气相色谱法测定艾片中l-龙脑、异龙脑和樟脑

气相色谱法测定艾片中l-龙脑、异龙脑和樟脑

aip艾片是蔷薇科植物爱纳香的一部分。它具有开孔、醒神、清热、止痛的作用。用于发热、头晕、痉挛性疾病、粘液性疾病、气短性疾病、半麻痹、目红、口咙痛、咽喉咙痛和耳道流鼻涕。另有研究证实l-龙脑的抑菌能力强于d-龙脑。《中国药典》2010年版对艾片成分的量提出了严格规定。目前使用GC法测定龙脑(冰片)等的文献报道很多,而严格分离测定l-龙脑、d-龙脑和dl-龙脑的并不多,测定艾片的相关文献更少。研究证实本方法操作简便、准确,精密度、分离度良好,分析时间短,为艾片的测定及其质量控制提供参考。1材料和试剂日本岛津GC—2010气相色谱仪(配有氢火焰离子化检测器FID),GC-Solution工作站,AOC-20i自动进样器。对照品l-龙脑(质量分数97%,批号S53225)和异龙脑(质量分数95%,批号28598LJ)购自Sigma-Aldrich公司,樟脑(质量分数96%,批号20100126)和内标物萘(质量分数99.5%,批号W20100817)购自国药集团化学试剂有限公司;所用试剂均为分析纯。艾片样品由贵州艾源生态药业开发有限公司提供,批号112301、112901、120501、121901、122701、123001。2方法和结果2.1空气温度和阵风温度色谱柱为CP-WAX毛细管柱(30m×0.32mm,0.5μm,PEG-20M);升温程序:80℃保持5min,以10℃/min快速升温至220℃,保持5min;分流比1∶8;FID检测器温度250℃;进样口温度250℃;载气为高纯氮气,体积流量3.0mL/min,空气体积流量400mL/min,氢气体积流量47mL/min;进样量1μL。2.2对照品储备液的制备混合对照品储备液:分别精密称取樟脑、异龙脑、l-龙脑对照品适量,以醋酸乙酯溶解并定容,制成樟脑、异龙脑、l-龙脑质量浓度分别为10.1、9.975、10.2mg/mL的混合液,作为混合对照品储备液。内标溶液:精密量取萘1.0006g,以醋酸乙酯溶解,置100mL量瓶定容,作为内标溶液。2.3试验溶液的制备精密称取样品艾片(批号112301)0.5001g,以醋酸乙酯溶解,置50mL量瓶定容即得。2.4标混合对照品和加内标艾片的gc图谱选用萘为内标,樟脑、异龙脑、l-龙脑和内标物萘的分离度均大于2,萘与各对照品较好地分离,加内标混合对照品和加内标艾片的GC图谱见图1。各物质的保留时间均在13min内,测定速度较快。以樟脑、异龙脑、l-龙脑和萘色谱峰计算的理论塔板数分别为146929、210343、285379和390807,远远大于《中国药典》2010年版规定的理论塔板数超过3000的要求。2.5标准曲线及线性回归法精密量取混合对照品储备液0.05、0.125、0.25、0.5、1、2、3、4mL,分别置5mL量瓶中,再加入1mL内标溶液,加醋酸乙酯稀释并定容,摇匀,分别进样测定,每次1μL。以各对照品与内标物的峰面积比为横坐标(X),对照品与内标物的质量浓度比为纵坐标(Y)进行线性回归,得回归方程:樟脑Y=1.3222X+0.0394,r=0.9994;异龙脑Y=1.2097X+0.0387,r=0.9995;l-龙脑Y=1.2523X+0.0398,r=0.9995;线性范围分别为樟脑0.101~8.080mg/mL、异龙脑0.09975~7.980mg/mL、l-龙脑0.102~8.160mg/mL。2.6峰面积比的rsd对同一加内标混合对照品储备液连续测定8次,结果樟脑、异龙脑、l-龙脑与内标物的峰面积比的RSD分别为0.15%、0.08%、0.16%。2.7平均质量分数的测定取艾片样品(批号112301)5份,平行制备加内标供试品溶液,测定,结果樟脑、异龙脑、l-龙脑的平均质量分数的RSD分别为1.33%、2.62%、1.18%。2.8加标稳定性测定分别在0、0.5、1、2、4、8、16、24h对加内标供试品溶液(批号112301)进行测定,结果樟脑、异龙脑、l-龙脑与内标物的峰面积比的RSD分别为0.19%、0.23%、0.22%,结果说明被测溶液在24h内稳定。2.9对照品的稀释及检出限使用“2.5”项中进行线性关系考察时配置的樟脑0.101mg/mL、异龙脑99.75μg/mL、l-龙脑0.102mg/mL的混合对照品储备液,以10倍为梯度进行稀释,然后测定各梯度稀释液,观察对照品的检出限,结果樟脑、异龙脑、l-龙脑的检出限分别为0.101、0.09975、0.102μg/mL。2.10加样回收率试验精密称定供试品艾片(批号112301)约100mg,9份,分别置50mL量瓶中,3份为1组作为一个水平的平行样,每组分别精密加入对照品混合储备液5、10、15mL,每个量瓶中加入内标溶液10mL,加醋酸乙酯稀释并定容,摇匀,每个样平行测定3次,计算得樟脑、异龙脑、l-龙脑的平均回收率分别为97.52%、98.31%、98.16%,RSD分别为1.45%、1.18%、1.32%。2.11样品测定结果精密称定各批次艾片0.1g,置25mL量瓶,加入5mL内标溶液,加醋酸乙酯稀释并定容,摇匀,精密量取1μL进样测定,每批次平行测定3份,各成分测定结果见表1,结果表明各批次样品均达到《中国药典》2010年版的质量要求。3p-woa和db-5艾片是由艾纳香叶通过蒸馏法制得,艾片主要成分为l-龙脑,还含有少量的樟脑和异龙脑。传统填充柱对异龙脑和l-龙脑不能完全分离,分别尝试毛细管柱CP-WAX和DB-5,以及不同程序升温进行测定,结果以毛细管柱CP-WAX和上述升温程序分离效果好。如需要更快的分析速度,还可调整升温程序降低保留时间。本实验采用自动进样