘皮精油的主要成分是柠檬烯，A错误；B、提取玫瑰精油时，无水Na2SO4用来吸收精油中残留的水分，向油水混合物中加入NaCl可增加盐的浓度，加大水的比重，使油水分层，B错误；C、蒸馆法提取植物有效成分时，蒸馆时的许多因素都会影响产品的品质，如蒸馆温度太高、时间太短，产品的品质就比较差，为了提高产品的品质，需要严格控制蒸馆温度，延长蒸馆时间，C错误；D、提取玫瑰精油和橘皮精油的实验流程中均有分液操作，提取玫瑰精油的实验流程中的分液操作是用分液漏斗将油层和水层分开，提取橘皮精油的实验流程中的分液操作是先将过滤后的压榨液静置，再用分液漏斗将上层的橘皮精油分离出来，D正确。故选ABCo（聊城市一中2020-2021学年高三下学期开学模拟考试）13.关于生物技术实践中的有关检验，错误的是（）在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铭酸钾的混合液在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起培养腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的仓品，多种微生物参与了该发酵过程，其中起主要作用的微生物是毛每用桶释涂布法统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中人约含有的活菌数【答案】A【解析】【分析】1、杲酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是18〜25°C、前期需氧，后期不需氧。2、腐乳的制作利用的微生物主要是毛霉，多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸：脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，这些小分子物质有利于人体的消化和吸收。【详解】A、在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入3mol/L的硫酸3滴，混匀后滴加常温卞饱和的重铭酸钾溶液3滴，振荡试管，观察到橙色的重铭酸钾变成灰绿色，A错误；B、在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起放在恒温箱中培养，如果未接种的培养基或接种无菌水的培养基没有菌落生长，说明培养基制作合格，即没有被污染，B正确：C、腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的仓品，多种微生物参与了该发酵过程，其中起主要作用的微生物是毛每，其产生的蛋白酶和脂肪酶町将豆腐中的蛋白质和脂肪水解，C正确：D、用桶释涂布法统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，该方法统计的菌落数往往比实际的菌落数少，D正确。故选Ao（聊城市2021学年高三下学期地区联考）14.樱桃营养丰富，含铁量位于各种水果之首，常食櫻桃可促进血红蛋白再生，防治缺铁性贫血，但樱桃收获期短，不耐贮存、易腐烂，因此利用櫻桃酿制果酒和呆醋町获得较高的经济效益。卜•列说法错误的是（）利用酵母菌酿制櫻桃酒时，可以选择酸性重俗酸钾检测产生的酒精若要利用櫻桃酒制作樱桃杲醋，需要适当升高温度，并且及时通气选择新鲜的樱桃除去枝梗后略加冲洗再榨汁在变酸的果酒表面观察到的菌膜可能是醋酸菌在液面大量繁殖形成的【答案】C【解析】【分析】1、参与杲酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。一般酵母菌的繁殖温度为20°C,发酵时的适宜温度为18-25°Co酵母菌在有氧呼吸时可以人量增殖,无氧呼吸时可以发酵产生酒精和二氧化碳。2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。【详解】A、重俗酸钾在酸性条件卜•和酒精反应生成灰绿色，所以可以选择酸性重铭酸钾检测产生的酒精，A正确；B、酿制果醋所需的菌种是醋酸菌，温度是30-35°C,需要持续通入空气；果酒制备的菌种是酵母菌，条件是18-25°C,密封，所以利用樱桃酒制作櫻桃果醋，需要适当升高温度，并

