果糖二磷酸钠镁对失血性休克大鼠肾脏的保护作用

果糖二磷酸钠镁对失血性休克大鼠肾脏的保护作用

二磷酸钠（fdpm）是用未经处理的磺酸钠（fdpm）而获得的药物。文献报道1,6-二磷酸果糖治疗失血性休克取得满意疗效,而镁盐能够有效的保护失血性休克时缺血缺氧的肾脏组织,并改善微循环。鉴于二者在失血性休克肾脏中的作用,而推测果糖二磷酸钠镁对失血性休克肾脏具有保护作用。本实验按照Wiggers改良法建立失血性休克模型,研究不同剂量的果糖二磷酸钠镁对失血性休克大鼠肾脏组织的保护作用及其机制。为临床上果糖二磷酸钠镁治疗失血性休克和其他原因引起的肾缺血/再灌注损伤提供实验依据。1材料和方法1.1试剂与试剂Wistar大鼠60只,♀♂各半,体重180～230g,由重庆医科大学实验动物中心提供。果糖二磷酸钠镁(分子式C18H32O36P6Na8Mg·20H2O,纯度为99.5%,批号990712,重庆医科大学基础学院生物医学工程研究室提供);1,6-二磷酸果糖钠盐(FDP,意大利Foscama生化制药公司);硫酸镁注射液(批号:981022,无锡市第七制药厂);肝素钠(批号:F20020701,中国医药集团上海化学试剂公司);戊巴比妥钠(上海化学试剂厂)。血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、组织蛋白及ATP酶测定试剂盒,由南京建成生物工程研究所提供。1.2方法1.2.1动物自身血液回输主导药型n按照Wiggers改良法,建立大鼠失血性休克模型,戊巴比妥钠45mg·kg-1腹腔注射麻醉大鼠,全身肝素化(肝素生理盐水500U·kg-1),以平均动脉压(MAP)5.3kPa为标准,休克状态维持60min,使动物达不可逆休克。休克状态维持60min后各组分别从股静脉给予相应的药物,给药后观察60min,然后将动物自身血液回输再观察60min。将模型成功的大鼠随机分为6组:生理盐水对照组(等容量生理盐水)、FDPM大剂量组(FDPMl,90.0mg·kg-1)、FDPM中剂量组(FDPMm,45.0mg·kg-1)、FDPM小剂量组(FDPMs,22.5mg·kg-1)、FDP组(FDP,37.5mg·kg-1)、硫酸镁组(Magsul,3.4mg·kg-1),FDP组和硫酸镁组剂量设定是根据FDPM中剂量组(45.0mg·kg-1)中FDP、Mg2+的含量换算而成,各组动物给药容量均为10ml·g-1体重。1.2.2平均动脉压检测分别在休克前、休克末、给药后10、30、60min及回输血后0、30、60min用MPV-2000型生物信号分析仪检测平均动脉压。1.2.3组织匀浆在给药后120min(即回输血后60min),从大鼠股静脉收集血液,静置于4℃,2h后离心(5min,2000r·min-1),取血清,同时股动脉放血处死,取肾脏,在冰水中用内切式组织匀浆器制成10%(W/V)生理盐水组织匀浆,然后用TGL-16高速台式离心机3000r·min-1离心15min,取上清液备用。分别用BUN、Cr及MDA、SOD、Na+,K+-ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase和蛋白试剂盒测定。1.3统计方法结果用x¯±sx¯±s差表示,各组间比较采用单因素方差分析及q检验;用SPSS10.0统计分析软件进行数据处理。2结果2.1回输血后60min及回输血后60minmap的变化FDPM大、中、小剂量组以及FDP组在给药后10、30、60min及回输血后0、30、60minMAP均有所升高,与生理盐水对照组相比差异有显著性;FDPM大剂量组的MAP高于FDP组,但两组之间差异无显著性,见Tab1。2.2各组大鼠肾损害情况FDPM剂量依赖性降低血清中BUN和Cr含量,与生理盐水对照组、FDP组和硫酸镁组相比差异有显著性,结果提示:果糖二磷酸钠镁能够减少受损肾细胞的数量,使血清中的BUN和Cr含量减少,表明其对失血性休克大鼠缺血/再灌注的肾脏有保护作用,见Tab2。2.3pase、ca2+-atpase活性各给药组均能提高SOD、Na+,K+-ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase活性,与生理盐水对照组、FDP组和硫酸镁组相比差异有显著性;另外,FDPM剂量依赖性降低MDA含量,FDPM组与FDP组、硫酸镁组相比差异也有统计学意义,见Tab3。3fdpm的功效发生失血性休克时,由于全身血流灌注不足导致广泛的细胞缺氧和生命器官代谢功能障碍,使机体能量代谢发生障碍,ATP分解产生大量的氧自由基,随后出现钙超载,导致膜磷脂分解,使氧自由基生成增加,造成膜脂质过氧化反应。由于失血性休克后血液重新分布,肾脏是最早受到缺血性损伤的器官,其中肾内氧自由基增多,细胞内钙超载,能量代谢障碍及某些激素失调是造成肾组织损伤的主要原因。本实验研究结果表明:果糖二磷酸钠镁能够升高失血性休克大鼠的MAP,减少血清中的BUN和Cr含量,同时降低肾脏组织MDA含量和提高SOD活性,提高肾脏组织的Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶,从而减轻肾脏组织缺血缺氧性损伤,其作用明显优于单独应用1,6-二磷酸果糖或硫酸镁。由于FDPM既补充1,6-二磷酸果糖,又补充了Mg2+,其中FDP能够改善能量代谢,并能调节多种能量代谢的相关酶,促进ATP的生成,产生足够的能量,增加细胞膜的稳定性,改善心肌收缩和舒张功能,提高心脏博出量,维持MAP,保持有效的循环血量,增加局部组织对缺血缺氧的耐受性,促进休克后肾脏组织功能的恢复;FDP还能够提高SOD的活性,抑制自由基的生成及增强细胞对自由基的清除能力,同时稳定生物膜增强其抗自由基攻击。FDPM中的Mg2+可以使细胞内依赖Mg2+能量代谢酶活性得到恢复,防止线粒体内Ca2+积聚,从而促进了心肌磷酸腺苷酸和磷酸肌酸等高能磷酸化合物生成。此外,镁能保护线粒体谷胱甘肽氧化酶活性,提高SOD活性,增强膜对氧自由基损伤的耐受,减