临床微生物室SOP

./WORD文档可编辑临床微生物室标准操作程序SOP临床微生物室标准操作程序〔SOP目录检验科生物安全防范管理制度、紫外线消毒制度1微生物实验室安全工作制度、病原微生物保存制度2微生物实验室安全工作制度、病原微生物保存制度2微生物实验室消毒隔离措施制度、微生物实验室标本采集运输制度3微生物实验废弃物处理制度、尖锐器具安全使用制度3微生物实验室消毒隔离措施制度、微生物实验室标本采集运输制度3微生物实验废弃物处理制度、尖锐器具安全使用制度3工作人员保护制度、临床微生物实验室消毒防护制度4微生物实验室质量管理制度5微生物实验室质量管理制度6室间质量控制管理程序7室内质量控制管理程序8试剂制配质检操作程序11标本采集标准操作程序14血液及骨髓标本的采集标准操作程序18呼吸道标本留取标准操作程序19尿液标本留取标准操作程序20脓及创伤感染标本留取标准操作程序21生殖道分泌物标本采集标准操作程序22粪便标本采集标准操作程序23穿刺液标本留取标准操作程序24脑脊液、胆汁标本采集标准操作程序25组织标本的采集标准操作程序26静脉导管标本采集标准操作程序27眼耳及乳突分泌物标本采集标准操作程序28样本接收、核对、接种、培养标准操作程序29菌株的纯化、鉴定、药敏流程标准操作程序30苛养菌培养标准操作程序31常见标本培养结果解释标准操作程序32微生物鉴定及药物敏感试验分析系统操作规程34KB法药敏试验标准操作程序42ESBL检测标准操作程序43β-内酰胺酶检测标准操作程序44耐甲氧西林葡萄球菌纸片扩散法筛选试验标准操作规程45MRSA纸片扩散法筛选试验标准操作规程46革兰染色标准操作程序47抗酸染色标准操作程序48解脲/人型支原体培养标准操作程序49沙眼衣原体抗原检测标准操作程序50康泰真菌鉴定药敏标准操作程序51触酶试验标准操作程序52氧化酶试验标准操作程序53芽管试验标准操作程序54临床微生物实验室安全标准操作程序55微生物室试剂管理制度56微生物室试剂管理制度57分级报告程序57XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：检验科生物安全防范管理制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：检验科生物安全防范管理制度一、检验科在医院感染管理工作中应履行的职责：负责医院感染常规微生物监测。开展医院感染病原微生物的培养、分离鉴定、药敏试验及特殊病原体的耐药性监测,定期总结、分析,向有关部门反馈,并向全院公布。发生医院感染流行或爆发时,承担相关检测工作。负责集中所有检验后标本、培养出的菌株、一次性用品用后的消毒处理。做好检验科、输血科实验室台面、地面、空气消毒。防止病人在检验科交叉感染。二、检验科在生物安全防范管理工作中应达到以下要求：细菌室工作人员须穿工作服,戴工作帽,必要时穿隔离衣、戴口罩、手套。使用合格的一次性检验用品,用后进行无害化处理。格执行无菌技术操作规程,静脉采血须一人一针一垫一带；微量采血应做到一人一针一管一片；对病人操作前尽量保持手的清洁。无菌物品如棉签、棉球、纱布及其容器应在有效期内使用,开启后使用时间不得超过24小时。使用后的废弃物品,应及时进行无害化处理,不得随意丢弃。各种器具〔钳子、消毒罐应及时消毒、清洗；各种废弃标本应分类处理〔焚烧、入污水池、消毒或灭菌。消毒后发放。检验人员结束操作后应及时洗手,有必要时用消毒浸泡。保持室内清洁卫生。每天对空气、各种物体表面及地面进行常规消毒。在进行各种检验时,应避免污染,在进行特殊传染病检验后,应及时进行消毒,遇有场地、工作服或体表污染时,应立即处理,防止扩散,并视污染情况向上级报告。菌种、毒种按《病原微生物实验室安全管理条例》进行管理。10.在操作有气溶胶可能的标本应配置生物安全柜及其它防护设置,如紫外线XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：实验室安全管理制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：实验室安全管理制度[目的]保障个人安全,防止交叉感染。[适用范围]临床微生物实验室检验人员[该SOP变动程序]本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[主要内容]加强学习,严格执行安全制度,定期检查。进入实验室要穿工作服,工作服要放在指定的地点,并经常洗涤；生活用品不能带入实验室。实验室内不能高声谈笑,不准吸烟、饮食,不要用手指触摸头、面等部位以免造成污染。如传染物污染手部,要立即用1%〔g/dl84高效消毒剂〔或500mg/L含氯消毒剂溶液浸泡,再用肥皂水和流水冲洗干净。如传染物污染桌面或地面应立即用1%〔g/dl84高效消毒剂溶液〔或500mg/L含氯消毒剂溶液覆盖其上,经30分钟方可抹去,如工作服被病原微生物污染,应立即脱下,进行高压灭菌处理。实验室每天用紫外线进行消毒空气,作好记录,并定期检测；接种环〔针使用后应立即在火焰灯上烧灼灭菌；沾有活菌的玻片、试管等玻璃制品应立即放在钢精锅内统一高压灭菌；检测剩余的标本及接触过微生物的平板、鉴定板〔条等塑料制品均用黄色塑料袋装好,置黄色桶内,统一灭菌处理。各种电器设备,要有专人保管,并做好有关的记录；易燃物品乙醇应妥善保管,远离火源,若出现着火情况,应立即用湿布将其覆盖。易燃、易爆、剧毒化学物品要有专人保管,并有使用记录；分离出甲类或乙类传染病菌株,应及时上报院感科,未经上级同意不得带出实验室,并由专人处理。工作结束后,用500mg/L含氯消毒剂溶液消毒工作台面；工作人员双手应用肥皂、流水清洗三遍以上,关好窗户、检查好电源后,方可离开实验室。临床微生物实验室检验人员应定期健康体检及必要的预防接种,以增强自身抵抗力。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：微生物实验室试剂的管理制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：微生物实验室试剂管理制度1、目的规范微生物实验室试剂的管理程序,保证试验质量。2、适用范围微生物实验室的所有试剂。3、职责3.1检验科主任负责审批微生物实验室试剂的申请.3.2微生物实验室负责人负责对试剂评估、申购、验收等管理工作。3.3检测人员负责试剂试验相关SOP的编写。3.4检测人员负责试剂的使用、质量控制工作。4、程序4.1试剂4.1.1试剂的评估、申购、验收用于检测标本的试剂必须坚持高质量、高安全性的标准,由实验室负责人评估、订购。每批试剂到货后由实验室负责人或其指定人员验收。验收内容包括：试剂的数量、外观、有效期及运送条件。记录验收结果,并在试剂外包装上标明接收时间及接收人员签名,保存质量保证书。有损坏或降解的试剂应拒收。4.1.2试剂档案订购试剂应建立试剂档案,以监控试剂供应状况,保证实验顺利进行。试剂档案内容包括：试剂名称、批号、数量、生产商、接收日期、失效日期、储存条件、试剂说明书、相关质控文件及接收人员签字等。4.1.3试剂标识所有试剂须有标识,并张贴于试剂醒目处。标识内容包括：试剂名称、量、浓度、或滴度、储存条件、配制日期、失效日期〔如果开瓶改变试剂有效期,必须重新登记。4.1.4试剂储存所有试剂应按产商要求储存以防损坏、降解、污染。低温保存的试剂须放置于冰箱内。冰箱应每天记录温度以监控存放条件是否符合要求。注意安全存放,危害品应分开放置,并有明显标识。4.1.5试剂使用使用前,工作人员应确认：试剂处于有效期内、质控合格、标识明确、储存条件正确、存放合理。出现与上述情况不符时,应立即通知实验室负责人,并暂停使用。使用抗血清时应注意效价、透明度与色泽,如有浑浊或沉淀表示已污染,应立即停用。取用试剂应按有效期先后取用,标明开瓶日期、有效期、开瓶人签名。当试剂存放量接近警戒线时,应及时通知负责人订购下一批试剂。4.1.6试剂质量控制参见《室内质量控制管理程序》。4.2培养基4.2.1成品培养基4.2.1.1由实验室负责人负责评估、订购。4.2.1.2要求生产商提供培养基质控资料,包括培养基名称、成分、有效期、保存条件及无菌试验、生长试验、生化试验的合格证明等,质控材料至少保留2年。4.2.1.3验收时应注意培养基是否有标识<包括培养基名称、批号、生产日期、失效日期>,包装是否完整,培养基是否破损、污染,外观是否良好〔良好培养基应该是表面平滑,水分,颜色、厚度适宜,无污染等。不符合要求时应拒收。4.2.1.4验收后应记录培养基总数、批号、生产日期、失效日期及接收人员签名。4.2.2自制培养基4.2.2.1应严格遵守SOP配制,由勤杂人员高压灭菌。高压灭菌时须贴指示带监测灭菌效果。4.2.3培养基保存 4.2.3.1常规2-8℃保存4.2.3.2不常用的培养基应用塑料袋包好储存,避免脱水致某些指示剂或抑制剂浓度相对增加,而使病原菌不能生长或生长不良。4.2.4培养基质量控制参见《室内质量控制管理程序》。4.3试剂警戒线微生物实验室应设置试剂警戒线,以防出现试剂短缺而导致试验无法完成。4.3.1设置试剂警戒线应当考虑到：试剂供货周期的长短；试剂有效期长短；质控试验需要的时间〔要保证新进试剂一旦失控时,实验室仍有足够试剂保证试验的正常进行。4.3.2每月月底清点试剂,清除过期试剂,预购下月需要使用的试剂。药敏纸片：常见葡萄球菌药敏纸片定为剩×支纸片时预定下一批；常见肠杆菌科药敏纸片定剩×纸片时预定下一批。鉴定卡：GNI+：定为剩×盒时预定下一批；GPI：定为剩×盒时预定下一批；GNS：定为剩×盒时预定下一批；GPS：定为剩×盒时预定下一批……血培养瓶：定为剩×箱时预定下一批。培养基：每周准备好下一周培养基的用量,保证实验室正常进行。常规微量生化管：定为剩×盒时预定下一批。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：紫外线消毒制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：紫外线消毒制度微生物实验室每天工作结束后需对环境进进行紫外线消毒40分钟以上,并做好记录。紫外线灯管记录使用时间,使用超过1000小时以上更换紫外线灯管,并记录时间。紫外线灯管每月用无水酒精擦拭；每半年由院感科对紫外线灯管进行紫外线强度〔消毒效果测试,并标明测试。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：微生物实验室安全工作制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：微生物实验室安全工作制度1.每日工作前用紫外线照射实验室40分钟以上。