且及时通气，B正确;C、选择新鲜的櫻桃先冲洗再除去枝梗，然后才能榨汁，C错误：D、在变酸的果酒表面观察到的菌膜可能是醋酸菌在液面人量繁殖形成的，D正确。故选Co（聊城市2021学年高三下学期地区联考，不定项）20.屠宰场废弃血污不经过处理直接排放,会对环境造成污染。传统的处理方法有填埋法和焚烧法等。填埋法易造成地表环境、地卜水资源污染。焚烧法处理也会造成人气污染，且废弃物中所含的蛋白资源不能得到有效利用。研究人员以屠宰场血污堆积土壤为分离基质，利用血平板培养基（添加了动物血液），分离出了高效降解血红蛋白的菌株，并初步用于降解废弃血液、生产氨基酸液态肥料。下列叙述正确的是（）上述菌株分离纯化过程中用到了桶释涂布平板法和平板划线法对分离纯化得到的菌株培养后进行计数，只能釆用桶释涂布平板法血平板培养基上透明水解圈人的菌落分泌的蛋白酶的活性往往较高利用该菌株降解废弃血液可在保护坏境的同时实现资源的可持续利用【答案】ACD【解析】【分析】微生物常见的接种的方法：平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。棉释涂布平板法：将待分离的菌液经过人量桥释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。该方法可用于微生物的计数。【详解】A、根据图中培养皿上的菌落可知，分离纯化过程中先后用到了桥释涂布平板法和平板划线法，A正确；B、对分离纯化得到的菌株培养后进行计数，除了采用桶释涂布平板法，还可以用显微镜直接计数法，B错误；C、平板培养基上添加了动物血液，能降解血红蛋白的菌株周用会出现透明圈，且透明水解圈人的菌落分泌的蛋白酶的活性往往较高，C正确；D、根据题干信息可知，利用该菌株可降解废弃血液，同时生产氨基酸液态肥料，可在保护环境的同时实现资源的可持续利用，D正确。故选ACDo（济南市平阴一中2020-2021学年高三3月月考）14.“每天喝一点，健康多一点”是某品牌枸杞果酒提出的消费理念。卞图为生产该枸杞果酒的传统工艺流程，以下有关分析错误的是（）选料T?T粉碎T灭菌T接种T发酵T?T果酒流程中两处“？”依次表示冲洗和过滤制作枸杞果酒时，温度应该控制在18〜25°C在酒精发酵旺盛时，若因前期灭菌不合格导致容器中存有醋酸菌，则醋酸菌可将果汁中的糖分解为醋酸町在酸性条件卜用重珞酸钾溶液来检验是否有酒精产生【答案】C【解析】【分析】果酒的制作流程，酵母菌在有氧和无氧的条件下都能生活：在有氧时，酵母菌人量繁殖，但是不进行酒精发酵：在无氧时，繁殖速度减慢，但是此时可以进行发酵：在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在冇氧坏境卜•一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵。20C左右最适合酵母菌繁殖，酒精发酵的最佳温度是在18C〜25C,pH最好是弱酸性。在糖源和氧气都充足时，醋酸菌才能将果汁中糖分解为醋酸。【详解】A、流程中两处“？”依次表示清水冲洗和过滤，过滤的目的是除去果皮等杂质，A正确：B、由杲酒制作的原理可知，制作枸杞果酒时，温度应该控制在18〜25°C,E正确；C、在酒精发酵旺盛时，若因前期灭菌不合格导致容器中存有醋酸菌，由于此时为缺氧环境,而醋酸菌为需氧型微生物，在无氧条件卞无法生存，因此，醋酸菌不能将呆汁中的糖分解为醋酸，C错误；D、酒精在酸性条件卜•与重铭酸钾溶液发生颜色反应，由橙色变为灰绿色，以此原理可以来检验是否有酒精产生，D正确。故选C。（济南市平阴一中2020-2021学年高三3月月考）25.民间谚语“玉米带大豆，十年九不漏”的意思是：玉米与人豆间作种植，十年中有九年不至于欠收。研究表明，出现这一现彖的原因是人豆根部有根瘤菌，根瘤菌与豆科植物的共生体系具冇很强的固氮作用，能固定空气中的气态氮为植物所用。某科研小组计划在玉米人豆间作套种地块分离土壤中的根瘤菌，以研究生物固氮的相关问题。（1）科研小组的同学通过查阅资料得知多菌灵和五氯硝基苯都有抑制真菌的作用，且查到部分实验数据如下表：含抑菌剂的培养基对土壤真菌数量的影响（个/克干土）供试土壤培养基基础培养基含多菌灵的培养基含五氧硝基苯的培养基0.1克*0.2克*0.3克*0.1克*0.2克*0.3克*水稻土（无锡）201.50・110・110・254・215・003・68黄棕壤（南京）10.520.140.160.239.3215.688.64红壤（江西）25.380000.050.500*300亳升基础培养基加入的抑菌剂量分离根瘤菌的过程中，用含（填“五氯硝基苯”或“多菌灵”）的培养基抑制真菌的效果会更明显：在含五氯硝基苯的300ml基础培养基中，加入五氯硝基苯的量与抑制真菌效果的关系是（填“呈正相关”或'呈负相关”或'无法判断‘）。