动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定

动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定过滤法参考标准：一、适用范围适用样品名称不适用样品名称原料动物性蛋白质原料植物性蛋白质原料成品动物性蛋白质饲料植物性蛋白质或混合饲料二、实验原理已脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定)在,恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化16小时,过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。三、实验用品1．实验用试剂试剂名称规格浓度配制方法备注乙醚无需配制在空气中会慢慢氧化成过氧化物，过氧化物不稳定，加热易爆炸，应避光保存。丙酮无需配制易燃、易挥发。胃蛋白酶溶液胃蛋白酶活性：将 浓盐酸稀释至()此溶液临用

水中（溶液~），水浴加热至℃~ ℃,加入（精确至士 ）活性为： 生化级胃蛋白酶，并缓慢搅拌直至溶解。前配制。（）勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。浓硫酸,无需配制，直接使用具强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。混合催化剂称 取• ,磨碎混匀,氢氧化钠, 水溶液称取 氢氧化钠用去离子水配成 溶液。此溶液置于塑料桶中保存。硼酸,水溶液称取硼酸固体，加热溶于水，配成 溶液。混合指示剂称取 甲基红溶于乙醇，配成溶液；称取 溴甲酚绿溶于阴凉处保存有效期三个月

乙醇，配成溶液；两溶液等体积混合。硫酸铵无需配制使用前在 ℃干燥箱中干燥至恒重蔗糖无需配制糖类物质，不能在℃干燥箱中干燥，使用时可不干燥。盐酸标准溶液具体见附录实验用设备仪器设备名称规格高速万能粉碎机分析筛孔径 目分析天平感量冷冻水浴恒温振荡器手动索氏提取系统消煮炉可控温℃凯式烧瓶凯氏蒸馏装置常量直接蒸馏式磨口三角瓶带盖，布氏漏斗①

真空泵快速定量滤纸①容量瓶烧杯,滴定管白色、酸式，锥形瓶玻璃棒三、实验内容序号实验项目操作内容注意事项样品制备选取有代表性的样品用四分法缩减至，粉碎后全部通过目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。试样勿吸潮变质。样品脱脂称取试样于滤纸筒中，用手动索式提取系统按粗脂肪检测方法进行，脱脂后的样品只需在室温风干，去掉石油醚即可。含脂肪小于可不脱脂；含脂肪~ 建议脱脂；含脂肪大于 则应脱脂。胃蛋白酶消化称取已脱脂风干后的试样精确至士 于干燥的带盖磨口瓶中加 新配制的并已预热至 ℃〜 ℃的胃蛋白酶溶液盖紧瓶盖将瓶夹于（）应确保磨口瓶中样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿。（）同时做酶液空白测定（即不加试样，其它步骤一样）

恒温摇床上于°C、 恒定速度搅动 小时进行保温酶解消化。消化残渣的处理从搅动器上取下磨□瓶，呈。角放置，让残渣沉淀以上，随后在铺有滤纸的布氏漏斗上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸，再将磨□瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。()先过上层清液，液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。()过滤过程要小心操作，保证残渣毫无损失。当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入丙酮用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份的内酮进行洗涤照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤纸后用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸用滤纸将残渣包裹好无损地移入烧杯中磨口瓶内的残渣要全部冲洗至滤纸上。

并置于 ℃烘箱内烘干。粗蛋白质的测定将上述已烘干的滤纸包无损地移凯氏烧瓶中，按《定氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》测定残渣粗蛋白质的质量分数（3）。同时，称取脱脂风干的样品（精确至 ），直接按《 定氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（3）。须定残渣粗蛋白质时应从每个样品残渣粗蛋白质中减去酶液的空白值。计算GJ _ ⑪-X= xlOO31试样胃蛋白酶消化率，以质量分数计（）；3 脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（）；3 脱脂酶解后的残渣中粗蛋白质的质量分数（）。重复性：1每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对4 ；每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对偏差应符合：

粗蛋质含量允许相对偏差%<%<%每个试样胃蛋白酶消化率测定结果保留三位有效数字。误差来源及分析误差来源控制方案样品抽样取样要有代表性、真实性。制备样品要有一定数量；充分混匀，用四分法缩分；粉碎至能全部通过目。试齐IJ试剂规格按照标准要求选购一定规格的试剂，控制杂质量。配制方法区分精确配制和粗配制。加热方式胃蛋白酶溶液配制时用水浴加热，防过热。保存按照试剂的保存要求（避光、塑料瓶、阴凉等条件限制）存放。注意试剂的保存期限。称样称样量称样量要适宜，一般根据该样品的含氮量和所适用的滴定管最大体积估算，保证滴定体积不低于滴定管量程的 ，不超过其量程。消化条件于℃恒定速度搅动小时。过滤操作要先过上层清液。要保证残渣毫无损失。

滴定操作严格按照标准滴定操作进行。系统气密性用 硫酸铵蒸馏，根据测得的含氮量评估系统气密性。附录2：盐酸标准溶液的配制与标定参考标准：1盐.酸标准溶液的配制按下表的规定量取盐酸，注入 水中，摇匀。盐酸标准滴定溶液的浓度盐酸的体积2盐.酸标准溶液的标定按下表的规定称取于270-℃3高0温0炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于水中，加滴溴甲酚绿甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时做空白试验。盐酸标准滴定溶液的浓度数值以摩尔每升表示，按式计算：C盐酸标准滴定溶液的浓度数值以摩尔每升表示，按式计算：C(HCl)=mx1000(V1-V2)xM盐酸标准滴定溶液的浓度工作基准试剂无水碳酸钠的质量。计.算无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克盐酸-溶液的体积的数值，单位为毫升空白-试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔注意事项：1灼.烧温度不能超过30度0，当温度超过30度0时无水碳酸钠分解，可将马福炉的温度调至25，0等升温稳定后再调至28，0或者将马福炉