外泌体科学研究策略与方法课件

外泌体研究策略外泌体研究策略1目录、外泌体概述二、外泌研究兴起外泌体基础研究技术四、外泌体研究策略基本逻辑五、外泌体研究实例目录2外泌体概述Exosome是直径约为30-150nm,密度在1.13-1.21日/m1的小囊泡。Exosome天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,外泌体(Eσsome)是活细胞分泌的来源于晩期核内体(也称为多囊泡体)的膜性囊泡AK150101Rabs57RabGDISyritenin2RhoGDsRAP18TrapaniTanAAdvanceddrugdeliveryeviews,2019,65(3):357-367外泌体概述3外泌体研究的兴起15肿擅转移血管相关(再生、损伤)药物送免相兴骨损伤、修复病毒/细菌/寄生虫感染肌相关(肥厚、梗死及其并发症)化疗相关(抵抗、其他并发症)一(肿)耐药子病/妊识别/胎儿染色体异常生物标志物榜尿病及其并发症汁微环牙周再坐外泌体检测技术2018外泌体中标项目研究的主要癌症种类外泌体研究的兴起410mIRNA/小RNAncRNA状2018外泌体中标项目机制研究涉及的主要非编码RNA种类105间充质干癌细胞血清/血浆巨噬细胞内皮细胞其他干细胞尿液2018外泌体中标项目的主要外泌体来源间充质干癌细胞血清/血浆巨噬细胞内皮细胞其他干细胞尿液6外泌体研究基础技术1、外泌体分离1)超速离心2)磁珠免疫捕获3)沉淀或过滤法,2、外泌体鉴定与定量1)鉴定:电镜或NTA来分析其大小和形态,流式细胞仪或WB检测表面标记蛋白esternblot和ELSA检测TSG101、CD632)定量:NA检测外泌体数量,BCA定量检测蛋白浓度3、外泌体功能研究1)荧光标记外泌体检测外泌体进入细胞2)常规实验:外泌体处理细胞检测功能3)wB/qPCR/荧光标记技术检测外泌体中发挥关键作用的生物分子在受体细胞胞核、胞质以及外泌体中的表达外泌体研究基础技术7外泌体研究策略基本逻辑外泌体研究的本质:供体细胞对受体细胞的功能影响,通过外泌这个介质发挥作用aspanin(CD9,CD63,CD81CytoskeletonproteinsmRNA,MIRNA,LncRNANucleusNucleus99POaMVB④④●(c)EndocytosisJournalofHematologyOncologyDecember2019,8:83外泌体研究策略基本逻辑8外泌体研究基本路线图相互作用的受/供体细胞的选择供体细胞外泌体分离和鉴定外泌体对受体细胞功能的影响外泌体能够影响受体细胞功能的因素:细胞因子、mRNAncRNA、mRNA、circinAl以及其他外泌体研究基本路线图9外泌体研究整体研究策略1、通常来说只要是涉及到两种不同细胞甚至同种细胞的两种不同状态:癌与正常细胞(癌转化与抑制)、干细胞与高分化细胞损伤与修复)以及功能状态细胞与非激活状态细胞,就可以设计外泌体研究方案。2、外泌体研究关键点参与外泌功能的关键生物分子一一细胞因子mRNA、IncANA、mRNA、cirCRNA以及其他。3、外泌体设计基本思路有:关键生物分子到外泌体或外泌体到关键生物分子。但无论怎样其核心无法改变一定或有效应受体(供体有时会忽略,例如血清来源外泌体等外泌体研究整体研究策略10外泌体科学研究策略与方法课件11外泌体科学研究策略与方法课件12外泌体科学研究策略与方法课件13外泌体科学研究策略与方法课件14外泌体科学研究策略与方法课件15外泌体科学研究策略与方法课件16外泌体科学研究策略与方法课件17外泌体科学研究策略与方法课件18外泌体科学研究策略与方法课件19外泌体科学研究策略与方法课件20外泌体科学研究策略与方法课件21外泌体科学研究策略与方法课件22外泌体科学研究策略与方法课件23外泌体科学研究策略与方法课件24外泌体科学研究策略与方法课件25外泌体科学研究策略与方法课件26外泌体科学研究策略与方法课件27外泌体科学研究策略与方法课件28外泌体科学研究策略与方法课件29外泌体科学研究策略与方法课件30外泌体科学研究策略与方法课件31外泌体科学研究策略与方法课件32外泌体科学研究策