离子色谱法测定燕窝中亚硝酸盐的含量

离子色谱法测定燕窝中亚硝酸盐的含量黄艳梅;孙春蕾【摘要】@@燕窝因其含有人体必需的多种高级蛋白质，一直有着”东方珍品”的美誉.就在燕窝系列产品消费日渐升温之时,燕窝的安全和质量问题也日益突显.基于利益驱动，许多商家通过改变燕窝的形状、颜色，如染色、漂白、沾胶等尽可能将燕窝做得”漂亮”以吸弓消费者.亚硝酸盐与硝酸盐的功能是护色剂和防腐剂，它们不仅使燕窝制品呈现良好的色泽，还可以防止肉毒杆菌等微乍物对燕窝的破坏.但是亚硝酸钠是食品添加剂中急性毒性较强的物质之一.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷)，期】2011(020)002【总页数】3页(P79-81)【作者】黄艳梅;孙春蕾【作者单位】安徽亳州市产品质量监督检验所，亳州,236800;安徽亳州市产品质量监督检验所，亳州,236800【正文语种】中文燕窝因其含有人体必需的多种高级蛋白质，一直有着〃东方珍品”的美誉。就在燕窝系列产品消费日渐升温之时，燕窝的安全和质量问题也日益突显。基于利益驱动，许多商家通过改变燕窝的形状、颜色，如染色、漂白、沾胶等尽可能将燕窝做得“漂亮”以吸弓消费者。亚硝酸盐与硝酸盐的功能是护色剂和防腐剂，它们不仅使燕窝制品呈现良好的色泽，还可以防止肉毒杆菌等微生物对燕窝的破坏。但是亚硝酸钠是食品添加剂中急性毒性较强的物质之一。近两年，笔者在测定白燕、血燕及燕窝制品中的亚硝酸盐时发现大部分燕窝含有亚硝酸盐。按照使用量说明来计算，其中部分产品的含量满足亚硝酸盐在肉类中使用限量的国家标准［1］，但也有的产品大大超标，如有的血燕中以亚硝酸盐计的含量高达3000mg/kg，而国家对熟肉制品中亚硝酸盐残留量不超过30mg/kg。因此加强对燕窝中亚硝酸盐的检验监督十分必要。目前燕窝行业没有相应的国家标准，燕窝中亚硝酸盐的检测也未见报道。GB5009.33-2010［2］规定采用氢氧根体系梯度淋洗，30min完成分析。笔者采用碳酸根体系等度淋洗，利用离子色谱阴离子分析柱对燕窝中亚硝酸盐进行分离测定，以保留时间定性，标准曲线峰面积定量，22min同时完成8种阴离子的测定，取得较好的效果。本法与分光光度法［2］进行比对试验，结果表明两种方法测定结果基本一致。1实验部分1.1主要仪器与试剂离子色谱仪：ICS-900型，配电导检测器（检测池温度为30°C）,并配AS40自动进样器，美国戴安公司；可见分光光度计：7230G型上海精密科学仪器有限公司；电子天平：XP205型感量0.01、0.1mg,瑞士梅特勒-托利多公司；冷冻离心机：Vecocity18RL型，澳大利亚Dynamica公司；超声波清洗器：KQ3200E型，昆山超声仪器有限公司；氟化钠、漠酸钾、氯化钠、亚硝酸钠，漠化钾、硝酸钠、磷酸氢二钠、硫酸钠等：基准试剂，天津光复化工研究所；碳酸钠：基准试剂，天津科密欧化学试剂有限公司；碳酸氢钠：优级纯，天津科密欧化学试剂有限公司；淋洗液:称取23.85g碳酸钠和3.36g碳酸氢钠，用高纯水定容至500mL容量瓶中，混匀，配制成淋洗液浓缩液。临用时，吸取20mL淋洗液浓缩液用高纯水定容至2000mL，混匀，即为4.5mmol/LNa2CO3-0.8mmol/LNaHCO3混合溶液；燕窝：市售；实验用水为高纯水。1.2色谱条件色谱柱：IonPacAS23(4mmx250mm);保护柱：IonPacAG23(4mmx50mm);流动相：4.5mmol/LNa2CO3-0.8mmol/LNaHCO3,流速为1.0mL/min。1.3样品溶液的制备称取试样匀浆2.000g左右，精确至(0.001g),以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min,每隔5min振摇一次，保持固相完全分散。于75°C水浴中放置25min，冷却后用水定容至刻度，混匀，静置。溶液经滤纸过滤后，于10000r/min离心15min,上清液稀释10倍后备用。1.4混合标准溶液系列的配制分别准确称取以下基准试剂，用高纯水溶解并定容至100mL,配成各阴离子浓度为1000mg/L的标准储备溶液，见表1,再将标准储备溶液按表2配制成混合标准溶液。表1标准储备溶液的制备名称称量/g定容体积/mL阴离子浓度/mgL1NaFKBrO3NaClNaNO2KBrNaNO3Na2HPO4・12H2ONa2SO40.2210.1310.1650.1500.1490.1370.3730.1481001000表2混合标准溶液的制备离子种类吸取储备液体积/mL定容体积/mL阴离子浓度/mg・L-1F-BrO-3Cl-NO-2Br-NO-3HPO-4SO2-4410.010.010.010.010.020.010.010040100100100100100200100分别吸取上述混合标准溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.0于100mL容量瓶中，用高纯水定容至刻度，配制成混合标准溶液系列，其中亚硝酸根浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/L。1.5测定方法首先对C18柱活化再生，先用5mL色谱纯甲醇冲洗，再用10mL高纯水冲洗，静置30min后使用。Ag柱和Na柱用10mL高纯水通过，静置活化30min。取混合标准溶液系列和待测样品溶液，分别依次过0.22pm水性滤膜、C18柱、Ag柱和Na柱，弃去前面7mL,收集洗脱液，待测。进样量为100pL。2结果与讨论2.1色谱图按照1.2色谱条件获得的标准样品和燕窝样品的色谱图见图1、图2。1-F-；；3—C1-;;5-Br-;;;图1标准样品色谱图；；图2燕窝样品色谱图2.2线性关系考察分别吸取100mg/L混合标准溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mL于100mL容量瓶中，用高纯水定容至刻度，其中亚硝酸根浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/L。