2.入室前应穿工作服,并做好实验前的各项准备工作。

3.实验室内应保持肃静,不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动,以免引起风动,无关人员禁入。

4.非必要物品禁止带入实验室,必要资料和书籍带入后,应远离操作台。

5.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前,请勿丢弃标本。

6.标本处理及各项试验应在操作间进行,接种环用完后应立即火焰灭菌,沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。

7.实验时手部污染,应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5-10分,再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内,应立即吐出,并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口,根据实际情况服用有关药物。

8.实验过程中,如污染了实验台或地面,应用3%来苏儿覆盖其上半小时,然后清洗；如污染工作服,应立即脱下,高压灭菌。

9.若出现着火情况,应沉着处理,切勿慌张,立即关闭电闸,积极灭火。易燃物品〔如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等必须远离火源,妥善保存。

10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭,观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况,用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净,并将试剂、用具等放回原处,清理台面,未污染的废弃物扔进污物桶,有菌废弃物应送高压灭菌后处理。

11.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒,并用肥皂和清水洗净。

12.爱护仪器设备,经常清洁,注意防尘和防潮。

XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：病原微生物保存制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：病原微生物保存制度据《病原微生物安全条例》要求实验室不能保存高致性病原微生物菌〔毒种。一般药敏实验用的标准菌ATCC25922、ATCC25923和ATCC27853,菌种保管应有专人负责,保存于冰箱中,确保菌种安全。保管人员变动时,必须严格交接手续。菌种应有严格的登记,包括形态,分离日期,鉴定日期,签发者,主要鉴定性能〔包括形态、染色、抗原结构、动物致病力等,并注明使用、转移、销毁情况及原因。各种菌种应按规定时间接种,一般在接种三次后作一次全面的鉴定,注意菌种有无污染及变异,如发现变异时,应及时更换。5.菌种保存范围及向外单位转移,应按国家卫生部规定执行。实验结束后的标本、菌株等感染物必须消毒灭菌处理。并做好记录。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：微生物实验室消毒隔离措施制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：微生物实验室消毒隔离措施制度1.每天工作前用消毒液消毒工作台,上班前、下班后开紫外灯〔40分钟进行空气消毒。

2.非必要品禁止带入实验室,必要资料和书籍带入后,应远离操作台。

3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用1000g/L含氯消毒剂浸泡消毒液浸泡,经煮沸后清洗或丢弃。

4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒,所有用于试验的反应板、吸头等用1000g/L含氯消毒剂浸泡消毒液浸泡〔至少24小时以上后清洗或丢弃。

5.所有微生物培养物〔细菌、支原体、真菌等培养物,不管标本阳性或阴性均用1000g/L含氯消毒剂浸泡消毒液浸泡后,经煮沸消毒,才能清洗或丢弃。

6.取材、最好采用一次性工具,不能采用一次性工具者,每次取材前均应彻底消毒。

7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。

8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台,不要立即用水冲洗,应先用纸巾、布等敷料加上消毒液500g/L含氯消毒剂浸泡消毒30分钟以上,然后再清洗。如污染工作服,应立即脱下,高压灭菌。