（2）实验室一般采用法对培养基进行灭菌。分离纯化根瘤菌时，需要对土壤浸出液进行梯度棉释的原因是o（3）2019年7月16口，科学家通过基因工程方法，将一种具有固氮作用的蓝细菌A的20多个固氮基因，转移到另一种不能固氮的蓝细菌E中，在人工去除氧气的环境下，让后者获得了固氮能力。科研小组的同学指出：“基因工程的诞生需要生物学理论基础，相关技术的发明使基因工程的实施成为可能。通过基因工程将固氮基因转入单子叶植物，并经过转录和翻译产生固氮酶并不难，难的是固氮酶还要有活性。”催生基因工程的三个最重要的生物学基础理论是0科学家通过基因工程的方法使人田中的普通玉米合成了上述固氮酶，但该转基因玉米不能像蓝细菌B那样进行生物固氮，根据上述材料分析其原因最可能是【答案】（1）.多菌灵（2）.无法判断（3）.高压蒸汽灭菌（4）.土壤浸出液中根瘤菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落（5）.DNA是遗传物质的证明、DNA双螺旋结构和中心法则的确立、遗传密码的破译（6）.固氮酶对氧气敏感，需要在无氧条件下才有活性，人田中的玉米不具有无氧环境，固氮酶的作用被抑制【解析】【分析】从表格中看出在含有多菌灵的培养基中真菌数目明显比含五氧硝基苯的培养基数目少，说明抑制能力强：桥释涂布平板法：将待分离的菌液经过人量桶释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】（1）从表格中看出，加入多菌灵比加入五氯硝基苯真菌数量少，说明多菌灵的抑制真菌的效果更明显；比较加入五氯硝基苯的三种培养基，真菌数量随着五氯硝基苯的浓度增加无明显关系，所以二者关系无法判断。（2）对培养基灭菌采用高压蒸汽灭菌法；由于土壤浸出液中根瘤菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落，所以需要对浸出液进行梯度桶释。（3）①基因工程的三个最重要的生物学基础理论是DNA是遗传物质的证明、DNA双螺旋结构和中心法则的确立、遗传密码的破译。②根据题干信息“不能固氮的蓝细菌B在人工去除氧气的坏境下，获得了固氮能力”说明固氮需要在无氧的条件下，所以玉米不能固氮的原因：固氮酶对氧气敏感，需要在无氧条件下才有活性，人田中的玉米不具有无氧环境，固氮酶的作用被抑制。【点睛】本题需要考生识记微生物的接种方法，分析表格中的数据，解答（3）需要分析题干中的信息得出“固氮需要在无氧的条件卞进行"的结论。（莱芜市凤城高级中学2020-2021学年高三1月月考）15.下列有关微生物分离、纯化及计数的叙述中，错误的是（）平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散并计数用富含尿素的培养基富集培养尿素分解菌棉释涂布平板法通过系列梯度桶释町将微生物分散用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往偏人【答案】A【解析】【分析】微生物的分离纯化方法主要有楠释涂布平板法和平板划线法。技术方法主要有活菌计数法和显微镜直接计数法。【详解】A、平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散，但无法计数，A错误；B、用富含尿素的培养基富集培养尿素分解菌，B正确；C、桥释涂布平板法通过系列梯度桥释可将微生物分散，C正确；D、用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往偏人，因为有些死菌也被计入其中，D正确。故选Ao（济南人学城实验高级中学2018级2月调研考试）25.民间谚语“玉米带大豆，十年九不漏”的意思是：玉米与人豆间作种植，十年中有九年不至于欠收。研究表明，出现这一现彖的原因是人豆根部有根瘤菌，根瘤菌与豆科植物的共生体系具有很强的固氮作用，能固定空气中的气态氮为植物所用。