原料药质量研究

化学原料药质量研究

及原始记录常见问题讨论

余立yuliyy8716@特性研究-理化、稳定性对照品研究-标化、校正因子方法研究-建立、验证原料药研究的特点

杂质研究-工艺、残留溶剂1432其他参考资料《化学药物杂质研究的技术指导原则》《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则

》建立标准时要考虑的问题Growth200820072006200520042003200220012000常见研究误区以及供参考的经验和体会

新版药典动态对化学原料药质量研究的影响

研发原始记录中常见问题及改进建议

主要讨论内容Page

5碘值、皂化值、酸值

折光率比旋度熔点相对密度馏程吸收系数黏度凝点

物理常数研究

吸收系数

新药尽可能详细、全面、规范

注意测定方法的准确性实验样品的纯度

SOP、温度校正、仪器台间差实验环境的温湿度并记录！仿制药与文献核对一致性

物理常数研究

吸收系数

物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml）,液层厚度为1cm时的吸光度数值。研究意义及应用趋势的改变原始记录问题Page

8干燥失重

重金属溶液的澄清度硫酸盐酸碱度氯化物水分铵盐结晶性

一般检查项研究

药典变化提示pH测定法：氢氧化钙标准缓冲液是要用25℃时取饱和溶液的上清液，所以临用时需核对温度才能取用上清液！）纯化水：取本品100ml，加饱和氯化钾溶液0.3ml。

极弱电解质品种的pH值测定可采用相同的测定方法药典附录通用检测方法变化提示重金属检查法：甲管（标准）＋乙管（供试品）+丙管（标准+供试品）如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检查

勘误！第二法规定乙管（标准）中显出的颜色与甲管（供试品）比较，不得更深。

药典附录通用检测方法的使用氯化物5.0ml常用硫酸盐2.0ml检查法铵盐2.0ml铁盐1.0ml注意标准液的取用量！应保证灵敏检测的需要！建议：必要时改用仪器法判断

Clicktoedittitlestyle杂质控制微粒控制安全性控制注射剂所用的原辅料应从来源及工艺等生产环节进行严格控制并应符合注射用的质量要求。标准增项杂质谱的比较供注射用原料质控重点应在制剂申报资料中体现！杂质控制力度大幅度提高

未修订品种有关物质（常规）增项增指标严限度改方法TLC→HPLC等度→梯度理论板数→分离度特定杂质增订单列项盐酸阿糖胞苷项目2005年版2010年版含量限度97.0％～103.0％98.0%～102.0%鉴别3项3+1项（+HPLC）检查干燥失重干燥失重溶液的澄清度与颜色含氯量有关物质梯度、校正、3个特定杂质残留溶剂炽灼残渣和重金属含量测定UV吸收系数法HPLC外标法*性状项下还有熔点和比旋度项，第一次飞跃第二次飞跃纯度控制杂质控制杂质谱控制有关物质的研究

－杂质质控理念的变迁杂质谱的定义ImpurityProfile

（杂质谱）:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质的总的描述。

已鉴定杂质IdentifiedImpurity特定杂质SpecifiedImpurity潜在杂质PotentialImpurity杂质谱ImpurityProfile已确证了结构特征的杂质在质量标准中规定检查并有自己限度标准的杂质。已鉴定或未鉴定理论推测在生产或贮藏过程中可能产生的杂质实际产品中不一定存在存在于药品中的所有杂质组成或模式Clicktoedittitlestyle选择最优多种互补结构确证比较杂质的数与量，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品的安全有效性结果杂质谱比较杂质谱的比较项目原研厂标准拟定标准EP7.0USP34JP15含量限度按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg效价不得少于150I.U.（非口服制剂），每1mg效价不得少于120I.U.（口服制剂按干燥品计算，每1mg中效价不得少于180USP肝素单位每1mg的效价不得少于110单位。性状白色或类白色的粉末，有引湿性白色或类白色的粉末，极具引湿性白色或几乎白色的粉末，有适度的引湿性白色到灰棕色的粉末或颗粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度不小于+35°(40mg/ml,水)应不小于+50°(40mg/ml,水)鉴别1、电泳法2、钠盐1、电泳法2、钠盐A、具有抗凝血作用B、比旋度C、电泳法：D.钠盐A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、钠盐酸碱度5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.5～8.0（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）6.0～8.0新方法分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）原方法中国抗生素杂志，2009，34：734在对各国药典方法比较的基础上确定分析方法杂质谱的比较－多种互补不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长）不同检测器（uv、DAD）不同原理的方法-分离或检测

