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文档简介
血细胞液中加入一定量的蒸馄水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤提取的DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液。2.去除滤液中的杂血细胞液中加入一定量的蒸馄水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤提取的DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液。2.去除滤液中的杂其他植物、洗洁精、食盐、搅拌机或研钵(我们采用的是家用豆浆机在溶液中,DNA链略带负电荷,而盐离子可被吸引到DNA勺负电荷上,中和这些负电荷只要控制盐的浓度,就能够使DNM段或者散开,或者聚合在一起,因此,食盐能保持溶液中的浓度与细胞液相当。DNM溶于酒精,但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,就可以用酒精萃取DNADNM二苯胺作用生成蓝色沉淀,即可观察到。提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA勺粗提取而言,就是要利用DNA两RNA蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA去除其他成分。DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。此外,DNM溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理,可以将DNM蛋DNA对酶高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质,但是对DN应有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温,而DNM80oC以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DN应有影响。DNA的鉴定在沸水浴条件下,DNA遇二苯胺会被染成蓝色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂实验用具斗、烧杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、试管(20mL两支)、天平。95%酉精、蒸馄实验材料的选取凡是含有DNA勺生物材料都可以考虑,但是使用DNA^量相对较高的生物组织,成功原理①加入蒸馄水能使鸡血细胞破裂蒸馄水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀可能含有核蛋白、多糖和RNA?杂质。实验步骤1.可能含有核蛋白、多糖和RNA?杂质。实验步骤1.破碎细胞,获,或者相反,以达到分离目的。此外,DNM溶于酒精溶液,但是细被染成蓝色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂实验用具洋葱或进一步的分离。DNA对酶高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂出DNA②加入洗涤剂和食盐的作用洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于(细胞膜和核膜的破裂),从而释放DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA勺溶解。③研磨不充分,对实验结果产生的影响研磨不充分会使细胞核内的DNA#放不完全,提取的DNA1变少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。④此步骤获得的滤液中可能含有的细胞成分?可能含有核蛋白、多糖和RNA?杂质。实验步骤1.破碎细胞,获取含DNA勺滤液动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馄水,同时用玻提取洋方案一的原理是DN"不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA方案三的原理是蛋白质和DNA勺变性温度不同。注意事项①用高盐浓度的溶液溶解DNA能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNAtDNA容解度不同的多种杂质。②方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNM蛋白质分开;方案三利用的是DN倚口蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA>离。DNA的析出与鉴定l/L的NaCl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中,用玻质蛋白,从而使提取的DNM蛋白质分开;方案三利用的是DNl/L的NaCl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中,用玻质蛋白,从而使提取的DNM蛋白质分开;方案三利用的是DN倚口可能含有核蛋白、多糖和RNA?杂质。实验步骤1.破碎细胞,获A勺生物材料都可以考虑,但是使用DNA^量相对较高的生物组织中会出现白色丝状物,这就是粗提取的DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分。支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。
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