巴特妥药物的提取方法及药物释放研究

巴特妥药物的提取方法及药物释放研究

1睡眠质量的影响巴比妥酸是一种镇静剂和镇静剂。它会导致几乎正常的睡眠，主要是由于中枢神经系统的抑制。如果大量药物，也会抑制循环系统和循环系统。过量的药物容易导致急性死亡。一般来说，服用后大约10小时。长期服用会导致药物积累和死亡。许多国家严禁将巴比妥药物用于人类，也禁止其作为饲料添加剂，兽药临床规定了巴比妥药物的休药期，防止动物体内该类药物蓄积浓度过高而影响食用者安全。2样本前处理方法2.1酶解纤维素ph体液中的巴比妥药物提取方法主要有三种：NaOH碱解，pH12时使药物转化为钠盐进入水相，水相再调节pH3.0～3.5，用有机溶剂萃取净化；或β-葡萄糖酸苷酶磷酸缓冲溶液（pH6.5）于37℃酶解，使结合的和轭合的药物释放，酶解必须针对药物的种类选择适当的水解酶；或向样本中直接加入磷酸缓冲溶液调pH，水样直接上SPE柱净化。组织样本一般选用甲醇作提取剂，提取方法有匀浆提取法、超声波辅助提取、超临界流体萃取、索氏提取和振荡提取。2.2样品筛选2.2.1spe和洗脱溶剂柱层析常用吸附剂为X-5树脂，是一种新型大孔高分子树脂，具有吸附量大、传质速度快、适用面广的特点；对酸性、中性、碱性药物都有较高的吸附率；样品处理速度快，杂质干扰少，在镇静安眠药物的多残留分析中广泛应用。SPE常用反相C18柱，如BondElutCertifySPE柱，常用洗脱剂为正己烷-乙酸己酯（LauraA.Adam,1998）。GDX-403固相萃取小柱是另一种常用的SPE柱（刘翠玲,1994）。2.2.2gc-ms法SMPE是在一根极细的纤维（如聚丙烯酸酯PA、聚乙二醇/二乙烯基苯CW/DVB等）上涂上吸附剂做成探针。探针插入液体或处于顶空状态，经过一定的平衡时间，探针吸附一定量的被测组分。将探针插入GC进样口，在高温下被测组分被分解吸附，直接进行GC检测。BradJ.Hall等使用CW/DVB成功从尿样中提取巴比妥药物，并用GC-MS测定，LOD为1ng/ml。SMPE与LLE相比具有操作简便、提取速度快，减少有机溶剂的用量的优点。与SPE相比SPME可以重复使用，不存在穿漏、堵塞等问题。但SPME纤维没有选择性，用沉浸法提取样本时，有大量的干扰物质被同时提取，降低了测定的特异性和灵敏度。U.Staerk采用高温SPME技术克服了这一缺点，在一个密封的小瓶中利用高温（200℃）将药物提取液加热，使药物挥发以蒸气形式存在，采用顶空技术提取药物，并在SPME的纤维上涂有衍生化试剂乙酸酐-吡啶，直接进行GC-MS分析，司可巴比妥、苯巴比妥在Scan扫描模式下LOD为0.5μg/ml。2.2.3衍生化试剂法SBSE是一种新的从水样（如血、尿）中提取富集有机物的样本处理技术，原理是在一个玻璃棒上涂有一层聚二甲基硅氧烷（PDMS）树脂，吸附水样中的有机物。将玻棒与水样以及衍生化试剂一同搅拌一段时间，取出玻棒，吸干水分，用适宜的有机溶剂洗脱靶标分析物，进行分析。对于挥发性或半挥发性的药物，采用热解吸（TD）技术，使SBSE与GC-MS或HPLC-MS联用进行在线分析。B.Tienpont等首先将SBSE-TD-GC-MS技术在测尿中巴比妥药物时使用，乙酸酐作衍生化试剂，在Scan模式下LOD值为1μg/L,LOQ值为5μg/L。SIM模式下LOD值为10ng/L。2.2.4高效、应用好SFE是利用超临界流体（如超临界CO2）作溶剂提取混合物中可溶性组分的一种前处理技术。具有速度快、效率高、选择性好、应用范围广、无毒不污染环境等优点。利用超临界CO2作溶剂，萃取温度45℃，压力550MPa下，GC直接测定了动物胃、肝脏中的巴比妥药物，提取率达89.98%，整个分析时间为40min（徐远清,2002）。3测量3.1检测nd和fid的灵敏度巴比妥药物极性较弱，熔点低，加热易挥发，可用气相色谱检测。