酶工程考试复习题及答案

酶工程考试复习题及答案一、名词解释题酶活力:是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表达，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。酶的专一性:是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用的性质，一般又可分为绝对专一性和相对专一性。酶的转换数:是指每个酶分子每分钟催化底物转化的分子数，即是每摩尔酶每分钟催化底物转变为产物的摩尔数，是酶的一种指标。酶的发酵生产:是指通过对某些特定微生物进行发酵培养后，运用微生物生长发酵过程中特定的代谢反应生成生产所需要的酶，最终通过提取纯化过程得到酶制剂的过程称为酶的发酵生产。酶的反馈阻遏:细胞破碎:是指运用机械、物理、化学、酶解等措施，使目的细胞的细胞膜或细胞壁得以破坏，细胞中的目的产物得以选择性或所有释放便于后续搜集和分离的过程称为细胞破碎。酶的提取:是指在一定的条件下，用合适的溶剂处理含酶原料，使酶充足溶解到溶剂中的过程，也称作酶的抽提，是酶分离纯化过程常用的手段之一。沉淀分离:是通过变化某些条件，使溶液中某种溶质的溶解度减少，从溶液中沉淀析出，而与其他溶质分离的措施，常用语酶的初步提取与分离。层析分离:亦称色谱分离，是一种运用混合物中各组分的物理化学性质的差异，使各组分以不一样程度分布在两个相中，其中一种相为固定的(称为固定相)，另一种相则流过此固定相(称为流动相)并使各组分由于与固定相和流动相作用力的不一样以不一样速度移动，从而到达分离的物理分离措施。凝胶层析:又称为凝胶过滤，分子排阻层析，分子筛层析等。是指以多种多孔凝胶为固定相，在流动相冲洗过程中混合物中所含多种组分的相对分子质量和分子大小不一样，在固定相凝胶微孔中移动的距离不一样，从而依次从层析柱中分离出来，到达物质分离的一种层析技术。亲和层析:是运用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，将混合物装入层析柱中运用流动相的冲洗作用和目的分子与固定相配基亲和作用力不一样而使生物分子分离纯化的技术。离心分离:借助于离心机旋转所产生的离心力，使不一样大小、不一样密度的物质分离的技术过程。电泳:带电粒子在电场中向着与其自身所带电荷相反的电极移动的过程称为电泳。运用不一样的物质其带电性质及其颗粒大小和形状不一样，在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不一样，故此可使它们分离，电泳技术是常用的分离技术之一。萃取:是运用物质在两相中的溶解度不一样而使其分离的技术。双水相萃取:双水相是指某些高聚物之间或者高聚物与无机盐之间在水中以一定的浓度混合而形多种不相溶的两水溶液相。由于溶质在这两相的分派系数的差异进行萃取的措施称为双水相萃取。超临界萃取:又称超临界流体萃取，是运用欲分离物质与杂质在超临界流体中的溶解度不一样而实现分离的一种萃取技术。过滤:借助于过滤介质将不一样大小、不一样形状的物质分离的技术过程称为过滤。膜分离技术:借助于一定孔径的高分子薄膜，将不一样大小、不一样形状和不一样特性的物质颗粒或分子进行分离的技术称为膜分离技术。结晶固定化酶:通过结晶的手段，将晶体酶束缚于水不溶的载体上，限制酶分子的自由流动，但能使酶充足发挥催化作用的一种酶的固定化技术。