家畜组织胚胎学 1绪论

家畜组织胚胎学第一章绪论第一节家畜组织胚胎学的研究内容和意义组织胚胎学包括组织学和胚胎学两部分。组织学（histology）是研究动物体微细结构及功能的科学。动物体是由各种器官系统构成的，每个器官都包括几种不同的组织，而每一种组织又是由细胞和细胞间质构成的。因此，组织学的研究内容包括细胞、基本组织和器官组织三个部分。胚胎学（embryology）是研究动物个体胚胎发育的科学。胚胎学的研究内容包括配子发生、受精、卵裂、原肠胚和神经胚形成、胎膜和胎盘以及器官发生等。组织胚胎学属于动物科学和医学专业的专业基础课。只有掌握了动物的正常形态结构和胚胎发育规律，才能进一步了解动物的生理活动规律，并利用这些规律去合理地饲养、繁殖和改良动物以及防治各种疾病。因此，学好组织学与胚胎学是学好生理学、繁殖学、饲养学、动物生产学、病理学、免疫学和临床医学等课程所必不可少的基础。第二节组织胚胎学研究方法及基本原理所有的组织胚胎学研究方法均需将有机体的器官和组织经过特殊处理，再应用各种显微镜进行观察研究后得出科学的结果。1.组织学制片技术一般是先把组织制成薄片，最常用的是石蜡切片，其制备方法是：①取材与固定：把新鲜组织放到甲醛溶液等固定液中，使蛋白质等成分迅速凝固，尽可能保持其活体时的结构状态。②脱水与透明：为使石蜡浸入组织内，把固定好的材料用乙醇逐级（70%-100%）脱水。用二甲苯或乙醚等石蜡溶剂使组织浸透，便于浸蜡。一、固定组织研究法③浸蜡与包埋：把组织放入融化（58-60℃）的石蜡中，进行浸透和包埋成蜡块，目的是使石蜡进入细胞间隙和细胞内，以增加组织的硬度，便于切片。④切片与贴片：将蜡块用切片机切成5-10µm厚的组织切片，并铺展粘到载玻片上。⑤染色与封固：把粘好的切片脱蜡后，用适当的染料进行染色。染色后，再经脱水和透明，最后把组织用树胶和盖片封片。除了石蜡切片外，血液可以制成血涂片，疏松结缔组织和肠系膜等薄层组织可制成铺片，骨组织可制成磨片,然后固定和染色。

最常用的染色方法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）染色的染色方法，简称H.E.染色。苏木精是碱性染液，可以使细胞核内的染色质和细胞质中的核糖体等成分染成蓝紫色，故这些成分被说成是嗜碱性着色的。伊红是酸性染料，可使多数细胞的细胞质染成粉红色，这些细胞质被称为嗜酸性的。对碱性和酸性染料亲和力都不强的结构，称为嗜中性的。染色方法染色方法HE染色苏木精伊红嗜碱性结构：细胞核粗面内质网游离核糖体等嗜酸性结构：细胞质基质溶酶体、线粒体等细胞器胶原纤维等染色方法HE染色法以外的所有染色法，通常是为了显示某些用HE染色法显示不出的细胞和结构。如：苏丹法——显示脂肪镀银法——显示神经细胞、嗜银颗粒铁苏木素法——显示心肌闰盘马氏三色法——显示胰岛细胞甲苯胺蓝法——显示糖胺多糖

特殊染色镀银染色，显示大脑皮质神经元氯化金染色，显示运动终板Hemalum染色，显示心肌纤维及闰盘2、组织化学技术组织化学(histochemistry)：

通过化学或物理反应原理显示组织或细胞内化学成分，通常是使其形成有色终末产物，以便在镜下观察，可进行定位和定量。1．一般组织化学术是利用化学试剂与组织内的某些物质进行化学反应，在局部形成能够在显微镜下观察到的沉淀物。例如，过碘酸雪夫氏反应（periodicacidchiff’sreaction,PAS反应）的基本原理是通过过碘酸的氧化作用，使多糖生成醛基，后者与雪夫氏试剂中的无色碱性品红反应，在反应部位形成紫红色沉淀，从而证明细胞内含有糖原或粘多糖成分。

HIO4Shiff试剂多糖醛紫红色沉淀物（氧化）（碱性品红）组织化学术PAS反应，显示小肠上皮杯状细胞的粘原颗粒组织化学术⒉免疫组织化学术（immunocytochemistry)

利用组织化学技术的原理，再结合免疫学方法，则为免疫细胞化学术。主要的检测对象为肽和蛋白质。组织化学术免疫组织化学，显示胰岛B细胞组织化学术⒊原位杂交术（insituhybridization)

为核酸（DNA和RNA）组织化学术。用带有标记物的已知碱基顺序的核酸探针，与细胞内待测的核酸结合（杂交），从而在原位显示该核酸。原位杂交，显示脐静脉内皮细胞的心房钠尿肽阳性组织化学术活体组织研究法二、其它研究方法自学细胞培养术细胞融合组织工程术细胞电泳新的研究方法

放射自显影术图像分析术流式细胞术光学显微镜（lightmicroscopeLM）电子显微镜（electronmicroscopeEM）三、显微镜一．光学显微镜光镜普通光学显微镜（lightmicroscope）的分辨率为0.2µm，可放大1000倍左右，能观察组织和细胞的一般结构。分辨率是指能够分辨两颗粒之间的最小距离。显微镜下常用的长度单位在光镜下所见的组织和细胞的结构叫做一般微细结构，而在电镜下所见的结构则称之为超微结构。在光镜和电镜下进行观察时，常用的计量单位有：1μm（微米，micrometer）=1/1000mm（毫米，millimeter）1nm（纳米，nanometer）=1/1000μm1pm（皮米）＝1/1000nm光镜光学显微镜的分类1、生物显微镜2、荧光显微镜3、相差显微镜4、暗视野显微镜5、偏光显微镜6、激光共聚焦显微镜光镜光镜光镜大鼠附睾上皮细胞微丝（肌动蛋白）及细胞核光镜二电子显微镜技术常用的电镜有透射电镜和扫描电镜两种。与光镜比较，电镜的基本原理是以电子束代替光线，以电磁透镜代替光学透镜。电镜透射电镜（TEM）的分辨率已达到0.2nm左右，可放大几万到几十万倍。其工作原理是，电子束透过样品后，投射到荧光屏上，形成物像。由于电子易散射和被物体吸收，所以必须制备超薄切片（90-100nm）。电镜样品的制备过程：取小材料块（1mm3以内）用戊二醛和锇酸双重固定→环氧树脂包埋→超薄切片机切片→铅铀重金属电子染色→电镜观察。被金属盐所染的部位，因透过的电子束少而在荧光屏上显得暗，称为电子密度高，反之则称为电子密度低。透射电镜电镜电镜扫描电镜（SEM） 是用极细的电子束在样品表面进行扫描并用特定的探测器收集所发生的二次电子，形成电信号传送到显像管，在荧光屏上显现出物体表面的立体图象。扫描电镜的样品制备方法： 将较大的组织块