生物学细胞培养细胞培养用液及培养基

主要内容培养用液培养基（液）主要内容培养用液培养基（液）培养用液细胞培养时，除需要培养基，还需要大量的液体，包括·水·盐溶液·消化液·缓冲液·维生素液等3培养用液·水➢细胞培养所必须的成分（吸收与代谢）➢维持细胞形态、调节渗透压及PH➢细胞培养对水质的要求极高培养用液·水➢自来水➢蒸馏水 （三蒸）➢离子交换水培养用液·水培养用液·水➢超纯水将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。电阻率大于18MΩ*cm，或接近18.3MΩ*cm极限值。培养用液·平衡盐溶液（BSS）➢组织细胞培养基中常用的基本液体。➢功能维持渗透压、调节PH、供给细胞生存所需能量及无机离子成分。➢用途合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组织、细胞等培养用液·平衡盐溶液9培养用液·消化液-用途➢分散组织、细胞➢使细胞脱离附着底物培养用液·消化液-成分➢胰蛋白酶➢二乙烯四乙酸二钠（EDTA）➢胶原酶溶液培养用液·消化液-胰蛋白酶胰蛋白酶：从动物胰脏分离的一种水解酶功能：使细胞间的蛋白质水解、细胞分散配置比例：1:125或1:250培养用液·消化液-胰蛋白酶注意事项配置胰蛋白酶消化液时应采用不含Ca2+、Mg2+和血清的液体使用时，一旦细胞分散后，立即用适量含血清的培养基终止消化反应培养用液·消化液-EDTAEDTA是一种化学螯合剂，能螯合Ca2+、Mg2+而使细胞分离，对细胞毒性较小。工作浓度：

0.02%培养用液·消化液-EDTA注意事项①

需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解②

与胰酶联合使用可提高消化效率③

EDTA不能被血清中和，消化后应彻底清洗培养基（液）维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是组织细胞培养最重要的条件分类·天然培养基·合成培养基培养基（液）-天然培养基取自动物体液或从动物的组织中分离提取优点·营养成分丰富，培养效果良好缺点·成分复杂，来源受限培养基（液）-天然培养基类型·生物性液体（血清）·组织浸液（胚胎浸液）·凝固剂（血浆）·……培养基（液）-天然培养基·血清➢最常用的天然培养基➢促进细胞生长繁殖、粘附并中和usu➢常用的血清为小牛血清和胎牛血清培养基（液）-天然培养基·血清-使用注意事项➢使用前需灭活➢-20℃保存，避免反复冻融➢优质血清外观为透明、无溶血、淡黄色液体、无沉淀，灭活后颜色略深➢保证无菌，且球蛋白含量越低者质量越佳培养基（液）-天然培养基·血清-鉴定方法➢细胞集落形成率➢连续传代培养➢生长曲线法培养基（液）-天然培养基·血浆➢可支持培养组织块，且还供给细胞生长的营养物质，但易发生液化。➢常用禽类血浆 小于一岁的雄性鸡类该类血浆钙水平恒定，激素含量少，易于采集，整个采集过程需要注意无菌培养基（液）-合成培养基对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件下模拟为细胞提供了一个近似体内生存环境、又便于控制和标准化的体外生存环境。培养基（液）-合成培养基·成分➢氨基酸-L型氨基酸

谷氨酰胺➢维生素➢糖类➢无机离子➢其他成分培养基（液）-合成培养基·常用培养基➢199培养液➢Eagle培养液➢RPMI-1640➢Ham培养液培养基（液）-合成培养基·常用培养基➢199培养液在Earle生理盐水的基础上添加各种添加成分。因配置比较复杂，现已较少使用。培养基（液）-合成培养基·常用培养基➢Eagle培养Eagle等人在该培养基的基础上，将13种氨基酸和8种维生素浓度调整至接近细胞内含量水平，制成最低必须培养基（Eagle’sminimum

essential

media,MEM）MEM为目前常用的培养基培养基（液）-合成培养基·常用培养基➢Eagle培养BMEMEM高糖型-DMEM低糖型生长快粘附差培养基（液）-合成培养基·常用培养基➢RPMI-1640最初用于培养小鼠白血病细胞，故该培养基特别适合悬浮细胞生长。RPMI-1640不但适于肿瘤细胞亦适用于正常细胞。目前应用最广泛的培养基培养基（液）-无血清培养基·为什么要使用无血清培养基？➢血清成分复杂，干扰实验结果➢血清含有毒性物质、抑制性物质、影响某些细胞功能30培养基（液）-无血清培养基·无血清培养基-缺点➢通用性较差➢细胞增殖缓慢、成本较高➢可能失去血清的一些保护性作用31培养基（液）-无血清培养基32Ham’s

12+DMEM·无血清培养基-配置方法基础培养液 辅加成分培养机制营养成分酶抑制剂培养用液·水➢细胞培养所必须的成分（吸收与代谢）➢维持细胞形态、调节渗透压及PH➢细胞培养对水质的要求极高培养用液·水➢自来水➢蒸馏水 （三蒸）➢离子交换水培养用液·消化液-成分➢胰蛋白酶➢二乙烯四乙酸二钠（EDTA）➢胶原酶溶液培养用液·消化液-胰蛋白酶胰蛋白酶：从动物胰脏分离的一种水解酶功能：使细胞间的蛋白质水解、细胞分散配置比例：1:125或1:250培养基（液）-合成培养基对细胞体内生存