不同产地、等级和炮制方法对杭白菊挥发油的影响

不同产地、等级和炮制方法对杭白菊挥发油的影响

杭州菊是浙江省桐乡市的一种“浙江八味”之一。它具有抗菌、弹性、耐候性等功能。主要成分包括挥发油、黄酮等。研究认为,挥发油是菊花抗菌作用的物质基础,而樟脑、龙脑则是发挥抗菌作用的主要成分。现有文献关于菊花挥发油的研究均侧重于挥发油总量以及樟脑、龙脑含量。本实验室通过杭白菊挥发油气质联用的分析,并参考文献,发现其含有较多的β-榄香烯,然而目前对杭白菊中β-榄香烯的研究笔者未见报道。本实验对不同产地、等级、炮制工艺的杭白菊挥发油中β-榄香烯、樟脑及龙脑的含量进行了测定,为杭白菊的质量控制及挥发油的合理利用提供参考。1仪器和用品1.1仪器挥发油测定器,SHIMADZUGC-14B气相色谱仪。1.2种植基地及加工样品均由浙江桐乡5个杭白菊主产区的种植基地代为采集、加工,经浙江大学药学院天然药物教研室徐娟华副教授鉴定为FlosChrysanthemi。1.3-榄香烯乳剂对照品:樟脑(批号:747-200005)、龙脑(批号:881-200001含量89.1%)购于中国药品生物制品检定所;β-榄香烯按文献方法由β-榄香烯乳剂提取、纯化,经CGC测定,面积归一化法计算其含量为91.2%。其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1空气温度和空气温度色谱柱为安捷仑HP-5毛细管色谱柱。柱温70℃,以2.5℃·min-1升温速率升到140℃,再以10℃·min-1升温速率升至260℃,气化室温度280℃,检测器FID温度300℃,分流比20∶1,氮气流速1mL·min-1,空气350mL·min-1,氢气70mL·min-1,灵敏度10AUFS。选用正辛醇为樟脑、龙脑内标,正十四烷作为β-榄香烯的内标。2.2溶液制备2.2.1正己烷贮备液及内标溶液配制精密称取正辛醇26.2mg,正十四烷267.8mg,用正己烷溶解并定容至10mL,作为内标贮备液,该贮备液再以正己烷稀释成0.6550mg·mL-1正辛醇和6.695mg·mL-1正十四烷的内标溶液。2.2.2对照品贮备液的制备分别精密称取11.9mg樟脑,13.3mg龙脑,80.0mgβ-榄香烯,以正己烷溶解并定容至一定体积,分别制成5.950,1.662及16.000mg·mL-1的对照品贮备液,摇匀,备用。2.2.3挥发油测定方法依照中国药典,将样品粉碎,精密称取50g置1000mL烧瓶,加入500mL蒸馏水,连接挥发油测定器,冰水冷凝,微沸5h,待冷却分层后,加入1mL乙醚,收集挥发油,挥干溶剂,用正己烷定容于2mL量瓶中后,精密移取0.8mL置于另一个1mL量瓶中,精密加入0.1mL内标溶液,用正己烷稀释至刻度,摇匀。2.3相邻组分分离度样品及对照品溶液按“2.1”色谱条件进样1μL,色谱图见图1。各待测组分与相邻组分均能基线分离,经化学工作站计算得正辛醇、樟脑、龙脑、β-榄香烯、正十四烷的分离度分别为3.8,2.2,1.7,2.7,2.2;理论塔板数分别为:145741,174053,191387,459811,438520。2.4线性关系考察和样本分析从对照品贮备液中分别精密移取120μL樟脑溶液,220μL龙脑溶液,1250μLβ-榄香烯溶液,加入200μL内标溶液,以正己烷定容至2mL。再依次稀释2倍、4倍、8倍、16倍,且于稀释前添加内标至200μL。取1μL对照品溶液,以“2.1”色谱条件进样。以对照品浓度为纵坐标,对照品峰面积与相应内标物峰面积之比为横坐标进行线性回归,结果见表1。按相同方法操作空白样品色谱图中未出现干扰峰。2.5对照品峰面积取“2.5”中稀释4倍的对照品溶液,按“2.1”色谱条件进样1μL测得峰面积,计算对照品峰面积与相应内标峰面积之比,得β-榄香烯、樟脑、龙脑的RSD分别为:1.1%,0.62%,0.31%(n=5)。2.6重复性试验取同一样品5份,平行提取、测定待测组分峰面积与相应内标峰面积之比,得β-榄香烯RSD=0.90%,樟脑RSD=1.7%,龙脑RSD=1.9%,表明本法测定重复性好。2.7加样密度取同一份供试品溶液,于0,1,3,7,24h分别进样,计算待测成分峰面积与相应内标峰面积之比,得樟脑RSD=1.6%,龙脑RSD=2.0%,β-榄香烯RSD=1.2%(n=5)。表明样品在24h内稳定。2.8加对照品回收率测定采用加样回收率实验,精密称取已测知含量的杭白菊样品9份,每份25mg,每3份1组,按高、中、低3个水平分别精密加入一定量对照品,按“2.3.3”供试品溶液制备项下操作,进样,计算回收率,结果见表2。从表2可知,以本法测定菊花中樟脑、龙脑及β-榄香烯的含量具有较高的回收率。2.9杭白菊中-榄香烯、樟脑及龙脑含量的变化按“2.3.3”挥发油提取及“2.1”方法,测定不同产地、不同等级、不同炮制工艺及贮存时间杭白菊样品19批,内标法计算样品中各成分含量,结果见表3,表4。表3中测定样品为2002年采自浙江桐乡同福春发杭白菊种植基地,从表中可知,不同采摘日期的微波炮制杭白菊中β-榄香烯含量无明显变化,樟脑及龙脑含量波动较大,但无一定的变化规律。蒸制杭白菊采摘前期三者含量均较高,其含量与微波炮制工艺无明显差别,而采摘后期其含量明显下降。由表4知,不同产地同一等级的杭白菊中,β-榄香烯、樟脑及龙脑含量有一定差别,同一种植基地,不同等级杭白菊中β-榄香烯含量,随级别降低而呈下降趋势。樟脑及龙脑含量波动无规律。3不同产地中杭白菊挥发油含量的变化3.1杭白菊花期较短,每年10月底至11月底按采摘时间的先后习惯将杭白菊分成头次花、2次花及3次花。从微波炮制的杭白菊挥发油看,不同采摘时间的杭白菊中β-榄香烯含量均无明显变化,而传统蒸制杭白菊采摘后期的β-榄香烯含量显著低于采摘前期。考证了采摘期内天气变化情况,发现该期以阴雨天气为多,由于阴雨天气使得蒸制后干燥变得较为困难,因而影响其含量。微波炮制由于其干燥条件一致,因此杭白菊挥发油含量更能反映其含量与采摘时间的关系。3.2习惯上将头次花及2次花中外观较好的杭白菊归为甲级花。将2次花及外观较好的3次花归为乙级花。从本研究结果看,不同产地同一等级的杭白菊,β-榄香烯的含量也有较大的变化,可能与不同产地在炮制过程中条件不同有关。同一产地,不同等级的蒸制杭白菊中β-榄香烯含量凤鸣产的基本不变,而石门产的却呈明显的下降