新杂质的研究－药物杂质的可能来源1.原料：红霉素A、红霉素B、红霉素C、红霉素D、红霉素E、红霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺3.副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氢阿奇霉素、O-甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8，

9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮阿奇霉素中可能存在的杂质：37种CompanyLogo结构确证常用的方法热分析Ｘ－粉末衍射核磁元素分析质谱紫外红外杂质谱的比较平行列表、逐峰比较新杂质个数单一新杂质量（0.1%）新杂质总量所占比例（2.0%）

毒性快速评价平台斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。优点：杂质用量少无需知道杂质结构实验周期短（3－4天一个周期）药物耳毒性检测利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后1神经丘消失。给药后系统对照组（正常幼体）原始记录中常见问题溶剂的选择无依据：溶液稳定性考察-溶解度高且稳定＞8小时不需提示＜4小时提示临用现配或立即进样＜2小时改换溶剂-无背景干扰或小

溶剂峰、倒峰

-低毒价廉检出杂质的数与量干扰因素操作的便捷性

检测波长的选择-薄弱点色谱柱的选择-常见问题色谱柱与流动相性质不匹配100%的水或Buffer最好选水相柱（AQ柱）普通C18柱流动相中用到离子对试剂，用后应好好冲最好专用！因色谱柱填料性质已与原来有所不同在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现！

柱温的确定-不规定（不需加温且对温度不敏感）-25℃或30℃

（不需加温但对温度敏感，需保持恒温）-35℃～70℃（需加温且对温度敏感，需保持恒温）50℃以上要加预热管增设的特色项目

结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的特殊性设立特色有针对性检测项目，最大限度解决安全隐患。

人尿制品增加乙肝表面抗原检查：如尿激酶、尿促性素、绒促性素、乌司他丁等重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性DNA残留量如重组人生长激素、重组人胰岛素等。含不饱和脂肪酸的品种增加甲氧基苯胺值检查：如多烯酸乙酯（P272）等。增设的特色项目-甲氧基苯胺值

含有不饱和脂肪酸的药物在生产和贮藏过程中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可进一步生成醛类等化合物，而甲氧基苯胺值（也称p-茴香胺值）就是ISO推荐的一种对此类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录2.5.36收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺值越高，说明其劣变程度越严重。测定原理：甲氧基苯胺与醛反应生成醇胺，醇胺脱水生成的醛亚胺可采用紫外-可见分光光度法在350nm波长处测定。增设有效项目指标-甲氧基苯胺值

注意：甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时应避免接触皮肤，一旦失误，需用水冲洗15分钟以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，需当天配制使用。以异辛烷作空白做基线校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超过了0.2，则需重新配制试剂。供试品溶液中加入0.25％的4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注意避光，在350nm波长处的吸光度随时间的延长缓慢增加，需准确放置10分钟后测定，尽量减小误差。本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分的存在会导致反应不完全，测定值偏低，当样品中水分含量超过0.1%时，可按10g样品加1～2g无水硫酸钠的比例脱除水分后测定。另外，应取用新开启包装的供试品。增设的特色项目-甲氧基苯胺值

2-乙基己酸β-内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录－2010年版药典二部（附录ⅦL）；如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。2-乙基己酸勘误：β-内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录－2010年版药典二部（附录ⅦL）；如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。勘误：

目前中国不仅接受了ICH对化学药品中残留溶剂控制的理念，而且结合中国国情，建立了具有中国特色的残留溶剂检查方法。《中国药典》2005版中，对残留溶剂的分类及限度标准已经与ICH的要求完全一致，但仅在附录中作为原则性统一要求。《中国药典》2010版中，原料药要求在各论项下根据其生产工艺制定残留溶剂检查方法抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细的残留溶剂检查方法从附录走向各论残留溶剂

如：头孢泊肟酯

残留溶剂照残留溶剂测定法（附录ⅧP）测定。

甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯

色谱条件与系统适用性试验略内标溶液的制备取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml中约含200μg的溶液，作为内标溶液。残留溶剂残留溶剂检查方法及验证

！

除正文已明确列有“残留溶剂”检查的品种必须依法进行检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的规定检测方法进行了相应的调整：顶空进样甲烷气体，记录死时间(t0)顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保留时间(tR)相对于参考物质保留时间(t’R)的相对调整保留时间(Relativeadjustmentretentiontime，RART)法替代RRT法tR为组分的保留时间;t’R为参比物的保留时间。t0为甲烷保留时间。残留溶剂

检测方法选择：直接进样？顶空进样？等温？程序升温？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？验证项目确定：回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？残留溶剂方法建立、验证与常见问题

