墨兰营剑白墨离体植株的诱导分化研究

墨兰营剑白墨离体植株的诱导分化研究

墨兰是中国著名的兰花植物。它通常在春节前后开花，所以也被称为报乡兰。墨兰通常通过分段法繁殖。然而，由于种子数（每年3.4芽）和发芽速度缓慢，墨兰的商业化生产和开发较少（墨兰和其他兰花植物），种子萌发缓慢，严重限制了墨兰的生产和开发。正如其他兰花科植物一样，种子和胚胎发育不完全，没有种子。在自然条件下，种子很难发芽。只有通过共生细菌才能发芽和形成幼苗。近年来，已经报告了墨兰种子、茎尖和幼花序的快速繁殖。然而，即使是优良的细菌发芽和茎尖诱导的后代也形成了难以分化成形的幼苗，诱导率低，这增加了墨兰组织培养的难度。还没有关于墨兰高速生产的报道。因此，我们研究了不同因素的转为抑郁症的影响，提高了墨兰的快速繁殖和发芽率，为墨兰的各种杂交和工具性育种提供了基础。1材料和方法1.1试验材料材料为企剑白墨种子诱导萌发的根状茎.1.2试验设计和试验设计以MS为基本培养基,在MS中添加香蕉50g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,pH5.4～5.6.试验设计采用正交试验(见表1,表2).1.3成苗率的测定将墨兰企白根状茎从原瓶中取出,用镊子及刀片刮净原培养基残渣,并进行分切,取大小长短相近的根状茎置于培养瓶中,每瓶5条,均匀放置;重复5次.将接种好的培养瓶置于培养室中,在室温条件下培养;定时观察记录统计成苗率及新根状茎数.成苗率Ⅰ=已出芽的根状茎数/接种根状茎数;成苗率Ⅱ=总出芽数/接种根状茎数.2结果与分析2.16不同浓度对墨兰组物的影响6-BA、NAA、GA3、AgNO3的L9正交试验结果见表3.由表3可知,在9种培养基中,P8和P9培养基的墨兰根状茎的成苗率较高,成苗率I均为0.36,成苗率II分别达0.68和0.60.在不添加上述4种成分的培养中中(P1),平均新增根状茎数最高,达3.48条.图1、图2表示6-BA、AgNO3、GA3、NAA、NH4NO3、KH2PO4不同浓度对墨兰根状茎成苗率的影响.由图1可知,随着6-BA浓度的不断增大(1mg/L→5mg/L→10mg/L),成苗率I、II均有所增加,而平均新增根状茎数显著降低.从图2也可得出相同的结论.这说明6-BA浓度的增加,有利于墨兰根状茎的分化成苗.随着AgNO3浓度的增加,成苗率I、II也有所增加,成苗率II增幅更明显.而平均新增根状茎数有所降低(图1)则说明AgNO3对墨兰根状茎的成苗具一定的促进作用.随着GA3浓度的逐步增加,成苗率I、II和平均新增根状茎数均逐渐下降.说明培养基中添加GA3不仅不利于墨兰根状茎分化成苗,也不利于根状茎的快速增殖.当培养基中NAA浓度在0～0.5mg/L时,企剑白墨的根状茎成苗率无明显的差异.但从图2可知,NAA浓度的进一步增加(0～1mg/L),成苗率I和II均有增加,因此说明较高浓度的NAA也可以促进企剑白墨的根状茎分化出苗.2.2nh4no3和kh2po4对墨兰根生长的影响表4为NH4NO3、KH2PO4、6-BA和NAA的L9正交试验结果.由表4可知,成苗率最高的培养基为C5,成苗率I、II分别达0.90、1.40.其次是C3,成苗率I、II分别为0.64和1.16.另外,从图2中可看出,NH4NO3浓度保持MS的正常水平(1650mg/L)比较有利于墨兰根状茎的成苗,其浓度的减半或加倍,均不利于根状茎成苗.但随着NH4NO3浓度的增加,根状茎的增殖率显著下降.这说明MS培养基中的NH4NO3浓度减半,有利于根状茎的增殖.将培养基中KH2PO4浓度提高,可以促进墨兰根状茎的出苗,其浓度以340mg/L为宜.KH2PO4对根状茎的增殖无显著影响.3墨兰扫生长nh4no3的浓度对墨兰组织化的影响中国兰组织培养中所用的培养基较多,常用的是MS、White、VW、KC和Hyponex等.最适的培养基则因品种而异.有研究表明,春兰要求无机盐含量较低的培养基,以1/2MS为宜,而墨兰、蕙兰则要求无机盐含量较高的培养基.NH4NO3是MS培养基中主要的无机成分,本试验对培养基中的NH4NO3进行了1/2、1倍和2倍MS含量试验,发现1倍MS含量的NH4NO3含量比较有利于墨兰根状茎分化出苗,1/2含量的NH4NO3则有利于根状茎的增殖.这说明墨兰根状茎分化培养中的确需要较高的无机盐浓度.朱根发等研究认为,培养基中KH2PO4浓度的提高,可促进白掌、绿帝王等花卉的快速繁殖.本试验也发现,将培养基中的KH2PO4浓度提高到340mg/L可促进墨兰根状茎的成苗.培养基中磷、钾含量增加,可能有利于促进根状茎萌芽的有关酶的表达,从而提高成苗率.用,而且生根数较少,培养18d后,出苗时根系较长,不利于移栽成活;0.1mg/L的NAA生根综合情况最好,根数量较多,而且基部膨大;NAA浓度为0时也有69%的生根率,但生根较慢,根数量最少.在常规的组培生根培养中,以MS+NAA0.5mg/L为培养基时,生根率可达83%,但根数较少,基部鳞茎基本无膨大现象的发生.无糖生根培养的种苗质量明显优于常规组培生根培养的种苗.3无糖培养的工程特点.用虎眼万年青新萌发的叶片切块作外植体在适宜的诱导培养基上培养,可以对其进行快速繁殖.叶片的取材和消毒都十分方便,而且在取材过程中不损耗母株,适于引进品种的规模化繁殖与快速生产.在虎眼万年青的继代增殖培养中,随着继代次数的增加,植株体内会有一定的激素累积,须根据再生芽的生长状况适时对培养基中激素浓度进行调整,逐步降低激素的用量,以保证种苗不发生变异,或仅仅发生很小的变异,不断获得健壮的继代苗.在无糖培养