固定化细胞:固定在载体上并在一定的空间范围内进行正常的生长、繁殖和新陈代谢等生命活动的细胞称为固定化细胞，又称固定化活细胞或固定化增殖细胞。吸附法:通过氢键、疏水作用和π电子亲和力等物理作用或离子互换作用，将酶固定于水不溶载体上，从而制成固定化酶的措施称为吸附法包埋法:是将聚合物的单体与酶溶液混合，再借助于聚合助进剂(包括交联剂)的作用进行聚合，酶被包埋在聚合物中以到达固定化的措施称为包埋法。结合法:在合适的pH和离子强度条件下，运用酶的侧链解离基团和离子互换剂的互相作用而到达酶的固定化的措施称为结合法也称为键合法交联法:借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成网状构造的固定化酶的措施称为交联法。酶的定向固定:把酶和载体在酶的特定位点连接起来，使酶在载体表面按一定方向排列从而提高固定化酶活性的固定化措施称为酶的定向固定。酶分子修饰:通过多种措施使酶分子的构造发生某些变化，从而变化酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。金属离子置换修饰:把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生变化的修饰措施称为酶的金属离子置换修饰。大分子结合修饰:把酶分子通过共价作用或非共价作用与某些特定的大分子结合，从而使酶的特性和功能发生变化的修饰措施称为酶的大分子结合修饰。肽链有限水解修饰:运用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学构造及其空间构造发生某些变化，从而变化酶的特性和功能的措施称为酶的肽链有限水解修饰也称为酶蛋白主链修饰。核苷酸剪切修饰:运用一定的措施（一般为化学法）在DNA转录过程中通过将目的酶蛋白核苷酸的部分剪切，从而通过蛋白质翻译后变化酶的构造、特性和功能的措施称为酶的核苷酸剪切修饰。酶的侧链基团修饰:采用一定的措施（一般为化学法）使酶蛋白的侧链基团发生变化，从而变化酶分子的特性和功能的修饰措施称为酶的侧链基团修饰。氨基酸置换修饰:在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的变化获得突变基因，对酶蛋白中特定的氨基酸进行置换，从而变化酶分子的特性和功能的修饰措施称为氨基酸置换修饰。定点突变:是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的变化从而获得突变基因的操作技术。核苷酸置换修饰:通过定点突变等技术对酶蛋白分子DNA序列中的某一特定核苷酸序列进行替代从而变化酶蛋白中特定氨基酸的种类实现酶分子特性和功能变化的修饰措施称为核苷酸置换修饰。核酶:是指具有催化功能的RNA分子，是生物催化剂，一般具有降解特异的mRNA序列等功能，又称核酸类酶、酶RNA、核酶类酶RNA。它的发现打破了酶是蛋白质的老式观念。模拟酶:研究天然酶中那些起主导作用的原因，运用有机化学、生物化学等措施设计和合成某些比天然酶简朴的具有催化功能的非蛋白质分子或蛋白质分子称为模拟酶。抗体酶:是指通过对生物抗体进行特定的修饰作用在其可变区赋予酶的催化结合等属性制备出的一种催化功能的抗体分子，是一种新型人工酶制剂。生物催化:运用酶或者生物有机体（细胞、细胞器、组织等）作为催化剂进行化学转化的过程。酶反应器:在工业生产中以酶作为催化剂进行反应所需的设备称为酶反应器，是用于完毕酶促反应的关键装置。它为酶催化反应提供合适的场所和最佳的反应条件，以便在酶的催化下，使底物（原料）最大程度地转化成产物。