某科研小组计划在玉米人豆间作套种地块分离土壤中的根瘤菌，以研究生物固氮的相关问题。（1）科研小组的同学通过查阅资料得知多菌灵和五氯硝基苯都有抑制真菌的作用，且查到部分实验数据如下表：含抑菌剂的培养基对土壤真菌数量的影响（个/克干土）供试土壤培养基基础培养基含多菌灵的培养基含五氧硝基苯的培养基0.1克*0.2克*0.3克*0.1克*0.2克*0.3克*水稻土（无锡）201.50.110.110・254.215.003.68黄棕壤（南10.520.140.160.239.3215.688.64京)红壤(江西)25.380000.050.500*300毫升基础培养基加入的抑菌剂量分离根瘤菌的过程中，用含(填“五氯硝基苯”或“多菌灵”)的培养基抑制真菌的效果会更明显：在含五氯硝基苯的300ml基础培养基中，加入五氯硝基苯的量与抑制真菌效果的关系是(填“呈正相关”或'呈负相关”或'无法判断‘)。实验室一般采用法对培养基进行灭菌。分离纯化根瘤菌时，需要对土壤浸出液进行梯度稀释的原因是o2019年7月16口，科学家通过基因工程方法，将一种具有固氮作用的蓝细菌A的20多个固氮基因，转移到另一种不能固氮的蓝细菌E中，在人工去除氧气的环境下，让后者获得了固氮能力。科研小组的同学指出：“基因工程的诞生需要生物学理论基础，相关技术的发明使基因工程的实施成为可能。通过基因工程将固氮基因转入单子叶植物，并经过转录和翻译产生固氮酶并不难，难的是固氮酶还要有活性。”催生基因工程的三个最重要的生物学基础理论是o科学家通过基因工程的方法使人田中的普通玉米合成了上述固氮酶，但该转基因玉米不能像蓝细菌B那样进行生物固氮，根据上述材料分析其原因最可能是【答案】(1).多菌灵(2).无法判断(3).高压蒸汽灭菌(4).土壤浸出液中根瘤菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落(5).DNA是遗传物质的证明、DNA双螺旋结构和中心法则的确立、遗传密码的破译(6).固氮酶对氧气敏感，需要在无氧条件下才有活性，大田中的玉米不具有无氧坏境，固氮酶的作用被抑制【解析】【分析】从表格中看出在含有多菌灵的培养基中真菌数目明显比含五氧硝基苯的培养基数目少，说明抑制能力强：桶释涂布平板法：将待分离的菌液经过人量桶释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】(1)从表格中看出，加入多菌灵比加入五氯硝基苯真菌的数量少，说明多菌灵的抑制真菌的效果更明显；比较加入五氯硝基苯的三种培养基，真菌数量随着五氯硝基苯的浓度增加无明显关系，所以二者关系无法判断。（2）对培养基灭菌采用高压蒸汽灭菌法；由于土壤浸出液中根瘤菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落，所以需要对浸出液进行梯度棉释。（3）①基因工程的三个最重要的生物学基础理论是DNA是遗传物质的证明、DNA双螺旋结构和中心法则的确立、遗传密码的破译。②根据题干信息“不能固氮的蓝细菌B在人工去除氧气的坏境下，获得了固氮能力”说明固氮需要在无氧的条件下，所以玉米不能固氮的原因：固氮酶对氧气敏感，需要在无氧条件下才有活性，犬田中的玉米不具有无氧环境，固氮酶的作用被抑制。【点睛】本题需要考生识记微生物的接种方法，分析表格中的数据，解答（3）需要分析题干中的信息得出“固氮需要在无氧的条件卞进行"的结论。（济南大学城实验高级中学2018级2月调研考试，不定项）18.F图是某生物兴趣小组用同一种培养基培养的酵母菌卡通形象菌落，有关说法正确的是（）乔治佩奇培养酵母菌可以采用麦芽汁琼脂培养基实现图中卡通形彖菌落的接种方法是桶释涂布平板法“乔治”和“佩奇”的颜色不同是因为两个平板中的酵母菌不同图中卡通形象清晰完整，说明培养过程中无菌操作符合规范【答案】ACD【解析】【分析】菌落具有形态、人小、颜色等特征。不同菌体的菌落特征往往不同，可根据菌落特征对菌体进行分类。【详解】A、酵母菌对营养要求非常低，很容易培养出来，常用麦芽汁琼脂培养基培养，A正确；

B、棉释涂布平板法接种形成的菌落分布均匀，而图中菌落分布不均匀，说明不是采用的稀释涂布平板法，E错误；C、不同菌体的菌落特征不同，“乔治”和“佩奇”的颜色不同是因为两个平板中的酵母菌不同,C正确：D、图中卡通形彖清晰完整，说明培养过程中无菌操作符合规范，D正确。故选ACDo（济南人学城实验高级中学2