9.实验时手部污染,应立即用肥皂洗手并冲洗干净,再外用消毒药水,如误入口内,应立即吐出,并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口,必要时根据实际情况服用有关药物。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：微生物实验室标本采集运输制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：微生物实验室标本采集运输制度病原微生物的培养必须到微生物实验室领取无菌器皿、血培养增菌液瓶等留取标本。病原微生物的培养标本必须在2小时内由输送中心送检并立即按种。特殊标本〔如脑脊液、前列腺液、白带等应立即送检并接种。实验室标本姓名、编号或者标本采集不符合要求时要退回重留标本。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：微生物实验废弃物处理制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：微生物实验废弃物处理制度微生物实验室的标本、玻片等大多有病原微生物必须进行灭菌处理后丢弃。微生物实验室培养过的平板、菌株等必须灭毒〔高压后才可废弃。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：尖锐器具安全使用制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：尖锐器具安全使用制度除特殊情况下,禁止在实验室使用针、注射器及其它利器,尽可能使用塑料器材代替玻璃器材。尽可能应用一次性注射器,用过的针头,禁止折弯、剪断、重新盖帽、从注射器取下,禁止用手直接操作,用过的针头必须直接放入防穿透的容器盒中。非一次性的利器放入厚壁容器中并运送特定区域消毒,最好高压消毒。尽可能使用无针注射器和其它安全装置。禁止用手处理破损的玻璃器具,装有污染的针、利器及破损玻璃的容器在丢弃前必须灭菌。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：工作人员保护制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：工作人员保护制度工作人员须穿工作服,戴工作帽,必要时穿隔离衣、戴口罩、手套。工作人员在工作过程中发生皮肤破损、化学试剂烧伤皮肤、眼睛或者病原微生物的感染等必须有做相应的处理,上报医务科,并做记录。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：临床微生物实验室消毒防护制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：临床微生物实验室消毒防护制度加强学习,严格执行生物安全制度,定期检查。进入实验室要穿工作服,工作服要放在指定的地点,并经常洗涤；生活用品不能带入实验室。实验室内不能高声谈笑,不准吸烟、饮食,不要用手指触摸头、面等部位以免造成污染。如传染物污染手部,要立即用500g/L含氯消毒剂浸泡,再用肥皂水和流水冲洗干净。感染物污染桌面或地面应立即用500g/L含氯消毒剂消毒剂溶液覆盖其上,经30分钟方可抹去,如工作服被病原微生物污染,应立即脱下,进行高压灭菌处理。实验室每天用紫外线进行消毒空气,作好记录,并定期检测；接种环〔针使用后应立即在火焰灯上烧灼灭菌；沾有活菌的玻片、试管等玻璃制品应立即消毒灭菌；检测剩余的标本及接触过微生物的平板、鉴定板〔条等塑料制品均用塑料袋装好,置黄色桶内,统一灭菌处理。培养过的平板、菌株或有感染性标本必须灭毒〔高压后才可废弃。仪器、电器设备,要有专人保管,并做好有关的记录；易燃物品乙醇应妥善保管,远离火源,若出现着火情况,应立即用湿布将其覆盖。易燃、易爆、剧毒化学物品要有专人保管。分离出甲类或乙类传染病菌株,应及时上报院感科,未经上级同意不得带出实验室,并由专人处理。10.工作结束后,用500g/L含氯消毒剂溶液消毒工作台面；工作人员双手应用肥皂、流水清洗三遍以上,关好窗户、检查好电源后,方可离开实验室。11.临床微生物实验室检验人员应定期健康体检及必要的预防接种,以增强自身抵抗力。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：微生物实验室质量管理制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：微生物实验室质量管理制度目的规范质量管理程序,保证检验的质量。范围适用于微生物实验室的各个检验项目。职责3.1微生物实验室负责人负责制定微生物检验质量管理程序,并监督质量管理程序的实施。3.2检验人员执行质量管理程序。4、程序4.1质量管理内容包括人员、操作规程、申请单、报告和记录、标本、仪器、培养基、试剂、检验方法、质量控制等。4.2人员包括学历、职称等要求,员工的培训和工作能力评估。4.3操作规程4.3.1规定检验申请、标本采集开始到发出检测结果报告为止的全过程的操作规程和管理程序。4.3.2培训员工熟悉和掌握操作规程的管理程序。4.4申请单申请单应包含：病人信息、申请医生姓名或工号、申请科室、申请项目、标本种类、标本采集和接收时间,必要时应标明临床诊断、采样部位、抗菌药物的应用情况、预期微生物的种类等。参见《微生物检测项目申请程序》。4.5记录和报告4.5.1记录检验全过程必要的信息,如标本接收、细菌鉴定流程表、检验结果审核等。参见《记录管理程序》。4.5.2结果报告应包括检验结果、结果解释等。参见《结果报告程序》。4.6对标本质量进行评估。参见《标本接收、标识程序》、《样本拒收程序》。4.7仪器质量管理4.7.1仪器在安装时及常规使用中应满足检验所需的质量标准,并具有达标的证明文件。4.7.2每件仪器具有唯一性标识。4.7.3要求保留每件仪器影响检验性能的相关记录。4.7.4要求制定仪器的标准操作规程。经培训考核通过并经实验室授权的工作人员方可操作仪器。操作者应可以方便取阅仪器标准操作规程以及仪器维护信息。4.7.5按制造商的要求检测并记录仪器的运行情况,定期进行校准。4.7.6要求制定定期维护、保养的计划,维持仪器的安全工作状态。4.7.7一旦发现仪器故障,应停止使用,清楚标记后妥善存放至其被修复。在仪器投入使用、修理或退役之前对其去污染。4.7.8如果仪器脱离实验室未被直接控制,或已被修理、维护过,该仪器在实验室重新使用之前,应经校准、验证或检测表明其达到规定的可接受标准后方可再使用。详情参见《仪器管理程序》。4.8试剂的质量管理4.8.1严格监督自配培养基的质量并做好记录。4.8.2商品化培养基应严格验收,并保存质控合格证明文件。4.8.3所有试剂〔包括染液和抗血清应有标签,用阴、阳对照质控,合理保存,在有效期内使用并做好记录。参见《试剂管理程序》。4.9样本的质量控制,参见《样本采集、运送程序》。4.10检验过程的质量控制4.10.1细菌分离和鉴定根据检验目的选择培养基,选择病原菌进行鉴定。