搅拌罐式反应器:又称为批量反应器、间歇式搅拌罐。由容器、搅拌器及保温装置构成，底物与酶一次性投入反应器内，产物一次性取出，反应完毕之后，酶（细胞）用过滤法或超滤法回收，再转入下一批反应的一类反应器。填充床式反应器:又称固定床反应器，是将固定化酶填充于反应器内，制成稳定的柱床，然后通入底物溶液，在一定的反应条件下实现酶催化反应，以一定的流速搜集输出的转化液（含产物）的一类反应器。流化床式反应器:是将底物溶液以足够大的流速，从反应器底部向上通过固定化酶柱床，使固定化酶颗粒一直处在流化状态，使反应液的混合程度介于全混型和平推流型之间。即可用于处理黏度较大和具有固体颗粒的底物溶度，同步亦可用于需要供气体或排放气体（即固、液、气三相反应）的酶反应器称为流化床式反应器。鼓泡式反应器:是运用从反应器底部通入的气体产生的大量气泡，在上升过程中起到提供反应底物和混合两种作用的一类反应器。也是一种无搅拌装置的反应器。膜反应器:是一种将酶催化反应与半透膜的分离作用组合在一起而成的反应器，可以用于游离酶的催化反应，也可以用于固定化酶的催化反应。喷射式反应器:通入高压喷射蒸汽，实现酶与底物的混合，进行高温短时催化反应，合用于某些耐高温酶的一类反应器称为喷射式反应器。二、填空题根据国际系统分类法，将所有已知的酶按照催化反应类型分为：＿氧化还原酶＿、＿转移酶＿、＿水解酶＿、＿裂合酶＿、＿异构酶＿、＿合成酶＿六大类。酶活力是＿催化速率快慢＿的量度指标，酶的比活力是＿纯度高下＿的量度指标，酶的转换数的重要组分是＿酶催化周期长短＿的量度指标.1961年，国际酶委员会规定的酶活力单位为：在特定条件下（25℃，pH及底物浓度为最合适）＿每1min＿，催化＿1μmol＿的底物转化为产物的＿酶量酶活力的测定措施有＿终点法＿、＿动力学法＿、＿酶偶联法＿和＿电化学法＿。决定酶催化活性的原因有两个方面，一是＿酶分子构造＿，二是＿反应条件＿。求Km最常用的措施是＿双倒数作图法＿。＿戊二醛＿、＿二氨基丁烷＿、＿乙二胺＿是酶分子修饰中分子内交联最常用的交联剂。1960年，查柯柏和莫洛德提出了操纵子学说，认为DNA分子中，与酶生物合成有关的基因有四种，即操纵基因、调整基因、＿启动基因＿和＿构造基因＿。SDS是运用蛋白质的＿自身相对分子质量不一样＿进行分离，离子互换层析是运用蛋白质的＿对不一样离子亲和作用力不一样＿进行分离。可逆克制作用可分为＿竞争性克制作用＿、＿非竞争性克制作用＿和＿反竞争性克制作用＿。酶活力的测定措施可用＿终止＿反应法和＿持续＿反应法。一般酶的固定化措施有＿吸附法＿、＿交联法＿、＿键合法＿、和＿包埋法＿。酶分子的体外改造包括酶的＿化学酶工程＿修饰和＿生物酶工程＿修饰。模拟酶的两种类型是＿全合成＿酶和＿半合成＿酶。抗体酶的制备措施有＿引入＿法和＿拷贝＿法。根据酶和蛋白质在稳定性上的差异而建立的纯化措施有＿热变性＿法和＿酸碱变性＿法。酶的生产措施有＿提取法＿、＿发酵法＿和＿化学合成法＿。日本称为“酿素”的东西，中文称为＿酶＿，英文则为＿Enzyme＿是库尼于1878年首先使用的。其实他存在于生物体的＿细胞外＿和＿细胞内＿中。酶分子修饰的重要目的是改善酶的性能，即提高酶的＿活性＿、减少＿抗原性＿，增长＿稳定性＿。借助＿双功能试剂＿使＿酶分子之间＿发生交联作用，制成网状构造的固定化酶的措施称为交联法。酶的分离纯化措施中，根据目的酶与杂质分子大小差异的分离措施有＿凝胶过滤＿法、＿超滤＿法和＿超离心＿法三种。由于多种分子形成结晶条件的不一样，也由于变性的蛋白质和酶不能形成结晶，因此酶结晶既是＿纯化手段＿，也是＿纯化标志＿。