抗生素类药物的分析课件-002

第十六章抗生素类药物的分析1感谢你的观看2019年8月29第十六章抗生素类药物的分析1感谢你的观看2019年8月29第一节概述一、抗生素药物的定义和特点

定义：抗生素是指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。抗生素的来源：1.生物合成（发酵）2.化学合成或半合成2感谢你的观看2019年8月29第一节概述一、抗生素药物的定义和特点定义：抗生素特点：1.化学纯度较低同系物多异构体多降解物多2.活性组分易发生变异3.稳定性差3感谢你的观看2019年8月29特点：1.化学纯度较低同系物多异构体多降解物多2.活性组分易

分类（按结构与性质）：

β–内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、多烯大环类、多肽类、苯烃胺类、蒽环类、其他抗生素类二、抗生素的分类三、抗生素药物的细菌耐药性耐药性的种类；耐药的机制4感谢你的观看2019年8月29分类（按结构与性质）：二、抗生素的分类三、抗生素药物的细抗生素质量的复杂性

产品稳定性差分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作用发酵过程不易控制易受污染生产工艺复杂四、抗生素药物的质量分析5感谢你的观看2019年8月29抗生素质量的复杂性产品稳定性差分子结构大多（二）检查：（一）鉴别：官能团的呈色反应光谱法、色谱法、生物学法1.影响产品稳定性的指标：水分2.控制有机和无机杂质的指标3.与临床安全性密切相关的指标:异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌4.其他检查项目6感谢你的观看2019年8月29（二）检查：（一）鉴别：官能团的呈色反应1.影响产品稳定性(三)含量或效价测定（一）微生物检定法:管碟法和浊度法测定抗生素抑菌或杀菌的能力，结果以效价表示优点1、与临床效果一致2、灵敏度高3、干扰物质少缺点1、操作繁琐2、培养时间长2、测定误差大7感谢你的观看2019年8月29(三)含量或效价测定（一）微生物检定法:管碟法和浊度法测定抗（二）理化方法以理化方法测定主药含量优点专属性强准确度高3.简单、快速不一定代表生物效价缺点（三）抗生素活性表示方法8感谢你的观看2019年8月29（二）理化方法以理化方法测定主药含量优点专属性强不一定代表生第二节β–内酰胺类抗生素

青霉素类9感谢你的观看2019年8月29第二节β–内酰胺类抗生素青霉素类9感谢你的观看2019青霉素（青霉素G、苄青霉素）10感谢你的观看2019年8月29青霉素（青霉素G、苄青霉素）10感谢你的观看2019年8月2头孢菌素类11感谢你的观看2019年8月29头孢菌素类11感谢你的观看2019年8月29酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐

（一）羧基

易溶于水

12感谢你的观看2019年8月29酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐（一）与有机碱(普鲁卡因)成盐

难溶于水普鲁卡因青霉素13感谢你的观看2019年8月29与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素13感谢你（二）旋光性头孢菌素类

C6C7青霉素类

C3C5C6

14感谢你的观看2019年8月29（二）旋光性头孢菌素类C6C7青霉素类

（三）紫外吸收特性头孢菌素类母核有共轭体系

青霉素类母核无明显UV

多数有苯环取代基

15感谢你的观看2019年8月29（三）紫外吸收特性头孢菌素类（四）β–内酰胺环

水溶液不稳定

干燥纯净稳定

不稳定性因素四元环张力大

酰胺键易水解

（某些金属离子）（温度）某些氧化剂16感谢你的观看2019年8月29（四）β–内酰胺环水溶液例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl217感谢你的观看2019年8月29例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉(头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%)18感谢你的观看2019年8月29(头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%)18感谢你的观看20色谱法（一）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法二、鉴别试验19感谢你的观看2019年8月29色谱法（一）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法二、鉴别试1、IR法β-内酰胺环酰胺（二）光谱法20感谢你的观看2019年8月291、IR法β-内酰胺环酰胺（二）光谱法20感谢你的观看2012、UV法样品、分解产物头孢氨苄