检测方法选择：直接进样？顶空进样？等温？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？验证项目确定：回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？残留溶剂方法建立、验证与常见问题原始记录较常发现的问题连带问题：按无水无溶剂计算残留溶剂方法建立、验证与常见问题高聚物凝胶色谱法（2010年版新增的19个标准）原料制剂头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠头孢替唑钠注射用头孢替唑钠头孢尼西钠注射用头孢尼西钠头孢噻吩钠注射用头孢噻吩钠磺苄西林钠注射用磺苄西林钠阿洛西林钠注射用阿洛西林钠美洛西林钠注射用美洛西林钠氯唑西林钠注射用氯唑西林钠苯唑西林钠注射用苯唑西林钠普鲁卡因青霉素高聚物-高分子杂质-有关物质Ⅱ2010版：品种增加,方法多元化

1、自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝胶G-10（SephadexG10）；短柱子的使用，减少分离时间

2、商品凝胶柱TSK-GELG2000SWXL：头孢地嗪（北京所）

3、ODS柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所)

4、柱切换（中检所），实现凝胶色谱与反相色谱的统一盐酸头孢替安聚合物分析方法的比较SephadexG-10系统TSK-GelG2000swxl系统

0.8ml/min头孢羟氨苄高分子杂质分析图谱SephadexG-10系统TSK-GelG2000swxl系统

0.8ml/min1-头孢羟氨苄；2-高分子杂质供注射用原料可见异物检查头孢他啶：取本品5份，每份3.0g，加1%碳酸钠溶液（经0.45μm滤膜滤过）溶解，依法检查（附录ⅨH），应符合规定。头孢地嗪钠：取本品5份，每份2.0g，分别加微粒检查用水溶解，依法检查（附录ⅨH），应符合规定。有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反应，产生白点、白块和玻璃屑有些品种如甲硝唑等与重金属发生反应产生不溶物有些品种如喹诺酮类药物对金属设备产生腐蚀，易有金属屑有些品种如胰岛素等提取的生化大分子易产生蛋白沉淀有些品种如头孢噻肟钠等成盐不完全，溶解度太低，产生白点、白块引发不合格的部分原因控制生产环境和过程中的污染-外源异物考察药物与容器的兼容性-内源异物考察活性成分的稳定性以及与溶剂/添加物的稳定性-内源异物药品的质量源于设计是什么？从哪里来？为什么去不掉？安全性如何？限度多少合适？可见异物检查的目的供注射用原料不溶性微粒检查头孢他啶：取本品3份，加1%碳酸钠溶液（经0.45μm滤膜滤过）溶解制成每1ml中含30mg的溶液，依法检查（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上的微粒不得过6000个，含25μm以上的微粒不得过600个。头孢曲松钠：取本品3份，加微粒检查用水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法检查（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上的微粒不得过6000个，含25μm以上的微粒不得过600个。供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制剂能符合注射剂的要求由于光阻法测定结果仅与一定浓度范围内样品溶液成正比，故标准给出了不溶性微粒检查供试品溶液浓度制剂最多有11个规格，均按每1g样品中含10µm以上的微粒不得过6000粒，含25µm以上微粒不得过600粒；

强化不溶性微粒等项目控制强化不溶性微粒等项目控制供注射用原料不溶性微粒检查可见异物/不溶性微粒检查原始记录问题不详细无趋势缺方法摸索及分析原始记录建议：逐支、固定编号记录

标准统一、规范、明确、严谨

典型项目-无菌检查方法无菌检查是药物安全性风险控制的重要项目之一，但具体检查方法以前标准中均不给出，由检验者自己摸索。抗生素阳性菌选用不注意抗菌谱，存在试验的有效性、一次成功率等问题对每个品种均要求经过验证，确定样品使用的最适宜方法（直接接种法？薄膜过滤法），最佳溶解方式、最佳冲洗液、冲洗方式、敏感的阳性对照菌等操作关键因素，并将上述内容按统一规范格式在质量标准中单独立项表述详细。供注射用原料无菌检查供注射用原料无菌检查头孢呋辛钠：取本品3份，加1%碳酸钠溶液（经0.45μm滤膜滤过）溶解制成每1ml中含30mg的溶液，依法检查（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上的微粒不得过6000个，含25μm以上的微粒不得过600个。头孢曲松钠：取本品3份，加微粒检查用水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法检查（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上的微粒不得过6000个，含25μm以上的微粒不得过600个。无菌检查方法规范表述方式举例氧氟沙星氯化钠注射液：