酶催化的作用机理在于能减少反应的＿活化能＿。非竞争性克制的特点是最大反应速度Vm＿＿＿＿＿，米氏常数Km＿＿＿＿＿。细胞破碎的重要措施有机械破碎，物理破碎，＿化学破碎＿和＿酶促破碎＿。酶的提取措施重要有盐溶液提取，酸溶液提取，碱溶液提取和＿有机溶剂提取＿。结晶的措施重要有＿盐析结晶＿，有机溶剂结晶法，透析平衡结晶法，等电点结晶法。加压膜分离可分为微滤，＿超滤＿和反渗透。常用的萃取措施有有机溶剂萃取，双水相萃取，＿超临界流体萃取＿和反胶束萃取。固定化酶是固定在载体上并在一定的空间范围内进行＿催化反应＿的酶。固定法细胞是固定在载体上并在一定空间范围内进行＿生命活动＿的细胞。固定化对酶反应有：＿＿＿＿＿，＿＿＿＿＿，＿＿＿＿＿，＿＿＿＿＿。用带负电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH比游离酶的最适pH＿向碱性方向移动偏高＿，用带正电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH比游离酶的最适pH＿向酸性方向移动偏低＿，用不带电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH与游离酶的最适pH＿相近＿。酶催化反应的产物为酸性是，固定化酶最适pH比游离酶的最适pH＿高＿。定点突变是在DNA序列的＿某一特定位点上＿进行碱基的变化，从而获得＿基因突变＿的操作技术。模拟酶在构造上必须具有两个特殊位点，一种是＿结合＿位点，一种是＿催化＿位点。抗体酶常用的制备措施有＿细胞融合法＿、＿抗体结合位点化学修饰法＿、＿引入辅助因子法＿、＿拷贝法＿等。搅拌罐式反应器重要由反应罐，＿搅拌器＿和温度调整装置构成。填充床式反应器是通过＿底物溶液＿的流动，实现物质的传递和混合。鼓泡式反应器是＿有气体参与＿的酶催化反应中最常用的一种反应器。膜反应器是将酶的＿催化效应＿与半透膜的＿分离作用＿组合在一起而形成的反应器。喷射式反应器是运用＿高压蒸汽＿的喷射作用，实现酶与底物的混合，进行＿高温短时＿催化反应的一种反应器。问答题举出四例，阐明酶在医学上有广阔的用途。酶作为一种生物催化剂已经被广泛的运用于各个生产生活领域，在医学方面酶也可用于疾病的诊断与治疗。如葡萄糖氧化酶用于测定血糖、尿糖，诊断糖尿病。尿素酶测定血液、尿液中尿素的量，诊断肝脏、肾脏病变。溶菌酶具有抗菌、消炎、镇痛等作用，用于治疗手术性出血、咯血、鼻出血，分解脓液，消炎镇痛等。超氧化物歧化酶（SOD）催化超氧负离子（O2ˉ）进行氧化还原反应，使机体免遭O2ˉ的损害。因此SOD具有抗辐射作用，并对红斑狼疮、皮炎、结肠炎及氧中毒等疾病有明显疗效。怎样检查一种酶的制剂与否到达了纯的制剂？试用所学过的知识加以论述。一般检查一种酶的制剂与否到达了纯的制剂的措施是通过对酶的均一性进行检测而实现的，不过要提出一种酶的均一性的绝对原则很难，因此实际工作中一般采用相对纯度原则。对酶制剂中存在某些小分子物质，不能认为该酶制剂不均一也就是不纯。一般鉴定酶均一性的详细措施有：(1)根据酶分子的大小、形状进行检测（超速离心)(2)根据酶分子的电荷或电荷与分子大小的性质进行检测（电泳、SDS－电泳）(3)根据酶分子的化学性质进行检测（等电聚焦）(4)根据酶分子的免疫学性质进行检测（免疫技术）(5)此外，尚有溶解度结晶措施等其他措施（N－末端分析），由于不一样工作对酶纯度规定及定义不一样以及纯度鉴定措施和纯度原则规定，对酶的均一性鉴定和检测采用的措施和原则也各不相似，因此对详细问题要详细分析，防止简朴化。