DB51∕T 2166-2016 微生物检测领域培养基和试剂验证指南

00DB51 51/T

2166—2016微生物检测领域培养基和试剂验证指南2016

2016

四川省质量技术监督局

DB51/T

2016目 次

...............................................................................

II

..............................................................................

范围

..............................................................................

规范性引用文件

....................................................................

术语和定义

........................................................................

................................................

生长率测试

........................................................................

选择性

............................................................................

生化特性

..........................................................................

附录

...............................

12附录

.................................

13附录

.............................................

14参考文献

............................................................................

26DB51/T

2016前 言

DB51/T

2016引 言DB51/T

2016微生物检测领域培养基和试剂验证指南

DB51/T

2158

culture

运输培养基transport

medium注：输培基中通常不许包含使微物增殖的物，但是培养应能保护菌。典型的运培养基如缓

DB51/T

2016

enrichment

non-selective

enrichment

medium3.10分离培养基isolation

medium3.11

isolation

3.12differential

medium能够进行一项或多项微生物生理和（或）

3.13计数培养基count

medium

DB51/T

20163.14

3.15标准菌株reference

strain

3.16工作菌株working

culture

——20

℃～25

℃的

pH；

总则

DB51/T

2016一批培养基中至少应抽取或制备一个平板或试管，或按批量的

对不含指示剂和选择剂的培养基，通常只需采用测试菌株进行生长率测试；对含有选择剂的培测试方法包括定量方法、半定量方法、定性方法。常见培养基的生长特性测试见附录

C。的培养基进对照有助于果的解释。考培养基应择近期批次质量良好的养基或是来其他试菌株具有其代表种的稳定特性，是能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株。测试菌株主要购置准菌种保藏心，也可以实验室自己离的具有良特性的菌株测试菌株的源应尽量与测对测试菌株通常需要采用组合菌株进行验证，如具典型反应特性的生长良好的阳性菌株；弱阳性菌株（对培养选择剂等试敏感性强的株）；不具该特性的阴菌株；部分完全受抑制菌株，使用四类

5.1

a)

倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少

mm

90

mm

的平皿

b)

c)

选择合适稀释度的工作菌悬液

0.1

参比培养基的选择，一般细菌采用TSA，一般霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖琼脂，对营养有特殊要求的微生物采DB51/T

2016d)

..................................（1）e)

要求目标菌在培养基上应呈现典型的生长形态。对于非选择性固体培养基、选择性计数固体培上目标菌生长率应

；选择性分离体培养基目标菌的长率一般不小于

a)将培养基分装试管，每管

10

mL)。b)

c)

立即吸取

mL

待测培养基混合液，倾注非选择性平板，每管待测培养基接种一个平板。按检d) 剩余已接种菌液的待测培养基置

20

℃～25

45

min

mL

倾注平板，每管e)

a)

将培养基分装试管，每管

10

mL。b)

将测试菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他制备方法，制备

10

倍系列稀释的工作菌c)

CFU～100

应同时接种

1000

CFU～5000

CFU

d)

10

e)

量化浊度值：0

表示严重的混浊。DB51/T

2016f) 对于选择性增菌培养基，划线接种后，目标菌在选择性平板上的菌落应>10

a)

本步骤不适用于商品化即用培养基。b)

cm

操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边

次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为

线速度前后致，整个划应快速连续移取液体培物时应将接环伸入培养下部分以防环上

c)

菌落生长，则此划线的

值记为

1；如果划线上仅一半有稠密菌落生长，则

0.5；如果

值为

5.2.2c)所示方法划线后，共有

16

条划线，所以培养皿最大

16。记录各个平板的得

10。d)

总则

b)

b)

制备成

10

a)将培养基分装至试管，每管

10

mL。-35 7c)

d)目测其浊度值：0

表示很轻微的混浊；

表示严重的混浊。e)目标菌的浊度值应为

1。

a)

b)c)

min

d)

6.1

a) 按照

5.2.1

b) c)

DB51/T

2016

d)培养后计算培养基的生长指数

上有

值为

0.5。

如果划线

值为

e) 非目标菌的生长指数

值一般小于或等于

5。

将培养基分装试管，每管

10

mL。

5.2.1b)