巴比妥药物含有氮元素，NPD和FID均能检测，NPD的灵敏度较高，LOD值在10～100ng/ml;FID的LOD值为10～400ng/ml。GC在安眠镇静药物的多类别多残留分析中发挥了重要作用，同时分离分析药物达26种之多（霍秀敏,1994）。3.2衍生化药物的检测MS作为GC检测器可以同时完成对巴比妥药物的定性确证和定量分析。测巴比妥药物，质谱的电离方式有化学电离源（CI）或电子轰击源（EI），内标法定量LOD值一般10ng/ml。巴比妥、戊巴比妥和异戊巴比妥的质谱图很类似，需要用色谱保留时间进行区分。硫喷妥等药物在GC分离时发生分解，分解产物产生与巴比妥相同的质谱图，需要GC与GC-MS综合分析确定药物成分。巴比妥药物净化后可直接用GC测定。但巴比妥药物的丙二酰脲环结构氮上有二个氢，采用衍生化技术可减小药物的极性，提高灵敏度和分离效果，得到更好的峰形，提高定性定量的准确性。巴比妥药物的检测限为10～30ng/ml，甲基化后降低为0.1～10ng/ml，常用的衍生化方法有甲基化、酰基化和硅烷基化。甲基化：巴比妥药物甲基化后得到1,3-二甲基巴比妥药物。常用的甲基化试剂是CH3I，丙酮介质中加入K2CO3和CH3I,60℃下衍生1h。或氢氧化四甲铵（TMAH），在DMSO介质中静止反应2min,TMAH又称瞬时甲基化试剂（Ulla-Malja,1994）。乙酰化：巴比妥药物的环结构氮上的活泼氢可被乙酰化。在吡啶存在下，与乙酸酐在70℃反应5min即可；或在K2CO3存在下，与乙酸酐常温下静止20min；或在乙醇：吡啶（2:1,V/V）条件下，与三氯乙酸（ECF）混匀，超声15min。硅烷基化：巴比妥药物的二酰脲结构中有可烯醇化的酮基（邻位氮原子有氢原子），易形成硅烷烯醇醚衍生物。硅烷基化试剂为BSTFA和TMS，在吡啶介质中，静止10min即可吹干进行GC分析（Pocci,-R.,1992）。MSTFA是另一种常用的硅烷基化试剂。高灵敏度是残留分析追求的永远主题。M.W.JvanHout首先将大体积进样技术（LVTs）和程序升温汽化技术（PTV）用于巴比妥类药物的残留分析，进样量为50～100μl，建立了血中苯巴比妥、司可巴比妥等的GC-MS、GC-FID检测方法，其中GC-FID的LOD值为5～10ng/ml,GC-MS的LOD值为250pg/ml。与一般的分流/不分流进样（1μl）相比灵敏度提高了50倍。3.3lod检测柱和检测波长巴比妥的HPLC测定方法可在水相中进行，样品不需衍生处理。采用反相HPLC测定，测定常用的色谱柱是C18柱，检测器为紫外检测器（UV），检测波长为254nm，一般以磷酸盐缓冲溶液（PH3.5～7.8）-乙腈或甲醇-水作流动相，内标法定量LOD最低可达0.35μg/ml。二极管阵列检测器（DAD）和电化学检测器（MartinD.Rose,1992）的检测限较UV检测器低。3.4药物分离和高效分离巴比妥药物的HPLC-MS测定多采用电喷雾电离ESI和大气压化学电离APCI,LOD值在20ng/ml左右。TimothyW.Ryan利用粒子束接口技术，EI/CI电离方式分析了12种巴比妥药物，并用EI谱库检索，确证了药物结构，证明用HPLC-MS对巴比妥可以较好的定性。Hideko用磷酸盐缓冲溶液-乙腈作流动相，利用柱分离技术在样本进入MS前除去磷酸盐缓冲溶液，提高分离效率，同时检测苯二氮卓、巴比妥、吩噻嗪三类镇静药物。胶束电动毛细管电泳、胶束液相色谱、高效毛细管电泳、酶联免疫以及光度法在巴比妥药物的残留分析中均有报道，但尚处于发展阶段。4检测前处理技术的研究对巴比妥药物残留检测分析方法的研究，可以监测动物饲料、动物疾病治疗等滥用药物的情况，保障食用者的安全。但在以下几个方面还需加大研究力度：第一，动物食品及组织中巴比妥药物的检测和复杂的前处理技术研究；第二，动物食品中巴比妥药物的检测研究，（动物食品中巴比妥药物的检测还没有象其他药物如氯霉素、瘦肉精一样形成具体的