简述酶催化的特性。酶是生物催化剂，除了具有化学催化剂减少反应活化能加紧反应速率不变化反应平衡点等共同特性外还具有如下特性：1.催化活性易受外界条件影响，对温度、酸碱性、重金属盐等条件敏感。2.高效性，酶的催化活性一般要比化学催化剂高107－1013倍。3.专一性一种酶只能催化一种或一类构造相似的底物进行某类的反应，对其他底物和反应无催化效应。4.催化活性可调控性，生物体内化学反应和酶种类繁多，但酶活性是可以受到调控的，其调控的方式也诸多。5.反应条件温和性，酶一般是生物体内的蛋白质或核酸类物质，由于生物体内环境稳定且较为稳定，因此酶的催化条件也具有温和性。简述固定化细胞有哪些优缺陷。固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞称为固定化细胞.该细胞能进行正常的生长、繁殖和新陈代谢，又称固定化活细胞或固定化增殖细胞。固定化细胞是在固定化酶的基础上发展起来的。它的长处如下:(1)省去了酶的分离手续．为多酶系统，不必辅因子再生。(2)细胞生长快、并且多、反应快。(3)可以持续发酵，节省了成本，并且在蒸馏和提取前不用分拜别细胞，能一边徘出发酵液，一边进行培养，排除了产物克制和消耗。(4)保持酶在细胞内的原始状况，增长了酶的稳定、尤其是对污染因子的抵御力增长等。它的缺陷如下：(1)必须保持菌体的完整，防止菌体自溶，否则，将影响产品纯度。(2)必须防止细胞内蛋白酶对所需酶的分解，同步，需克制胞内其他酶的活性止副产物的形成。(3)细胞膜、壁会阻碍底物渗透和扩散（4）运用的仅是胞内酶，且其他胞内酶轻易形成不需要的副产物等。简述生物印迹酶的种类及制备过程。生物印迹是分子印迹的一种形式，它是指生物材料，如蛋白质和糖类物质为骨架，在其上进行分子印迹而产生对印迹分子具有特异性识别空腔的过程。一般生物印迹酶包括1.有机相生物印迹酶、2.水相生物印迹酶两类。有机相生物印迹酶制备的过程是：1.将底物脂肪以脂质体形式靠近酶，2.将合适两亲性的表面活性剂与酶印迹，3.将完毕的酶复合物冷冻干燥用非水溶剂洗去表面活性剂，4.获得活性中心启动的活性有机相生物印迹酶。水相生物印迹酶的制备过程一般是选择印迹分子然后与酶蛋白分子混合，待起始蛋白在变性条件下与印迹分子充足作用后，用交联剂固定印迹蛋白的构象，经透析清除印迹分子后就得到了具有水解能力的水相生物印迹酶。固定化酶和游离酶相比有哪些优缺陷？固定化酶是通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶柬缚在一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶充足发挥催化作用的酶，它和水溶性酶比较具有如下长处：(1)极易将固定化酶与底物、产物分开；产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺.(2)可以在较长时间内反复使用，有助于工艺的持续化、管道化。(3)酶反应过程可以严格控制，有助于工艺自动化和微电脑化。(4)在绝大多数状况下提高了酶的稳定性。(5)较能适应于多酶反应。(6)酶的使用效率提高，产物得率提高，产品质量有保障，成本低等。固定化酶也存在某些缺陷：(1)酶固定化时酶的活力有所损失。同步也增长了固定化的成本，使工厂开始投资大。(2)固定化效率低，比较适应水溶性底物和小分子底物。(3)与完整细胞比较，不适于多酶反应，尤其是需要辅因子的反应，同步对胞内酶需经分离后，才能固定化等。