乳及乳制品的理化检测-乳及乳制品中抗生素的测定

生鲜乳中抗生素残留检验原理一试剂和材料二检验程序四菌种、培养基和试剂三操作步骤五报告六一、原理

样品经过80℃杀菌后，添加嗜热链球菌菌液。培养一段时间后，嗜热链球菌开始增殖。这个时候加入代谢底物2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC），若该样品中不含有抗生素或抗生素浓度低于检测限，嗜热链球菌讲继续增殖，还原TTC成为红色物质。相反，如果样品中含有高于检测限的抑菌剂，则嗜热链球菌受邀到抑制，因此指示剂TTC不还原，保持原色。噬热链球菌抑制法二、试剂和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱：2℃~5℃、-20℃~-5℃恒温培养箱：36℃±1℃带盖恒温水浴锅：36℃±1℃、80℃±2℃天平：感量0.1g、0.001g无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度），10.0ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头无菌试管：18mm×180mm温度计：0℃~100℃旋涡混匀器噬热链球菌抑制法三、菌种、培养基和试剂噬热链球菌抑制法1．菌种：嗜热链球菌2．灭菌脱脂乳3．4%2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液：：1g2，3，5-氯化三苯四氮唑溶于5mL灭菌蒸馏水中，装褐色瓶中于2℃～5℃保存。临用时用灭菌蒸馏水5倍稀释。成为4%的水溶液。4．青霉素G参照溶液：称取青霉素G钾盐标准品30.0mg，溶于无菌磷酸盐缓冲液中，使其浓度为100IΜ/mL～1000IΜ/mL。再将该溶液用灭菌脱脂乳稀释至0.6IΜ/mL，分装于无菌小管中，密封备用。四、检验程序高效液相色谱法五、操作步骤噬热链球菌抑制法菌种活化取一接种环嗜热链球菌菌种，接种在9ml灭菌脱脂乳中，置36℃±1℃恒温培养箱中培养12h~15h后，置2℃~5℃冰箱保存备用。每15d转种一次。测试菌液将经过活化的嗜热链球菌金钟接种灭菌脱脂乳，36℃±1℃恒温培养箱中培养15h±1h，加入相同体积的灭菌脱脂乳混匀稀释成测试菌液。培养取样品9ml，置18mm×180mm试管内，每份样品另外做一份平行样。同时再做因性和阳性对照各一份，阳性对照管用9ml青霉素G参照溶液，隐形对照管用9ml灭菌脱脂乳。多有试管置80℃±2℃水浴加热5min，冷却至37℃一下，加入测试菌液1ml，轻轻旋转试管混匀。36℃±1℃水浴培养2h，加4%TTC水溶液0.3ml，在旋涡混匀器上混合15s或振动试管混匀。36℃±1℃水浴避光培养30min，观察颜色变化。如果颜色没有变化，于水浴中继续避光培养30min作最终观察。观察时要迅速，避免光照过久出现干扰。五、操作步骤噬热链球菌抑制法判断方法在白色背景前观察，是观众样品呈乳的原色时，指示乳中有抗生素存在，为阳性结果，试管中样品呈红色为阴性结果。如最终观察现象仍为可以，建议重新检测。六、报告噬热链球菌抑制法报告：最终观察时，样品变为红色，报告为抗生素残留阴性。样品依然呈乳的原色，报告为抗生素残留阳性。本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素0.004IU，链霉素0.5IU，庆大霉素0.4IU，卡那霉素5IU。生鲜乳中抗生素残留检验原理一试剂和材料二检验程序四菌种、培养基和试剂三操作步骤五报告六一、原理