4.10.2药物敏感试验根据分离菌种的生物学特性和感染部位,选择恰当的药物进行药物敏感性试验〔参见《室内质量控制管理程序》。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：室间质量控制管理程序文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：室间质量控制管理程序1.目的 规范室间质量控制管理程序,确保检验质量。2.适用范围省临床检验中心组织的微生物室间质控。职责微生物检验人员均须熟知并遵守本程序。4．程序4.1微生物室所开设的检测项目应参加实验室间比对计划。实验室间比对计划的项目,应至少每6个月进行一次性能评估,方法包括：与参考实验室或其他实验室分割标本检测；与本实验室建立的方法分割标本检测；分析纯物质、地方数据库或临床证实资料；其他适宜的和规定的方法。4.2质控标本的接收和验收收到质控物后由相关人员登记、签字,根据质控标本的有关说明对质控物的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求保存。4.3室间质控样本必须按实验室常规工作进行,由进行常规工作的检验人员测试,必须使用实验室的常规检测方法和试剂,不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。4.4室间质控的检测结果和反馈结果均记录于室间质控记录表,根据反馈结果分析室间质控的状态,如有不合格结果应先向负责人和主任报告,然后查找原因,撰写错误评估报告,制定纠正措施并培训员工,避免常规工作和质控再次发生同样错误。4.5结果上报截止日期之前严禁与其他实验室交流室间质控的检测结果。4.6结果上报截止日期之前严禁将质控标本送至其他单位代做。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：室内质量控制管理程序文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：室内质量控制管理程序目的规范微生物实验室管理程序,确保临床报告的质量。适用范围微生物实验室的所有检验项目。职责实验室检验人员均须熟知并遵守本程序。程序4.1分析前质量管理4.1.1检验申请单临床医生应按照〈〈微生物检测项目申请程序〉〉申请临床微生物检测。口头申请追加样本检验项目,必须在样本有效期内申请,并补正式的检验申请单。4.1.2生成微生物检验标本标签护士应在核对医嘱、病人信息和检验申请信息后,按照〈〈微生物标本检验标签程序〉〉生成申请单和微生物检验项目标签,并将微生物检验项目标签正确张贴于标本容器上。4.1.3样本的采集手册实验室应制定样本采集手册,指导正确采集和处理样本。4.1.4样本采集和运输样本采集人员应按照〈〈采集前病人识别程序〉〉确认病人,按照〈〈标本采集、运送程序〉〉采集样本,并在规定的时间和温度范围内,使用指定的运输培养基,安全运送到微生物室。4.1.5样本的接收样本接收人员应严格按照〈〈标本接收、标识程序〉〉、〈〈标本拒收程序〉〉对样本接收或拒收,并记录。4.1.6微生物检验标本信息输入微生物实验室接种岗位检验人员严格按照〈〈微生物标本检验信息输入程序〉〉录入、核对病人信息和标本信息等资料。4.1.7样本储存微生物实验室接种岗位检验人员按照〈〈微生物标本检验前储存程序〉〉正确储存未能及时处理的标本。已经检验的样本应在保证其性能稳定的条件下,将样本以适当的方式保留到规定时间内,以便能在出具结果报告后可以复查,或做补充检验。4.2分析中质量管理4.2.1试剂的质量控制4.2.1.1所有试剂用于检测标本前,必须做质控以评估质量并记录质控结果,只有质控合格才可使用。下列试剂每进一批新批号或货号要求用阴性、阳性标准菌株评估其质量〔表2-1。触酶、氧化酶、凝固酶、β-内酰胺酶、Optochin；VITEK-32细菌鉴定系统使用的每一种鉴定卡及相关试剂；表2-1常用试验试剂质量控制试剂阳性对照阴性对照监测频率氧化酶铜绿假单胞菌ATCC27853大肠埃希菌ATCC25922每次新配制时及使用中每个工作日触酶金黄色葡萄球菌ATCC25923A群链球菌ATCC19615每次新配制时及使用中每个工作日靛基质大肠埃希菌ATCC25922肺炎克雷伯菌ATCC138831%蛋白胨水及靛基质试剂：每次新配制时及使用中每个工作日直接用于检测病人标本有内标准的抗原试验如：金黄色葡萄球菌乳胶凝集试剂〔每天或每次做质控；抗血清〔至少每半年用阴、阳性质控菌株做质控；革兰染液〔每周一次用阴、阳性质控片做质控；抗酸染液〔每次使用要求用阴、阳性质控片做质控；自制试剂〔每配制一批新试剂做质控；4.2.1.2平行试验新批号试剂使用前须用老试剂或参考材料平行试验。4.2.1.3无厂商特别说明时,不同批号的试剂不可混用。4.2.1.4缺陷或失效试剂只能用于培训员工业务能力,否则报废处理。培训试剂应明显标记"仅供培训使用",并与检验试剂分开放置。4.2.2培养基的质量控制4.2.2.1购买的有质量保证标准的培养基实验室应保存制造商所遵循的质量保证标准,以及每批号产品完成无菌试验、生长试验、生化试验及质量控制性能的合格证明等文件；无质量保证标准的培养基,每批号和〔或每次购买的产品应检测相应的性能,包括生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验〔适用时、生化试验〔适用时等。每个批号和〔或每次购买时,应进行外观检查并记录。4.2.2.2自制培养基每批号产品应检测相应的性能,包括无菌试验、生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验〔适用时、生化试验〔适用时等。4.2.2.3外观检查合格培养基的标准：完整、琼脂附于平板底部,血平板应不透明、没有溶血情况,平板颜色好、湿润,无干裂、无污染、无浑浊或沉淀、无冻伤、无过热现象,琼脂厚度至少3mm。如发现与上述情况不符的培养基,应不予使用。4.2.2.4无菌试验抽检培养基数量：100块以内,随机抽检5%；100块以上可随机取10块平皿或10支试管培养基进行无菌试验。35`C培养24小时后观察是否有细菌生长,无细菌生长为合格。4.2.2.5生长试验及生化反应试验质控菌株〔表2-2,2-335`C培养24小时,用无菌生理盐水配置0.5麦氏单位的细菌悬液。无菌生理盐水1：100稀释,每块平板接种10ul〔浓度相当于10~3-10~4CFU/平板。培养24-48小时。符合生长、生化试验质控标准者方可使用。失控者必须记录失控情况并有相应的纠正措施。表2-2生化试验用培养基的质控培养基质控菌株鉴定标准克氏双糖铁培养基大肠埃希菌ATCC49247+/+奇异变形杆菌ATCC49005-/+,H2S+福氏志贺菌质控菌株-/+铜绿假单胞菌ATCC27853-/-1%蛋白胨水〔靛基质用大肠埃希菌ATCC25922+肺炎克雷伯菌ATCC13883-科玛嘉念珠菌显色平板光滑念珠菌ATCC90030紫色、光滑白念珠菌ATCC90028绿色热带念珠菌ATCC981083蓝灰色克柔念珠菌质控菌株粉红色、表面毛糙…….