《生物技术制药》A卷答案

PAGEPAGE1《生物技术制药》A卷答案一名词解释（每题4分，共10题，共40分）１.integratedbioreaction-separationtechnology生物反应和产物分离偶联技术根据生物反应和产物特性，结合产物分离单元操作技术，及时的移去发酵液中的代谢物，一方面解除产物和副产物对发酵过程中细胞的生长或产物形成的抑制作用，提高发酵产量和生产效率，另一方面可以从复杂的分离系统中及时回收产物的操作技术。２.Metabolicengineering代谢工程指利用多基因重组技术有目的的对细胞代谢途径进行修饰，改造，改变细胞特性，并且与细胞的基因调控，代谢调控及生化工程相结合，为实现构造新的代谢途径，生产特定目的产物而发展起来的一个新的学科领域。其研究的目的在于构建具有新代谢途径，能生产特定目的产物或具有过量生产能力的工程菌，用于工业生产。根据具体微生物代谢特性可以采用不同的设计，可分为改变代谢，扩展代谢途径和构建新的代谢途径等三种。３.genglibrary基因文库一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后，将酶切片段插入到载体DNA分子中，所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体，将包含这个生物体的整个基因组，也就是构成了这个生物体的基因文库。将这些载体导入到受体细菌或细胞中，这样每个细胞就包含了一个基因组DNA片段与载体重组DNA分子，经过繁殖扩增，许多细胞一起包含了该生物全部基因组序列，我们将这一个集合体叫做基因文库。４.reversedphasechromatography,RPC反相色谱指利用溶质分子中非极性基团与非极性固定相之间相互作用力的大小，以及溶质分子中极性基团与流动相中极性分子之间在相反方向作用力的大小差异进行分离的。反向色谱和疏水色谱的差异在于前者在有机相中进行，蛋白质经过反相流动相与固定相有时会发生部分变性，而后者通常在水溶液中进行，蛋白质在分离过程中一般仍保持其天然构象。５.bystandereffect旁观者效应在载体病毒中加入tk基因，并让它在肿瘤细胞中特异性的表达该基因，在基因治疗的同时，再辅以这类药物治疗，就可以大大提高加强病毒对肿瘤细胞的杀伤作用，而且由于死亡的细胞释放的tk酶又能进一步转化药物前体，因此可以将对细胞的杀伤效果扩展到附近未被病毒感染的细胞，形成所谓的旁观者效应。６.phagedisplayantibodylibrarytechniques噬菌体抗体库将抗体的基因插入到噬菌体或病毒编码外壳蛋白质的基因中，然后以融合蛋白质的形式与噬菌体衣壳蛋白一起表达在噬菌体或病毒的表面，从而被特异的抗原筛选出来。是以丝状噬菌体展示技术与抗体结合文库技术向结合的技术。７.intrabody细胞内抗体亦称内抗体，主要是指在细胞内合成并作用于细胞内组分的抗体。主要应用为1分子功能的研究；2下调细胞因子受体的表达；3抑制细胞内癌蛋白的活性；4抑制病毒的复制。因此有用于基因治疗的前景，研究较多的是用细胞内抗体抑制I型，其中抗gp120的Fab段和抗TatScFv已进入临床试用８.transgenicanimal转基因动物采用基因工程技术把外源目的基因导入动物生殖细胞、胚胎干细胞和早期胚胎，并在受体动物的染色体上稳定整合，又经过各种发育途径能把外源目的基因稳定地传给子代，通过这项技术所获得的动物即为转基因动物。９.selectionbasedonphageinfectivity选择性感染筛选把噬菌体感染能力的恢复与否来作为筛选手段叫做选择性感染筛选。１０.monolayercellculture单层细胞培养法是将动物细胞组织块中粘连在一起的细胞用酶法或物理分散法分散成单个细胞，制成细胞悬液，经计数、稀释后，接种于无菌培养液中，37℃，5％CO2空气下进行原代培养，细胞即开始生长并逐渐形成单层。