酶分子修饰的措施有哪些？酶分子修饰的目的是什么？酶分子修饰的措施多种多样，重要有1.金属离子置换修饰、2.大分子结合修饰、3.肽链有限水解修饰、4.酶蛋白侧链基团修饰、5.氨基酸置换修饰、6.核苷酸链剪切或置换修饰、7.物理修饰、8.基因水平的修饰等。酶分子修饰的目的是：1.提高酶活力、2.改善酶的稳定性、3.容许酶在一种变化的环境中起作用、4.变化酶催化的最适pH或温度、5.变化酶的特异性、6.变化酶催化反应类型、7.提高催化过程的反应速率等。简述酶的催化特点和催化机理。酶具有一般催化剂的特性：1.只能进行热力学上容许进行的反应；2.可以缩短化学反应抵达平衡的时间，而不变化反应的平衡点；3.通过减少活化能加紧化学反应速度。还具有如下特性：1.催化活性易受外界条件影响，对温度、酸碱性、重金属盐等条件敏感。2.高效性，酶的催化活性一般要比化学催化剂高107－1013倍。3.专一性一种酶只能催化一种或一类构造相似的底物进行某类的反应，对其他底物和反应无催化效应。4.催化活性可调控性，生物体内化学反应和酶种类繁多，但酶活性是可以受到调控的，其调控的方式也诸多。5.反应条件温和性，酶一般是生物体内的蛋白质或核酸类物质，由于生物体内环境稳定且较为稳定，因此酶的催化条件也具有温和性。举例阐明固定化酶（细胞）的制备过程及原理。固定化酶（细胞）的制备过程是指将所需要固定的酶或者细胞通过物理吸附、交联作用、键合作用以及包埋作用等过程结合到选择好的一定载体上的过程。以微囊包埋法固定血红蛋白酶为例，其制备过程为先将具有高浓度血红蛋白的酶溶液在与水不互溶的有机相中乳化，在油溶性的表面活性剂存在下形成油包水的微滴，再将溶于有机溶剂的高聚物加入乳化液中，然后加入一种不溶解高聚物的有机溶剂，使高聚物在油-水界面上沉淀、析出，形成膜，将酶包埋，最终在乳化剂的协助下由有机相转移入水相中通过将微囊固定搜集得到微囊包埋固定化血红蛋白酶。该过程的原理是运用将乳化后的酶溶液与溶解的固定膜材料溶液混合后，通过加入不溶解高聚物的有机溶剂使高聚物分子在乳化液界面析出高聚物沉淀层形成高聚物微囊将酶溶液包埋固定得到固定化酶。简述抗体酶的制备措施及应用抗体酶的制备过程是通过对生物抗体进行某些特定的处理或修饰后使之具有酶催化某些反应的功能。目前抗体酶的制备措施重要包括：1.细胞融合法、2.抗体结合位点化学修饰法、3.引入辅助因子法、4.用生物工程措施产生抗体、5.拷贝法等。抗体酶的应用则重要应用于1.有机合成，抗体酶由于具有精确底物专一性和立体专一性可用于催化内消旋底物合成相似手性产物反应、2.阐明化学反应机制，、3.医疗，由于抗体酶既能标识靶抗原目的，又能执行一定的催化功能，通过这两种功能的结合，抗体酶可大力应用于戒毒和肿瘤治疗等。固定化措施有哪几种？并简述各自的机理。吸附法、吸附法固定化酶技术的原理是通过氢键、疏水键、电子亲和力等物理作用力将酶固定于不溶性载体上得到固定化酶。载体偶联键合法、键合法固定化酶技术的原理是选择一种合适的不溶性载体使它与酶分子上的某些非必须的游离基团发生反应，通过共价键或离子键使两者连接起来形成固定化酶。交联法、交联法固定化酶技术的原理是使用某种双功能或多功能试剂使酶与酶或细胞与细胞之间和多功能试剂间形成共价键得到三向的交联网架构造得到固定化酶。包埋法、包埋法固定化酶技术的原理是运用多孔性载体，通过网格包埋或微囊包埋过程不经化学反应与化学修饰措施将酶包埋在载体内部得到固定化酶论述酶工程的应用并分别举例阐明。