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文档简介

植物微核检测技术一、试验目的了解微核检测的方法和意义通过检测评价环境中常见物质的诱变状况二、试验原理微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种特别构造，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应为主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反响性质与主核一样这种方法获得的结果与通过中期畸变染色体计数所获结果相当。1983年华中师大生物系建立了一套蚕豆根尖微核检测技术，用于检测水环境3 以肯定浓度CrO、NaN3 12-24小时，酸解、染色、压片、计数微核发生率。污染指数=样品实测微核千分率平均值/比照实测微核千分率平均值污染指数 0-1.5 根本没有污染1.5-2 轻度2-3.5 中度3.5以上 重度三、试验材料、仪器与试剂试验材料：蚕豆种子试验器具：显微镜，镊子，载玻片，盖玻片，烧杯，培育皿等。3试验药品：5mol/LNaN(叠氮钠)处理液：20mmol/L3四、试验步骤取材料〔大蒜洋葱、蚕豆、小麦等〕发根至肯定长度。将试验用蚕豆种子按需要量放入盛有蒸馏水的烧杯中，在25℃下浸泡24小时，此间至少换水两次。种子吸胀后，用纱布松散包裹置培育皿中，保持湿度。大局部初生根长至1～2cm左右，根毛发育良好，这时即可用来进展检测。处理各试验组。应当设定阴性比照、阳性比照、样品组。3每一处理选取4N4种不同624h。324小时。2470%4℃下保存。制片①285MHCl25min,3次。②切取近根尖分生区的伸长区组织，捣碎，用改进苯酚品红染色20min。③压片：加上盖玻片后，用铅笔小扣使细胞分散，最终垂直压下去。镜检微核识别标准：1/3以下，并与主核分别的小核。小核着色与主核相当或稍浅。小核形态为圆形、椭圆形或不规章型。每个根尖计数1000个细胞，统计含微核的细胞数，然后取平均值，即为该处理的微核千分率。五、试验观看与结果分析24小时后，蚕豆芽变黑色分析：可能是培育箱内由于同学固定导致乙酸在空气中浓度过高导致结果观看NaN3处理镜下观看试验组镜下观看〔由于试验组第三、四组解离后隔夜，后染色观看，导致染色过浅，或因此影响试验结果〕将试验结果进展统计学处理阴性NaN31/501/1001/5001/1000微核细胞数514893总细胞数10001000100010001000千分率5‰‰14‰8‰9‰3‰污染指数12.81.61.80.6六、试验结论学生用修正液有污染作用，污染严峻七、留意事项1.各种诱发微核的处理试剂具有肯定毒性，留意使用安全，并防止污染环境。2．对严峻污染的物质进展检测时，检测处理睬造成根尖死亡，应稀释后再作测试；3.微核监测的关键是：1.材料的选择：材料应选择染色体条数少，个体大，便于统计，对污染物反响比较敏感的材料；这种材料还应适宜于在当地生长。因此，筛选适宜的品种是一项重要的根底工作。材料处理：应留意以下两点：核数之间的差异会变得不显著。使试验结果更加明显、牢靠。微核的统计：最关键的是微核的识别。微核的识别标准应为；①凡主核

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