二填空题（每空1分，共20空，共20分）1产物产量PH值糖氨基氮菌丝形态2质谱法3加入缓冲剂4贴壁依赖性细胞非贴壁依赖性细胞兼性贴壁细胞55’-3’聚合酶活性3’6抗生素7药物浓度温度湿度氧光照8大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化三选择题（每题1分，共10题，共10分）1C2C3B4A5C6D7C8D9A10D四简答题（每题10分，共3题，共30分）1分批发酵，补料分批发酵，半连续培养，连续培养的区别以及各自的优缺点。答①分批发酵是将发酵培养基组分一次性投入发酵罐，经灭菌，接种和发酵后，再一次性的将发酵液放出的一种间歇式发酵操作类型，又称间歇式发酵。分批发酵是一种准封闭系统，在发酵过程中出了控制温度，不断进行通气和加入酸碱溶液调节PH外，与外界没有其他物料交换。这是目前最为广泛使用的一种发酵方式。(2分）缺点：开始时基质浓度很高，到后期产物浓度很高，对发酵不利。（1分）②补料-分批发酵：是在发酵过程中间歇或连续的以某种方式补入新鲜料液，克服由于养分不足，导致发酵过早结束的问题。优点：由于只有料液的输入，没有输出，因此发酵液的体积在增加。与分批发酵相比，通过向培养系统中补充物料，可以使培养液中的底物浓度较长时间的保持在一定的范围内，既保证了菌体细胞的生长需要，又不造成阻遏抑制等不良影响，从而达到提高产物浓度的得率的目的。（1分）缺点:容易造成产物的积累，容易染菌，而且中间补料会造成发酵液的稀释。（1分）③半连续培养：在补料分批培养基的基础上，加上间歇放掉部分发酵液进入下游提取的发酵操作方式成为半连续发酵。这种培养方法的开始阶段如同常规分批发酵，但在培养和发酵结束时，并不将发酵液全部放出，而仅放出其中一部分，同时补入同体积的新鲜培养基或必要的成分，再继续发酵培养，如此可反复多次。（1分）优点：不仅可以补充养分和前体，而且有害代谢物质被稀释，有利于产物的继续合成。缺点：首先放掉发酵液的同时会损坏未被利用的营养物质和正处于代谢活跃状态的菌体细胞。其次中间补料会造成发酵液的稀释，增加下游提取液的体积，再次，发酵液中一些由代谢产生的前体有可能丢失，造成发酵产物产量的影响，此外染菌问题也是影响发酵过程能否进行的重要因素。（1分）④连续培养：是当发酵过程进行到一定阶段时一边连续补充发酵培养液，一边又以相同的流速放出发酵液，维持发酵液原来的体积的发酵方式，微生物在稳定状态下生长和代谢。优点：与分批发酵相比，连续发酵使微生物的生长和代谢活动保持旺盛的稳定状态，从而使产率和产品质量也相应保持稳定；能够更有效的实现机械化和自动化，降低劳动强度；减少设备清洗，准备和灭菌等非生产占用时间，提高设备利用率。(2分）缺点：首先由于是开放体系，加上发酵周期长，容易污染杂菌。其次生长周期连续发酵中，微生物易发生变异。再次，对设备。仪器及控制元件的技术要求较高；最后，粘性丝状菌菌体容易附着在器壁上生长或发酵液内结团，带来操作困难。总之，连续发酵营养物利用率低于单批培养，一般只能维持数月至一年。（1分）2.酶分离纯化的一般程序及其对应的方法答1原材料的选择和预处理为了使得分离纯化过程容易进行，减少生产成本，一般选择含目的酶丰富的原料。同时也要考虑到原料的来源，取材方便经济等因素。从微生物发酵液中提取酶的第一个步骤是发酵液的预处理，即采用沉淀法，变性法，絮凝和凝聚等方法出去发酵液中的无机离子，杂蛋白等，及采用活性碳，离子交换树脂等除去色素及其他一些物质，以便后续各步操作。（4分）2酶的分离又称初步纯化或提取，一般采用盐析，等电点沉淀，有机溶剂沉淀和离心分离等技术将目的酶与其他蛋白分离开来。采用的方法一般简便，处理量大。（2分）3酶的精制