表2-3培养基的生长试验质控培养基质控菌株鉴定标准巧克力平板流感嗜血杆菌ATCC49247生长情况好血平板金黄色葡萄球菌ATCC25923中度到大量生长A群链球菌ATCC19615生长,β溶血肺炎链球菌ATCC49619生长,α溶血大肠埃希菌ATCC25922生长中国蓝培养基大肠埃希菌ATCC25922生长,蓝色菌落奇异变形杆菌ATCC49005部分抑制鼠伤寒沙门菌ATCC14028无色菌落粪肠球菌ATCC29212不生长SS培养基大肠埃希菌ATCC25922部分或全部抑制福氏志贺菌质控菌株生长,无色菌落鼠伤寒沙门菌ATCC14028生长,有黑色中心……XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：血培养分级报告制度文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：血培养分级报告制度1.目的规范分级报告程序,及时、分级地向临床报告结果。2.范围血液、骨髓标本。3.职责由微生物实验室检验人员进行分级报告。4.程序4.1一级报告阳性报警血培养瓶应进行涂片革兰染色,将涂片结果电话〔或其他方式通知临床。4.2二级报告报告直接药敏试验结果。4.3三级报告报告细菌种属、药敏实验、结果评价和建议。XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：标本处理标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：标本处理标准操作规程目的规范标本处理标准操作规程,范围临床微生物标本职责微生物检验人员严格执行本程序程序4.1血液标本接收标本后,立即对标本进行编号、登记。门诊病人要同时登记住址、联系电话等信息。将血培养瓶置于全自动血培养仪中培养。4.2痰标本4.2.1接收编号、登记后的痰标本,加入痰消化剂或无菌生理盐水处理。4.2.2用无菌棉签挑取标本分别涂布于血琼脂平板、巧克力琼脂平板、中国蓝平板的第一区,然后用接种环划第二、第三区...。4.23同时做痰涂片镜检4.3咽拭子标本涂布于血琼脂平板、巧克力琼脂平板、麦康凯平板的第一区,然后用接种环划第二、第三区...。4.4脑脊液、胸腹水等穿刺液床边抽取体液标本1～2ml注入多功能体液培养瓶或需氧血培养瓶,即送实验室。接收标本后,立即对标本进行编号、登记,置孵育箱培养。脑脊液标本需涂片检查。4.5粪便或肛拭标本接收标本后,立即对标本进行编号、登记,取粪便脓血部位标本根据检验申请单要求选择平板,立即接种。4.6尿标本接收标本后,立即对标本进行编号、登记,将尿标本混匀,用10μl定量接种环立即接种血琼脂平板、中国蓝平板,分离细菌和菌落计数。参考文献1周庭银编著,临床微生物学诊断与图解〔第二版.上海科学技术出版社,20072叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.XX：东南大学出版社,2006XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：标本接种标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：标本接种标准操作规程目的规范标本接种标准操作规程,确保检验结果准确可靠。范围微生物室所有标本的接种。职责微生物检验人员严格执行本程序。程序4.1分区划线法此法多用于粪便等含菌量较多的标本。用接种环先将标本涂布在平板第一区并作数次划线,再在二、三……区依次用接种环划线。每划一个区域,应将接种环烧灼一次,待冷却后再划下一区域。每一区域的划线应接触上一区域的接种线2～3次,使菌量逐渐减少,以形成单个菌落。4.2倾注平板法本法用于尿液等标本的细菌计数。将灭菌生理盐水适量稀释〔通常作10－1～10－5稀释的标本1ml,置于灭菌平皿内,注入已熔化并冷却至50℃左右的培养基15ml,混匀,待冷却后,倒置。4.3斜面接种法此法主要用于鉴定或保存菌种,或观察细菌的某些生化特性和动力。用左手握住菌种管和斜面培养管底部,右手持接种针〔环。用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌。用接种针〔环伸入菌种管内挑取移种之菌落。伸入斜面培养管内,先从斜面底部到顶端拖一条接种线,再自下而上地蜿蜒划线,或直接自下而上地蜿蜒划线。将接种针垂直插入半固体培养基的中央,穿刺至培养基底部,然后沿原穿刺线退出接种针。4.4穿刺培养法此法用于保存菌种,观察动力及某些生化反应。以接种针挑取细菌培养物,插入半固体培养基的中央,穿刺至培养基底部,然后沿原穿刺线退出接种针。4.5液体培养基接种法用灭菌接种环挑取菌落或标本。在试管内壁与液面交界处轻轻研磨,使细菌混匀在液体培养基中参考文献1周庭银编著,临床微生物学诊断与图解〔第二版.上海科学技术出版社,20072叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.XX：东南大学出版社,2006XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：穿刺液标本细菌学检验标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：穿刺液标本细菌学检验标准操作规程目的规范穿刺液标本细菌学标准操作规程,确保检验结果准确可靠。适用范围穿刺液标本培养。标本3.1标本类型胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。3.2标本采集采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约2ml,注入无菌试管,或抽取穿刺液1～2ml注入多功能体液培养瓶,或抽取穿刺液2～5ml注入血培养瓶,混匀,立即送检。如怀疑厌氧菌感染,应做床边接种或接种运送培养基。3.3标本拒收标准3.3.1标本标识与化验申请单不符。3.3.2标本不是无菌留取,容器不符合要求。3.4标本保存采集标本后立即送到实验室,不能及时送检可置室温,放置时间不应超过2h。试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。4.2全自动血培养系统、多功能体液培养瓶、VITEK鉴定系统。革兰阴性菌鉴定卡<GNI+>、革兰阴性细菌药敏卡<GNS>、革兰阳性菌鉴定卡<GPI>、革兰阳性细菌药敏卡<GPS>、真菌鉴定卡<YBC>、药敏纸片、ATB板条等,有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。细菌鉴定和药敏质控参见质量管理。检验步骤接收标本后,立即对标本进行编号、登记。6.1涂片检查脓性标本直接涂片。浆液性标本先离心〔3000r／min,15min,取沉淀物涂片作革兰染色,观察有无细菌,以及细菌的形态。6.2分离培养