按照上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X),绘制标准曲线，线性回归方程为Y=1.349X-0.0503，相关系数r=0.9991。试验结果表明：亚硝酸根浓度在0~10mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.3稳定性试验取试样溶液，按照1.2色谱条件在0、1、2、3、6、8、12、24、48h测定，测得亚硝酸根含量的相对标准偏差为2.88%，见表3。结果表明样品溶液在配制48h内稳定。表3稳定性试验结果贮存时间/h亚硝酸钠含量/mg-L-1平均值/mg・L-1RSD/%123681224483.17183.18023.19153.21203.23283.20053.16853.13943.18702.882.4精密度试验按照样品测定方法，分别对白燕和血燕样品进行6次平行试验，测得亚硝酸根含量的相对标准偏差为2.22%和3.12%，由此可见方法的精密度良好。试验结果见表4。2.5回收试验称取试样匀浆2.000g左右，精确至0.001g,分别精密加入1000mg/L1.0、2.0、5.0mL亚硝酸根标准储备液，并以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min,每隔5min振摇一次，保持固相完全分散。于75°C水浴中放置25min，冷却后用水定容至刻度，混匀，静置。溶液经滤纸过滤后，以10000r/min离心15min,上清液稀释10倍后备用。按照上述色谱条件进行测定，夕卜标法计算回收率，高、中、低3种浓度的回收试验结果见表5。表4精密度试验结果样品亚硝酸钠含量/mg-L-1平均值/mg・L-1RSD/%白燕3.53453.55273.62213.56823.57483.59653.57483.12血燕3.17183.18023.19153.21203.23283.20053.19812.22表5回收试验结果样品编号样品量/mg-L-1加标量/mg-L-1测得量/mg-L-1回收率/%平均回收率/%RSD/%1234562.66892.69163.80473.84611.57971.57001.01.02.02.05.05.03.59723.63075.84145.90616.38276.312092.8393.91101.8103.096.0694.8497.074.412.6检出限以信噪比3:1计算检出限，亚硝酸根的最小检出浓度为0.2mg/kg。以信噪比10:1计算定量限，亚硝酸根的最小定量浓度为0.6mg/kg。2.7样品测定精密称取混合均匀的燕窝样品6份，按照试验方法测定样品中的亚硝酸根含量，结果列于表6。表6燕窝样品测定结果样品亚硝酸盐含量/mg-L-1样品亚硝酸盐含量/mg-L-1白燕167血燕22650白燕280即食燕窝1未检出白燕31784红枣燕窝2未检出血燕11590即食燕窝3未检出2.8比对试验用离子色谱法和分光光度法对同一样品的亚硝酸盐含量进行测定，分光光度法的测定方法如下：标准溶液(400mg/L)的配制：准确称取0.1000g于110~120°C干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。标准使用液(10mg/L)的配制：临用前吸取标准溶液(400mg/L)5.0mL于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。样品测定：称取2.00g均匀试样置于100mL烧杯中，加12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以701左右约300mL的水将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min,取出冷却，并放置室温。加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30min,上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL,滤液备用。吸取试样滤液2.0mL于50mL带塞比色管中，另吸取0.00、0.1、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、2.5mL亚硝酸钠标准使用液分别置于50mL带塞比色管中(浓度相当于0、0.020、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.50mg/L)。在标准管与试样管中分别加入2mL4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3~5min后各加入1mL2g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min,用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标(Y),以浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，同时做试剂空白。分光光度法的线性方程为Y=0.6612X-0.0245，相关系数r=0.995。比对实验结果列于表7。表7离子色谱法和分光光度法检测结果对比样品离子色谱法测定结果/mg-L-1分光光度计测定结果/mg-L-1相对误差/%白燕1224523946.2血燕1150216378.2血燕2183920018.13结语采