培养基预先混合嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞，并含有pH指示剂（溴甲酚紫），加入样品并孵育后，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，细菌芽孢将在培养基中生长并利用糖产酸，pH指示剂的紫色变为黄色。相反，如果样品中含有高于检测限的抗生素，则细菌芽孢不会生长，pH指示剂的颜色保持不变，仍为紫色。嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法二、试剂和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱：2℃~5℃、-20℃~-5℃恒温培养箱：36℃±1℃、56±1℃恒温水浴锅：65℃±1℃、80℃±2℃无菌吸管或100μl、200μl微量移液器及吸头无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm温度计：0℃~100℃离心机：转速5000r/min嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法三、菌种、培养基和试剂嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法1．菌种：嗜热脂肪芽孢杆菌卡利德变种2．灭菌脱脂乳3．无菌磷酸盐缓冲溶液。4．青霉素G参照溶液：称取青霉素G钾盐标准品30.0mg，溶于无菌磷酸盐缓冲液中，使其浓度为100IΜ/mL～1000IΜ/mL。再将该溶液用灭菌脱脂乳稀释至0.6IΜ/mL，分装于无菌小管中，密封备用。5．溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基:称取溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基干粉15g，加入蒸馏水或去离子水1000mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，115℃高压灭菌30min。四、检验程序嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法五、操作步骤嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法测试培养基在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基中加入适量芽胞悬液，混合均匀，使最终芽胞浓度为8×105CFΜ/mL～2×l06CFΜ/mL。混合芽孢悬液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基分装小试管，每管200μL，密封防止水分蒸发。配置好的测试培养基可以在2℃～5℃保存6个月。培养操作吸取样品100μL加入含有芽胞的测试培养基中，轻轻旋转试管混匀，每份捡样做2份，另外再做阴性和阳性对照个1份，阳性对照管为100μL青霉素G参照溶液，阴性对照管为100μL无抗生素的脱脂乳。于65℃±2℃水浴培养2.5h，观察培养基颜色的变化，若没有颜色变化，继续水浴培养30min做最终观察。结果报告。五、操作步骤嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法判断方法在白色背景前从侧面和地步观察小试管内培养基颜色。保持培养基原有的紫色为阳性结果，培养基编程黄色或黄绿色为阴性结果，颜色处于二者之间，为可疑结果。对于可疑结果应继续培养30min再进行最终观察。如果培养基颜色仍然处于黄色-紫色之间，表示抗生素浓度接近方法的最低检出限，此时建议重新检测一次.六、报告嗜热脂肪芽胞杆菌抑制法报告：最终观察室，培养基依然保持原有的紫色，可疑报告为抗生素残留阳性。培养基变为呈黄色或黄绿色时，可以报告为抗生素残留阴性。本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素3μg/l，链霉素50μg/l，庆大霉素30μg/l，卡那霉素50μg/l。乳中脂肪的测定

基础知识乳脂肪的存在形式一乳脂肪的化学组成二国标解读四脂肪测定的意义三一、乳脂肪的存在形式脂肪球及脂肪球膜乳脂是由漂浮在乳中的大小不同的粒子构成的众多小球。这些小球是脂肪球。脂肪球的外面包有一层乳清或蛋白质薄膜，具有保持乳浊液稳定的作用，静止时即使脂肪球上浮分层，仍能保持脂肪球的分散状态。在机械搅拌或化学物质作用下，脂肪球膜遭到破坏后，乳脂肪球才会互相聚结在一起。利用这一原理生产奶油，并可测定乳的含脂率。乳中脂肪的测定脂肪球膜的结构图1-脂肪2-结合水3-蛋白质4-乳浆

二、乳脂肪的化学组成乳中脂肪成分复杂，甘油三酯是其主要成分，约占乳脂肪的97%～98%，它和极少量的甘油二酯和甘油单酯及游离脂肪酸共存于乳中。乳中的脂肪酸分为三类：水溶性挥发性脂肪酸，如丁酸、乙酸等；非水溶性挥发性脂肪酸，如十二碳酸等；非水溶性不挥发性脂肪酸，如十四碳酸、二十碳酸、十八碳烯酸和十八碳二烯酸等。乳中脂肪的测定乳中脂类物质的平均含量

脂类质量分数（%）甘油三酯97～98甘油二酯0.3～0.6甘油单酯0.02～0.04游离脂肪酸0.1～0.4游离固醇0.2～0.4固醇脂微量磷酸脂0.2～1.0碳水化合物微量三、脂肪测定的意义脂肪是食品中重要的营养成分之一。脂肪可为人体提供必需脂肪酸；脂肪是一种富含热能营养素，是人体热能的主要来源，每克脂肪在体内可提供37.62kJ(9kcal)热能，比碳