6.2.1一般细菌培养接种血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯琼脂平板〔或EMB及中国蓝琼脂平板,5％～10％CO2条件下,35℃培养18～24h,根据菌落及染色形态特点,作出初步判断。6.2.2增菌-分离培养法将多功能体液培养瓶颠倒混匀使液体覆盖整个固体面,然后置35℃孵育箱培养〔固体面在上,液体在下。次日观察固体表面菌苔生长及瓶中液体是否混浊。如发现有菌生长,立即涂片镜检、生化鉴定和药敏试验。此法可提高阳性检出率。

6.2.3厌氧菌培养床边接种或从厌氧运送培养基转种后,立即置厌氧环境中,35℃培养24～48h；挑取可疑菌落作耐氧试验,确定为厌氧菌。

6.2.4结核分枝杆菌培养：参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。操作流程穿刺液〔胸水、腹水、心包液、关节液等穿刺液〔胸水、腹水、心包液、关节液等厌氧培养多功能体液培养瓶厌氧培养多功能体液培养瓶或血培养瓶离心离心厌氧血琼脂平板35℃厌氧环境培养24～48h厌氧血琼脂平板35℃厌氧环境培养24～48h有菌生长沉淀物涂片、染色培养2日或5日无细菌生长可发出报告有菌生长沉淀物涂片、染色培养2日或5日无细菌生长可发出报告涂片、染色涂片、染色耐氧试验耐氧试验仪器或手工细菌仪器或手工细菌鉴定及药敏试验厌氧血平板生长厌氧血平板生长发出报告发出报告结果报告培养48h无细菌生长,报告"培养2日无细菌生长"。查见细菌,报告菌名和药敏结果。注意事项9.1标本的采集一定要严格履行无菌操作技术,避免污染。9.2加入抗凝剂的标本〔如胸腹水采集后要与抗凝剂充分混匀并及时送检。9.3体液均需做厌氧培养,故输送过程严格厌氧环境。临床意义各个部位穿刺液〔胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等的细菌学检查对于确定该部位是否有细菌感染具有重要的诊断价值。正常穿刺液是无菌的,若从患者穿刺液中查见致病菌或条件致病菌则提示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见,其次是金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等；腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠埃希菌、粪肠球菌,以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等多见。危急值报告涂片发现细菌或培养阳性均需要及时向临床报告结果。参考文献1CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》,20082周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海:上海科学技术出版社,20073叶应妩,王毓三,申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.XX:东南大学出版社,20064MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,20075ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》,2007XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：粪便标本细菌学检验标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：粪便标本细菌学检验标准操作规程目的规范粪便标本细菌学标准操作规程,确保检验结果准确可靠。适用范围粪便培养。标本3.1标本类型粪便,直肠拭子。3.2标本采集3.2.1自然排便采集自然排便后,挑取其脓血、黏液部分2～3g,液体粪便取絮状物2～3ml,盛于灭菌容器内,或置于保存液〔运送培养基、增菌培养基中送检。

3.2.2直肠拭子如不易获得粪便时,或排便困难患者及婴儿,可用直肠拭子采取,即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后,插入肛门内4～5cm<幼儿2～3cm>轻轻转动取出,插入卡-布〔Cary-Blair运送培养基内或无菌容器内送检。3.2.3粪便标本应该立即送检,室温保存不能超过2h,如不能及时送检可以放入磷酸盐甘油〔PH7.0或转运培养基,但不能超过24h。培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本,需加CaCl2<100mg/L>试剂。3.3标本拒收标准3.3.1粪便标本放置时间超过2h。3.3.2送检的粪便标本混有尿液。3.3.3直肠拭子未置于运送培养基中。试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板、SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。4.2VITEK鉴定系统、革兰阴性菌鉴定卡<GNI+>、革兰阴性细菌药敏卡<GNS>、革兰阳性菌鉴定卡<GPI>、革兰阳性细菌药敏卡<GPS>、真菌鉴定卡<YBC>、药敏纸片、ATB板条等,有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。4.4诊断血清。细菌鉴定和药敏质控参见质量管理。检验步骤接收标本后,立即对标本进行编号、登记。6.1涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多,仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。因此,粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时,才作直接涂片检查〔观察动力和菌群比例。6.2培养

6.2.1沙门-志贺菌培养参见《沙门菌属检验操作规程》、《志贺菌属检验操作规程》。6.2.2致病性大肠埃希菌培养参见《致病性大肠埃希菌检验操作规程》。霍乱弧菌培养参见《霍乱弧菌检验操作规程》。6.2.4副溶血弧菌培养参见《副溶血弧菌检验操作规程》。6.2.5小肠结肠炎耶尔森菌培养参见《耶尔森菌属检验操作规程》。6.2.6空肠弯曲菌培养参见《弯曲菌属检验操作规程》。6.2.7金黄色葡萄球菌培养参见《葡萄球菌属检验操作规程》。6.2.8艰难梭菌培养取液状粪便立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂〔简称CCFA平板上,并将粪便作102～106稀释后定量接种。35℃厌氧环境下培养48h后,选择粗糙型黄色菌落,移种于葡萄糖庖肉培养基作毒素测定；同时制涂片,悬滴检查动力、革兰染色及生化鉴定。

6.2.9真菌培养参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。6.2.10气单胞菌和邻单胞菌的培养参见《气单胞菌属检验操作规程》和《邻单胞菌属检验操作规程》。6.2.11结核分枝杆菌培养：参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。操作流程粪粪便或肛拭需氧培养根据临床要求需氧培养根据临床要求分离致病性大肠埃希菌O157SS、XLD或HE平板分离致病性大肠埃希菌O157SS、XLD或HE平板35℃培养18～24h麦康凯平板分离弯曲菌分离弧菌TCBS平板TCBS平板Campy-BA平板35℃Campy-BA平板35℃微需氧培养48h山梨醇麦康凯平板观察菌落特征及涂片、染色观察菌落特征及涂片、染色血清学鉴定仪器或手工细菌鉴定及药敏试验发出报告双糖铁或三糖铁试验观察菌落特征及涂片、染色血清学鉴定仪器或手工细菌鉴定及药敏试验发出报告双糖铁或三糖铁试验观察菌落特征观察菌落特征及涂片、染色血清学鉴定发出报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验发出报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验血清学鉴定发出报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验发出报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验结果报告查出肠道致病菌,报告其菌名和药敏结果。

注意事项9.1空肠弯曲菌是微需氧菌,初次分离时需5%～10%CO2和85%氮。9.2痢疾患者要采集大量脓血标本另行培养。9.3粪便标本有很多杂菌,但不能由此认为粪便标本的采集就无需注意杂菌污染,为防止污染必须注意标本的采集方法。临床意义正常情况下肠道中有多种细菌寄生,包括大量的厌氧菌、肠球菌、大肠埃希菌、肠杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌等。引起感染性腹泻的病原微生物有：①细菌性：产毒素型腹泻,包括霍乱弧菌、肠毒素型大肠埃希菌等；侵袭型腹泻,包括志贺菌、肠致病型大肠埃希菌和肠侵袭型大肠埃希菌等；食物中毒,包括沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌和肉毒梭菌等；伪膜性肠炎,包括艰难梭菌或金黄色葡萄球菌；慢性腹泻,可能由结核杆菌引起。②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。③病毒性：轮状病毒等。危急值报告培养出霍乱弧菌、伤寒沙门菌、O157等及时按传染病报告,同时送CDC复核。参考文献1CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》,20082周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海:上海科学技术出版社,20073叶应妩,王毓三,申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.XX:东南大学出版社,20064MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,20075ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》,2007XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程目的规范呼吸道标本细菌学标准操作规程,确保检验结果准确可靠。适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。标本3.1标本类型痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。3.2标本采集3.2.1采集时间以晨痰为好；支气管扩张症患者,清晨起床后进行体位引流,可采集大量痰标本。