λmax=262nm青霉素V钠

A280nm/A264nm=1.30～1.50Cu2+21感谢你的观看2019年8月292、UV法样品、分解产物头孢氨苄λmax=262Cu2+pH3.8△22感谢你的观看2019年8月29Cu2+pH3.8△22感谢你的观看2019年8月29（三）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色Fe3+/3H+23感谢你的观看2019年8月29（三）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色2.茚三酮反应△24感谢你的观看2019年8月292.茚三酮反应△24感谢你的观看2019年8月29α-氨基、伯胺某些羟基胺类酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色25感谢你的观看2019年8月29α-氨基、伯胺酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色25感谢你的观3.与重氮苯磺酸反应:酚羟基（偶合）26感谢你的观看2019年8月293.与重氮苯磺酸反应:酚羟基（偶合）26感谢你的观看20（四）各种盐的反应1.K+、Na+反应2.重氮化-偶合反应重氮化-偶合反应27感谢你的观看2019年8月29（四）各种盐的反应1.K+、Na+反应2.重氮化-偶合反应重三、特殊杂质检查1、聚合物：分子排阻色谱法凝胶色谱柱－分子筛机制，色谱柱采用亲水硅胶、凝胶或葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶；流动相为水或缓冲液

28感谢你的观看2019年8月29三、特殊杂质检查1、聚合物：分子排阻色谱法28感谢你的观看2

如：头孢他啶聚合物的测定

固定相：葡聚糖凝胶G-10（40

120µm）

流动相A：3.5%硫酸铵的0.1mol/L磷酸盐缓冲液

流动相B：水检测波长：254nm

对照品溶液：头孢他啶对照品100µg/ml

29感谢你的观看2019年8月29如：头孢他啶聚合物的测定

固定相：葡聚糖凝胶G-10（系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用1mg/ml蓝色葡聚糖2000、流动相A测定；重复性用对照品溶液、流动相B测定。

N不低于900，拖尾因子<2，峰面积的RSD应小于5.0%。

测定方法：进样供试液，用流动相A；进样对照液，用流动相B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%。30感谢你的观看2019年8月29系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用1mg/ml蓝色葡聚糖2、有关物质和异构体头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查反相HPLC法固定相：ODS；流动相：0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇（62:38）3、吸光度

杂质吸光度、药物吸光度4、有机溶剂

气相色谱法测定溶剂残留量5、结晶性偏光显微镜法和X射线粉末衍射法31感谢你的观看2019年8月292、有关物质和异构体31感谢你的观看2019年8月29内标法＋校正因子外标法特点快速、高效、灵敏专属性强、重现性好

一法多用（鉴别、检查、含测）四、含量测定反相高效液相色谱法32感谢你的观看2019年8月29内标法＋校正因子外标法特点四、含量测定反相高效第三节氨基糖苷类抗生素链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、巴龙霉素等33感谢你的观看2019年8月29第三节氨基糖苷类抗生素链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素链霉胍链霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺链霉素化学结构34感谢你的观看2019年8月29链霉胍链霉糖N-甲基-L-链霉素化学结构34感谢你的观看20绛红糖胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺庆大霉素35感谢你的观看2019年8月29绛红糖胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-庆大霉素35感谢庆大霉素C复合物庆大霉素C1R=HR1、R2=CH3

庆大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

庆大霉素C1aR、R1、R2=H

庆大霉素C2aR=CH3R1=R2=H

36感谢你的观看2019年8月29庆大霉素C复合物36感谢你的观看2019年8月29性质：碱性多与硫酸成盐溶解性旋光性4.苷的水解和稳定性：酸性、碱性均易水解链霉素pH5～7.5；庆大霉素pH2～12稳定

5.UV：链霉素:230nm、庆大霉素等无37感谢你的观看2019年8月29性质：碱性多与硫酸成盐37感谢你的观看2019年8月29二、

鉴别试验茚三酮反应（一）△羟基胺结构（二）Molisch试验具有五碳糖或六碳糖结构H+糠醛或羟甲基糠醛α-萘酚蒽酮红紫色蓝紫色38感谢你的观看2019年8月29二、鉴别试验茚三酮反应（一）△羟基胺结构（二）MN-甲基葡萄糖胺反应（三）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛H+樱桃红色（Elson-Morgan反应）39感谢你的观看2019年8月29N-甲基葡萄糖胺反应（三）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物对二甲氨基(缩合)乙酰丙酮吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛H+樱桃红色40感谢你的观看2019年8月29(缩合)乙酰丙酮吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛H+樱桃红色40感麦芽酚反应（四）