无菌取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于500ml），每管培养基中加入0.1mol/L硫酸锰溶液1ml，以大肠埃希菌为阳性对照菌，依法检查（附录ⅪH），应符合规定。乙酰谷酰胺注射液：

无菌取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录ⅪH），应符合规定。注射剂制剂通则变化重点提示纯度要高、杂质要少、生物负荷要低＊从源头控制杂质的数和量、染菌的数和量、热原或细菌内毒素重点品种为营养性、无抑菌性、制剂有注射剂型注射剂用原料注重数量口服原料也要限定菌属种类（沙门氏菌）原料药微生物限度检查注射剂制剂通则变化重点提示胰岛素（制剂为注射剂）取本品0.2g,依法检查（附录ⅪJ），每1g中含细菌数不得过300个。胰酶（制剂为口服制剂，来源于动物提取）取本品,依法检查（附录ⅪJ），每1g供试品中细菌数不得过10000个，霉菌和酵母菌总数不得过100个。并不得检出大肠埃希菌；每10g供试品中不得检出沙门菌。原料药微生物限度检查注射剂制剂通则变化重点提示必要时应增设相应的安全性检查，如异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、降压物质、热原或细菌内毒素等因为有些药物成分复杂、组分结构不清晰（如多组分抗生素动物来源提取的生化药等）、采用化学手段难于监控杂质异常毒性：有可能污染生物毒性物质的品种（发酵）过敏反应：有可能污染异源蛋白或未知过敏反应物质的品种降压物质：有可能污染组胺、类组胺样物质的品种（腐败）供注射用原料安全性检查原料药的安全性指标用化学手段不能控制组成、杂质无法控制的生物来源品种均增加了异常毒性、过敏反应等动物试验：如硫酸鱼精蛋白等硫酸鱼精蛋白

鱼精蛋白主要存在于鱼类的成熟精巢组织中，与DNA紧密结合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一种小而简单的球形碱性蛋白质，分子量在1万以下，由30个左右的氨基酸组成，其中2/3以上是精氨酸，几乎不含芳香族氨基酸。吸光度参照BP2008/EP6.0增订。根据本品组成，如果纯化步骤将核酸和杂蛋白均去除的话，在260

280nm的波长范围内吸光度应很小，但考察结果远远超过BP2008/EP6.0所规定的0.1。

增设溶液的颜色检查项成分复杂、杂质无法控制但质量与颜色相关度高的品种增加溶液的颜色，如糜蛋白酶等。溶液颜色检查的目的

溶液颜色

自身性质

纯度

杂质含量-简易、直观、快速、综合的对有色杂质进行检查稳定性差质量与颜色联系紧密的安全性要求高用仪器定量测杂质困难注射剂用原料仅在紫外区查杂质成分复杂变质就变色检查颜色的品种适宜进行溶液的颜色检查的原料建立方法时要考虑的问题溶剂浓度稳定性临床安全性需要工艺生产能力同类产品水平溶液的颜色制订限度时要考虑的问题主成分纯度杂质的含量稳定性数据临床安全性需要工艺生产能力同类产品水平颜色的限度应用色差计转换进口药注册标准

-举例溶液的颜色取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液应无色；如显色，与同体积的比色液（取棕红色贮备液1.8ml加8.2ml水，混匀）比较（中国药典2010年版二部附录ⅨA第一法），不得更深。色差计法应用举例说明：企业标准按EP检查，规定“与B5号标准比色液（EP第5版2.2.2溶液的颜色）比较不得更深”。因EP标准比色液从三原色开始就与中国药典不同，如按此检查会有困难，故采用色差计进行了对比测定，结果EP的B5号标准比色液的色差值（△E*=3.58）与中国药典BR3号（△E*=3.19）和BR4号（△E*=4.46）的中值（3.82）较为接近，约相当于BR3.5号。因BR3号是取棕红色贮备液1.5ml加8.5ml水，BR4号是取棕红色贮备液2.0ml加8.0ml水配制而成，所以本次复核将棕红色贮备液1.8ml加8.2ml水配制了专用比色液，该比色液的△E*为3.64，与EP

B5号标准比色液的色差值几乎一致，按此转换限度既不改变质控原有水平，又方便在国内检验。应用色差计转换进口药注册标准

-举例药典采用现代分析技术举例

由于某些药物组成的复杂性，特别是一些生物大分子药物，使用传统的分析方法已经不能满足当前的质控需要，2010年版药典逐渐改用现代分析技术。

首次运用毛细管电泳法注射用抑肽酶：检查两个特定杂质

注射用盐酸头孢吡肟：方法1-毛细管电泳法