自然咳痰法在留取痰之前,用清水反复漱口,应从气管深部咳出痰,吐入无菌容器内。

3.2.3气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。

3.2.4气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液,收集标本,适用于厌氧菌培养。3.2.5棉拭采集法用无菌棉拭子轻轻擦拭患者鼻咽部黏膜,留取标本,置无菌试管内送检。3.3标本拒收标准3.3.1申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。3.3.2痰标本呈水样或唾液样。3.3.2痰涂片白细胞<10／低倍视野,上皮细胞>25／低倍视野。3.3.4标本容器溢漏,无瓶盖。3.3.5痰标本留取放置时间太长,超过2h。3.3.6未用指定的无菌容器留痰作细菌培养。3.4标本保存采集标本后立即送到实验室,放置时间不应超过2h。试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。4.2VITEK鉴定系统。革兰阴性菌鉴定卡<GNI+>、革兰阴性细菌药敏卡<GNS>、革兰阳性菌鉴定卡<GPI>、革兰阳性细菌药敏卡<GPS>、真菌鉴定卡<YBC>、药敏纸片、ATB板条等,有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。细菌鉴定和药敏质控参见质量管理。检验步骤接收标本后,立即对标本进行编号、登记。6.1肉眼观察包括颜色、黏度、有无血丝或脓。6.2涂片检查可以确定标本是否适合做细菌培养,直接涂片镜检,依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定,见下表5-30。并可初步判定是否有病原菌存在。表5-30痰标本镜下分类分级白细胞〔个上皮细胞〔个A>25<10B>25<25C<10>25注：A、B两种情况的痰标本适合做培养,C不合格,应重新留标本。

6.2.1一般细菌涂片挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片,革兰染色后镜检。6.2.2结核分枝杆菌涂片参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。6.2.3放线菌及诺卡菌涂片将痰液用生理盐水洗涤数次,如含血液,则加水溶解红细胞,然后挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点,置载玻片上,覆以盖玻片,轻轻挤压,置高倍镜下观察其结构,如见中央为交织的菌丝,末端呈放线状排列,则揭去盖玻片,干燥后作革兰及萋-尼染色镜检。如查见中间部分的菌丝为革兰阳性,而四周放射的末端为革兰阴性,萋-尼染色为非抗酸性者,可报告为"找到革兰阳性杆菌疑似放线菌"。萋-尼染色弱阳性则报告革兰阳性杆菌疑似诺卡菌。

6.3分离培养6.3.1培养标本的选择应选择黏液脓痰作涂片,排除不合格标本。6.3.2痰标本培养前处理用无菌盐水将痰洗涤或加入等量的1%胰酶溶液,使痰液均质化后备用。6.3.3接种处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯〔或EMB、中国蓝琼脂平板,置5％～10％CO2环境中,35℃培养18～24h。根据菌落及形态特点,作出初步判断,然后按各类细菌特征进行生化鉴定,并同时作药物敏感试验。6.3.5结核分枝杆菌培养：参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。操作流程发出报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验观察菌落特征及涂片、染色消化液或生理盐水处理痰或咽拭发出报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验观察菌落特征及涂片、染色消化液或生理盐水处理痰或咽拭肉眼观察涂片染色肉眼观察涂片染色血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板5%~10%CO235℃培养18～24h结果报告8.1报告的各细菌种可注明各自所占比例情况,可分为纯培养,大量,中等量,少量。8.2未检出致病菌时应报告"正常菌群"。注意事项9.1痰标本一般不可采用肉汤或高选择性培养基进行增菌培养。9.2草绿色链球菌为口腔和鼻咽部的正常菌群,其毒力很低,但由拔牙等原因造成的局部损伤中侵入血流,可引起亚急性细菌性心内膜炎等感染,故从血液中分离出草绿色链球菌有临床意义。9.3咳痰标本不做厌氧菌培养。临床意义上呼吸道标本培养生长的细菌是否与疾病有关,需各方面综合分析,排除常居菌后,才可作出正确的判断。下呼吸道的痰液应是无细菌的,而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌〔如草绿色链球菌。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌,提示可能有呼吸道细菌感染。肺炎链球菌是肺炎最常见的致病菌。儿童细菌性肺炎多为流感嗜血杆菌所致。医院获得性肺炎的常见病原菌是革兰阴性杆菌,主要有肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙雷菌属和肠杆菌属细菌等。肺结核由结核分枝杆菌引起的。嗜肺军团菌引起军团菌病,肺部厌氧感染大多是脆弱类杆菌及梭杆菌属的细菌等。疑典型形态细菌所致肺部感染时,常先做痰液和支气管分泌物涂片、染色镜检〔如肺部结核痰液涂片、抗酸染色,镜检找抗酸染色阳性结核分枝杆菌,有助于细菌培养检查。危急值报告如查出抗酸杆菌阳性,则应及时向临床报告并作报传染病报告。参考文献1CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》,20082周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海:上海科学技术出版社,20073叶应妩,王毓三,申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.XX:东南大学出版社,20064MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,20075ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》,2007XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：脑脊液标本细菌学标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：脑脊液标本细菌学检验标准操作规程目的规范脑脊液标本细菌学标准操作规程,确保检验结果准确可靠。适用范围脑脊液培养。标本3.1标本类型脑脊液。3.2标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺,抽取脑脊液2～3ml,盛于无菌容器中送检。脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶,迅速自溶,肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。因此,脑脊液无论涂片或培养,必须于采集后立即送检。3.3标本拒收标准3.3.1标本标识与化验申请单不符。3.3.2标本未用无菌试管留取。3.4标本保存采集标本后立即送到实验室,不能及时送检可置室温,放置时间不应超过2h,切勿放冰箱,否则影响检出率。试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。4.2VITEK鉴定系统。革兰阴性菌鉴定卡<GNI+>、革兰阴性细菌药敏卡<GNS>、革兰阳性菌鉴定卡<GPI>、革兰阳性细菌药敏卡<GPS>、药敏纸片、ATB板条等,有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。细菌鉴定和药敏质控参见质量管理。检验步骤接收标本后,立即对标本进行编号、登记。6.1涂片检查

6.1.1一般细菌涂片检查外观混浊或脓样脑脊液可直接涂片,无色、透明的脑脊液,应3000r／minl10～15min离心后取沉淀物涂片、革兰染色、镜检。根据染色及形态特征,常可初步提示细菌的种类。。6.1.2结核分枝杆菌涂片检查参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。6.1.3新生隐球菌涂片检查取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色,或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基上,置于35℃培养2～5日,根据菌落特性,涂片染色镜检作出报告。必要时可作生化反应进一步鉴定。