链霉糖特有反应H+分子重排41感谢你的观看2019年8月29麦芽酚反应（四）链霉糖特有反应H+分子重排41感谢你的紫红麦芽酚42感谢你的观看2019年8月29紫红麦芽酚42感谢你的观看2019年8月29链霉胍特有反应（或α-萘酚）8-羟基喹啉坂口反应（五）橙红色化合物43感谢你的观看2019年8月29链霉胍特有反应（或α-萘酚）8-羟基喹啉坂口反应（五）橙红色（六）反应H+IR法（八）庆大霉素无UV吸收（七）色谱法：TLC法和HPLC法UV法光谱法：44感谢你的观看2019年8月29（六）反应H+IR法（八）庆大霉素无UV吸收（七）色谱法：T三、

特殊杂质检查及组分分析链霉素杂质（一）链霉素B（甘露糖链霉素）

方法TLC中的对照品法

1.来源反应中间体45感谢你的观看2019年8月29三、特殊杂质检查及组分分析链霉素杂质（一）链霉素对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同工艺差别C组分比例不一致规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素C组分的测定（二）46感谢你的观看2019年8月29对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同C组ChP（2010）采用蒸发光散射检测器测定庆大霉素C组分，以C18作固定相；0.2mol/L三氟乙酸－甲醇作流动相，小诺霉素作内标，考察系统适用性USP荧光衍生化后紫外测定（三）硫酸盐测定：剩余EDTA络合滴定法或HPLC法ChP（2010）中硫酸依替米星中硫酸根离子的测定采用HPLC法-蒸发光散射检测器47感谢你的观看2019年8月29ChP（2010）采用蒸发光散射检测器测定庆大霉素C组分，以四、含量测定微生物检定法各国药典主要采用HPLC法常用于体内药分

48感谢你的观看2019年8月29四、含量测定微生物检定法各国药典主要采用HPLC法第四节四环素类抗生素ABCD49感谢你的观看2019年8月29第四节四环素类抗生素ABCD49感谢你的观看201950感谢你的观看2019年8月2950感谢你的观看2019年8月29一、

结构与性质酸碱性与溶解度（一）1.与酸、碱均能成盐2.

强酸或强碱中溶解度↑

3.吸湿性多含结晶水酚羟基、烯醇型羟基弱酸性二甲胺基弱碱性51感谢你的观看2019年8月29一、结构与性质酸碱性与溶解度（一）1.与酸、碱均与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+

UV和荧光（三）与金属离子络合（四）pH3~7.5荧光

旋光性（二）52感谢你的观看2019年8月29与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+53感谢你的观看2019年8月2953感谢你的观看2019年8月29稳定性（五）1.差向异构化54感谢你的观看2019年8月29稳定性（五）1.差向异构化54感谢你的观看2019年8月29差向四环素55感谢你的观看2019年8月29差向四环素55感谢你的观看2019年8月29（土霉素、多西环素不易差向异构化）56感谢你的观看2019年8月29（土霉素、多西环素不易差向异构化）56感谢你的观看2019年2.降解反应（1）酸性下降解λmax=445nmλmax=435nm橙黄色57感谢你的观看2019年8月292.降解反应（1）酸性下降解λmax=445nmλmax脱水四环素58感谢你的观看2019年8月29脱水四环素58感谢你的观看2019年8月29～～TCETCATCEATC＜＜59感谢你的观看2019年8月29～～TCETCATCEATC＜＜59感谢你的观看2019年8（2）碱性下降解（荧光）60感谢你的观看2019年8月29（2）碱性下降解（荧光）60感谢你的观看2019年8月292、TLC法1、HPLC法：加入EDTA，克服痕量金属造成的拖尾现象二、鉴别试验3、IR光谱法4、UV光谱法61感谢你的观看2019年8月292、TLC法1、HPLC法：加入EDTA，克服痕量金属造成的5、显色法，与H2SO4反应显色6、FeCl3反应：酚羟基的特征反应62感谢你的观看2019年8月295、显色法，与H2SO4反应显色6、FeCl3反应：酚羟基的三、