伴随酶的工业化纪产的发展，酶已广泛地应用于工业、农业、医药、环境保护及科研等各个领域，在发酵工业中酶工程可用于生产葡萄糖。氨基酸有机酸等多种轻工食品原料，在医药领域酶工程技术可以应用于糖尿病、癌症等多种疾病的诊断和治疗与抗生素凝血素等多种药物制造等方面，在分析检测方面酶工程技术可以应用于生产食品迅速检酶测试纸、特异性检测酶柱和酶管、酶传感器等方面，在环境保护领域酶工程可用于环境检测、三废处理、生物脱墨等，在研究方面酶工程也可用于生物工程研究和阐明酶反应机制等方面研究。对酶进行化学修饰时应当考虑哪些原因？对酶进行化学修饰时应考虑如下原因：1.酶化学修饰措施的基本原理，选用对的合理的修饰措施。2.化学修饰剂的性质与规定，选用对的合理的化学修饰剂。3.酶自身条件和位点的性质，熟悉酶活性部位及有关条件和性质防止不妥或错误修饰。4.反应条件的选择，尽量在酶稳定条件下进行，并尽量不破坏酶活性功能的必需基团，使修饰率高，同步酶的活力回收高。对酶的初提取液通过一次纯化后，经测定得到如下数据，试计算比活力，回收率及纯化倍数。粗提液：体积100mL活力单位250u/mL蛋白氮2.5mg/mL硫酸铵沉淀：体积8mL活力单位800u/mL蛋白氮1.6mg/mL写出三种分离纯化酶蛋白的措施，并简述其原理。酶蛋白的分离纯化措施重要有沉淀法、层析法、电泳法、离心法、过滤与膜分离法、萃取法等。其中沉淀法的原理是通过变化某些条件，使溶液中某些溶质的溶解度减少，从而使其从溶液中沉淀析出，到达与其他溶质分离的目的，是酶蛋白分离纯化中最常用的的措施，重要有盐析法、共沉淀法、等电点法、有机溶剂法、热处理法等。层析法的分离原理是运用混合物中各组分的物理性质（分子大小形状、极性、亲和力、分派系数等）的不一样，使各组分在层析流动相和固定相中分布程度不一样而到达分离。生产中常用的层析措施有吸附层析、离子互换层析、凝胶层析、亲和层析、层析聚焦、高效液相层析等。电泳法的原理是运用不一样蛋白与酶蛋白自身带电状况和分子量等性质不一样，在稳定电场中向着与自身所带电荷相反的电极以不一样速率移动的措施到达分离纯化目的，常用的电泳技术有纸电泳、薄层电泳、薄膜电泳、凝胶电泳和等电点聚焦电泳等。填充床反应器和流化床反应器的优缺陷是什么？流化床反应器长处：(1)具有良好的传质及传热的性能。pH、温度控制及气体的供应比较轻易。(2)不易堵塞，可合用于处理粘度高的液体。(3)能处理粉末状底物。(4)虽然应用细粒子的催化剂，压力降也不会很高。缺陷如下：(1)需保持一定的流速，运转成本高，难于放大。(2)由于颗粒酶处在流动状态，易导致粒子的机械破损。(3)由于流化床的空隙体积大，酶的浓度不高。(4)由于底物高速流动使酶冲出，减少了转化率。填充床反应器长处是：高效率、易操作、构造简朴等，因而，PBR是目前工业生产及研究中应用最为普遍的反应器。它合用于多种形状的固定化酶和不含固体颗粒、黏度不大的底物溶液，以及有产物克制的转化反应。不过它存在下列缺陷：(1)温度和pH难以控制。(2)底物和产物会产生轴向浓度分布。(3)清洗和更换部分固定化酶较麻烦。（4）床内有自压缩倾向，易堵塞，且床内压力大底物需要加压注入。固定化后酶的性质会发生什么变化？1.稳定性提高，对酸、碱、热和变性剂的耐受能力增强。2.最适pH变化，根据固定载体性质和催化反应产物性质的不一样最适pH随之发生不一样变化。3.相对酶活力减少，由于空间位阻等变化酶活力大部分下降。4.最适温度变化，一般固定化酶反应最适温度比一般酶高某些。5.底物特异性变化，一般可作用于大分子底物的没特异性往往发生变化，作用于小分子底物的酶一般不发生变化。6.