6.2分离培养6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物,分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板,置于5%~10%CO2环境中35℃培养18～24h,观察细菌生长情况,根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌,并作药敏试验。6.2.2结核分枝杆菌培养：参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。操作流程脑脊液脑脊液离心观察菌落特征及涂片、染色血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板5%CO235℃离心观察菌落特征及涂片、染色血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板5%CO235℃培养18-24h发出报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验沉淀物涂片、染色沉淀物涂片、染色结果报告无论是涂片还是培养,一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通知临床医师。查见细菌,报告菌名和药敏结果。经培养48h,仍无细菌生长者,报告"培养2日无细菌生长"。注意事项9.1抽取的脑脊液分置于无菌试管中,迅速送至实验室,病毒、霉菌、分支杆菌培养样本置4℃保存待送。9.2流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡,脑膜炎奈瑟菌对寒冷和干燥均很敏感,在体外容易自溶,故不论是涂片镜检还是进行培养均应及时送检。临床意义正常人的脑脊液是无菌的,检出细菌提示细菌性〔急性化脓性或结核性等脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌,肺炎链球菌居第二位。3个月至5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血杆菌,新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的,特别是早产婴儿。结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。85%脑脓肿患者脑脊液培养可检出厌氧菌,有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。危急值报告直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。参考文献1CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》,20082周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海:上海科学技术出版社,20073叶应妩,王毓三,申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.XX:东南大学出版社,20064MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,20075ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》,2007XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：尿液标本细菌学检验标准操作规程目的规范尿液标本细菌学标准操作规程,确保检验结果准确可靠。适用范围尿液。标本3.1标本类型尿液。3.2标本采集3.2.1中段尿标本采集法

3.2.1.1女性先以肥皂水清洗外阴部,再以无菌水冲洗,用无菌纱布擦拭,以手指将阴唇分开排尿,弃去前段尿,留取中段尿5～7ml于无菌试管内。3.2.1.2男性翻转包皮,用肥皂水清洗尿道口,用清水冲洗,留取中段尿。3.2.1.3儿童、婴儿先以无菌生理盐水棉球洗净其外阴部或外生殖器,将无菌试管或瓶口对准尿道口,以胶布固定于皮肤上,待尿排出后送检。3.2.2两侧肾盂尿由专科医生采集,左右侧标本必须标明,避免混淆而误诊。3.2.3膀胱穿刺此法用于厌氧菌培养。耻骨上皮肤经碘酒消毒后,再以75％乙醇擦拭,用无菌注射器作膀胱穿刺,吸取尿液后排去注射器内的空气,针头插于无菌橡皮塞上送检。3.2.4尿标本采集应及时送检,2h内进行接种。3.3标本拒收标准3.3.1申请单项目与标本不符。3.3.2尿标本不是用无菌容器留取。3.3.3送标本的时间在采集标本后超过2h。3.4标本保存采集标本后立即送到实验室,不能及时送检可置冰箱。试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。4.2VITEK鉴定系统。革兰阴性菌鉴定卡<GNI+>、革兰阴性细菌药敏卡<GNS>、革兰阳性菌鉴定卡<GPI>、革兰阳性细菌药敏卡<GPS>、真菌鉴定卡<YBC>、药敏纸片、ATB板条等,有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。细菌鉴定和药敏质控参见质量管理。检验步骤接收标本后,立即对标本进行编号、登记。6.1涂片检查6.1.1一般细菌涂片以无菌操作吸取尿液5～10ml,3000r／min离心沉淀15min,取沉淀物作涂片及革兰染色,镜检,可提示有无细菌及细菌种类。6.1.2真菌涂片取尿液沉淀物放于清洁玻片上,覆以盖玻片,略加压力,制成涂片,用高倍镜检查。如发现发亮的芽生孢子和假菌丝,就可报告"找到酵母样细胞,形似念珠菌"。

6.1.3结核分枝杆菌参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。6.2一般细菌培养取中段尿,用定量接种环取尿液10ul接种于血琼脂平板和麦康凯〔或EMB营养琼脂平板上,5%~10%CO2,35℃培养18～24h,观察有无菌落生长,并进行菌落计数。平板生长菌落数乘以100即每毫升尿液的菌落数。根据菌落特征和涂片、染色结果,选择相应的方法作进一步鉴定。6.3特殊菌培养

6.3.1淋病奈瑟菌培养选用淋球菌琼脂平板等,放入5%~10%CO2环境中培养。

6.3.2厌氧菌培养必须用膀胱穿刺尿进行培养,接种厌氧琼脂平板,并在厌氧环境培养。6.3.3结核分枝杆菌培养参见《结核分枝杆菌检验操作规程》。操作流程尿液尿液结核杆菌培养定量培养一般细菌涂片、染色、镜检淋球菌培养结核杆菌培养定量培养一般细菌涂片、染色、镜检淋球菌培养菌落计数罗氏培养基35℃培养4～8周GC琼脂平板5%~10%罗氏培养基35℃培养4～8周GC琼脂平板5%~10%CO235℃培养18-24h血琼脂和麦康凯平板35℃培养18-24h观察有无可疑菌落生长观察有无可疑菌落生长观察菌落特征及涂片、染色观察菌落特征及涂片、染色发出报告手工或仪器细菌鉴定及药敏发出报告手工或仪器细菌鉴定及药敏发出报告发出报告结果报告8.1尿液细菌培养检查必须报告细菌的种属、菌落计数及药敏结果。8.2阳性结果报告8.2.1无明确意义的阳性结果报告——纯培养：革兰X性X菌生长,菌落数XXCFU/ml；混合菌生长：革兰X性X菌生长,菌落数XXCFU/ml,注明是混合菌。8.2.2有意义的阳性结果报告：报告细菌种名、药敏结果及菌落数。8.3阴性结果报告：培养48h无菌落生长,即为阴性。8.4若尿液培养同时有≥3种细菌生长时,可视为污染标本,建议重留送检。注意事项9.1尿液标本不可置肉汤中进行增菌培养。9.2中段尿标本不可做厌氧菌培养。9.3收集尿液过程中,请勿将手伸入容器中,且避免尿液勿溢出容器,以免污染〔以无菌导管技术收集尿液的方法已被淘汰。临床意义尿液的细菌学检查〔中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要价值。正常尿液是无菌的,而外尿道有正常菌群寄生,标本的采集必须无菌操作。另外,细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长,菌落计数>105CFU/ml,提示感染〔膀胱炎、肾盂肾炎、肾或膀胱结核等。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、肠球菌等。危急值报告如查出抗酸杆菌阳性,则应及时向临床报告并报作传染病报告。参考文献1CNAS-GL23《医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南》,20082周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海:上海科学技术出版社,20073叶应妩,王毓三,申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.XX:东南大学出版社,20064MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,20075ISO15189:2007《医学实验室-质量和能力认可准则》,2007XX省XX市人民医院检验科微生物实验室版本号：2.0文件标题：脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程文件状态：受控文件编号：WSW-SOP-2.0修改日期：2013年1月30日文件种类：程序文件生效日期：2013年6月30日编制者：王腾勇批准者：贺爱民审核者：贺爱民发放号：脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程目的规范脓及伤口标本细菌学标准操作规程,确保检验结果准确可靠。适用范围脓液培养或涂片检查。标本3.1标本类型脓液。3.2标本采集3.2.1开放性脓肿和脓性分泌物用无菌盐水或75%酒精擦去表面渗出物,用拭子深入溃疡深处采集两支拭子,一支为涂片检查用,一支作培养用。

3.2.2大面积烧伤的创面分泌物用灭菌棉拭取多部位创面