实时荧光定量PCR(qPCR,RT-PCR)的原理及应用

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2013-11-26实时荧光定量PCR技术

的原理及应用

（RealTimeQuantitativePCR）Contents一、实时荧光定量PCR的定义二、RT-PCR技术的原理及试验流程三、RT-PCR技术的数据分析四、RT-PCR技术的应用实时荧光定量PCR目录PCR电泳实时荧光定量PCR的定义

普通PCR在PCR结束后对进行定量分析终点产物PCR技术和荧光检测技术的结合通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，通过仪器和相应的软件分析结果，对待测样品的初始模板进行定量或定性分析。

克服了普通PCR：1、终点定量重复性不好2、EB有毒，荧光太贵等缺点实时荧光定量PCR的定义

PCR技术和荧光检测技术的结合通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，通过仪器和相应的软件分析结果，对待测样品的初始模板进行定量或定性分析。实时荧光定量PCR的定义

？为什么选择对初始模板定量而不是终产物定量RT-PCR技术的原理及试验流程

RT-PCR技术的原理及试验流程

RT-PCR反应体系模板4.5μlTagmixture5.0μlF(F’)0.25μlR(R’)0.25μl荧光染料

SYBRGreenI荧光标记的探针TaqMan探针法RT-PCR技术的原理及试验流程

MonitoringPCRwiththeSYBRGreenIDye（SYBRGreen法）变性退火延伸RT-PCR技术的原理及试验流程

SYBRGreen法优缺点RT-PCR技术的原理及试验流程

RT-PCR技术的原理及试验流程

MonitoringPCRwithTaqMan（TaqMan法）RT-PCR技术的原理及试验流程

TaqMan法

TaqMan探针法优缺点

RT-PCR技术的原理及试验流程

•绝对定量(AbsoluteQuantification，AQ)

病原体检测转基因食品检测基因表达研究•相对定量(RelativeQuantification，RQ)

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