在装有待测培养基的试管中接种

1000

CFU～5000

CFU

非目标菌，接种量为

mL，同时接种两个平行管，混匀。同时将

mL

菌悬液(比试管接种小

10～100

倍稀释度)倾注平板，接种两个平板，作吸取

10

TSA）上。同时每管

有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再

培养基的制备

10

mL。本步骤不适用于商品化即用培养基。

工作菌悬液的制备

5.3.1

b)的要求进行。

接种 按照

5.3.1

结果观察 目测其浊度值：0

表示很轻微的混浊；

表示严重的混浊。

结果解释 非目标菌的浊度值应为

10

CFU/mL）

10

CFU/mL）

7.1

在进行生长率测试时同步完成，目标菌应有典型的菌落外观、大小和形态。

平板的制备与保存,

5.2.1a)的要求进行。本步骤不适用于商品化即用培养基。

接种，用

工作菌悬液的制备,将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法，制备成

9

接种 吸取

mL（约

滴）菌悬液至待测培养基内，按检测方法中规定的

CFU/mL～2×10

DB51/T

CFU/mL～2×10

倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个厚度为

mm

35

88

接种

取干净玻片，在玻片上划出2个约1cm×2cm的区域，用接种环挑取1环测试菌株，各放1/2环于玻片

在无反射黑色背景下，观察有无凝集现象。任何程度的凝集现象皆为阳性反应.

DB51/T

2016DB51/T

2016

A.2

号胆盐。A.3

A.4

DB51/T

2016

flexneri

sonnei

Citrobacter

sakazakii

delbrueckiisubsp.

faecalis

typhi

Lactobacillus

plantarum

mirabilis

cholerae

vulgaris

Vibrio

jejuni

alginolyticus

coli

hydrophila

Enterococcus

Bacillus

mycoides

Staphylococcus

Clostridium

Staphylococcus

difficile

thermophilus

Saccharomyces

ATCC

25922

29212

培养基

CICC6069(厌

ATCC17802

27562

ATCC

25922

ATCC

6633

19115

ATCC

25922

ATCC

6633DB51/T

2016

CMCC(B)50071

ATCC

25922

29212

CMCC(B)51572

ATCC

25922

29212

CMCC(B)51572

ATCC

25922

ATCC

25922

CMCC(B)49005

29212

29212

ATCC

25922

CMCC(B)51572

29544

29212

培养基

培养基

12900

DB51/T

2016

12900

29212

29212

CMCC(B)

CMCC(B)

13048

琼脂

琼脂

33291

27562

E(CC)

27562

TCBS

33787

DB51/T

2016

C.2

29212

29212

16404

培养基

CICC

6069

培养基

6032

CMCC(B)

43593

酵母浸膏的胰酪胨大

增菌液倾注TSA

BHI

33291

DB51/T

2016

29212

上＜

29212

肉汤

33291

空肠菌在

上＜

上＜

29212

上＜

29212氯化钠

上＜氯化钠

上＜

29212

平板上

上＜

29212

29544

29212在阪杆菌色培养基上＞

上＜

29212

上＜

上＞

上＜DB51/T

2016

增菌液

29212

29212

上＜

上＜

29212

29212

上＜

上＜

2，且气体充满管内

1/3

29212

0（不生长）

2，且气体充满管内

1/3

29212

2，且气体充满管内

1/3

29212

0（不生长）DB51/T

2016

24h

Hinton

血琼脂

微需氧培养

33291DB51/T

2016

CMCC(B)51572

(pH7.2)

CMCC(B)51572

半乳糖ONPG

CMCC(B)51572(MR)

滴，培养基VP甲液0.5mL和乙液

内液面不显红色

滴，培养基

甲液

0.5mL

和乙液

内液面显红色

麦芽糖发酵管甘露醇发酵管水杨苷发酵管山梨醇发酵管棉子糖发酵管

DB51/T

2016

以灭菌液体石

以灭菌液体石

以灭菌液体石

滴，培养基变红棕色

滴，培养基不变色

CMCC（B）

CMCC（B）DB51/T

2016

27562

As1.172

27562

33787

MR-VP