细菌及细菌类疾病的实验室诊断-细菌的分离培养及培养性状的观察（动物微生物技术课件）

动物微生物应用技术普通琼脂培养基的配制2掌握普通琼脂培养基的配制；一、实训目的二、实训器材灭菌锅、培养皿、三角烧瓶、电热锅、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、PH试纸。材料：牛肉膏3g,蛋白胨10g，氯化钠5g,琼脂20g。制备：将上述材料装入1000mL烧杯中，煮沸，使琼脂充分溶化，趁热用2-4层纱布过滤，补充蒸馏水至1000mL，测定PH7.4-7.6。高压灭菌（121℃，,30min）后，于无菌室或超净台内分装（试管每管约1/3高，倾斜冷却；平皿厚度2-3mm，水平静置冷却）。样品的称量：天平的正确使用；称取蛋白胨应迅速。定容方法的准确。注意事项实验操作：每小组称取3.3g营养琼脂装入100mL烧杯中，煮沸，使琼脂充分溶化，趁热用2-4层纱布过滤，补充蒸馏水至100mL。高压灭菌（121℃，,20min）后，于无菌室或超净台内趁热分装（平皿厚度2-3mm，水平静置冷却）。动物微生物应用技术细菌的分离培养-平板划线法8掌握细菌的平板划线分离培养法；一、实训目的二、实训器材无菌操作台、培养皿、培养基、菌种、接种环、酒精灯、酒精、棉球。接种针和接种环：由三部分组组成，即环（针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌，接种环用于固体、液体培养基的细菌接种。接种工具VS-1300-U型洁净工作台接种环境灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境接种的基本程序方法：细菌分离培养一般采取“划线法”，主要有分区划线、十字交叉划线等方法，具体方法可按照个人习惯选择应用，目的是达到使被检材料适当的稀释，以达到获得独立单在的菌落，防止形成菌苔，以致不宜鉴别其菌落性状。分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环点燃酒精灯。左手持平皿，上盖下底，用左手的拇指、食指和中指将平皿盖揭开呈20°左右的角度（角度不能过大，以防空气污染）。操作：右手持接种环，从混合培养物中沾取少许混合物涂布在培养基边缘，然后将接种环多余的混合物在火焰中烧灼，待冷却后，再与所涂混合物的地方轻触，在空白区做“Z”形划线，后再烧灼，冷却后再在空白区划线，反复操作，直至混合物稀释到足够形成单菌落。盖好平皿，倒置于恒温培养箱中培养24-48h。操作：动物微生物应用技术细菌培养性状的观察细菌群体形态－菌落菌落又称克隆：指单个细菌在适合生长的固体培养基表面或内部，在适宜的条件下经培养后，生长繁殖出巨大数量的菌体，形成一个肉眼可见的有一定形态的独立的群。菌苔：若长出的菌落联成一片则形成菌苔。因此在细菌培养中常将细菌在培养基表面划线接种以获得单个菌落。大小、颜色、透明度、边缘整齐、光滑、粗糙、湿润、干燥、凸起、扁平、针尖状、露珠状等等。细菌群体形态－菌落菌落描述大小：不同细菌，其菌落大小变化很大。常用其直径来表示，单位是mm或μm。细菌群体形态－菌落形状：主要有圆形、露滴状、乳头状或油煎蛋状、云雾状、放射状或蛛网状、同心圆状、扁平和针尖状等。细菌群体形态－菌落边缘特征：有整齐、波浪状、锯齿状、卷发状等。性状：有光滑、粗糙、皱褶、颗粒同状、心圆状、放射状等。湿润度：有干燥和湿润两种。细菌群体形态－菌落隆起度：有隆起、轻度隆起、中央隆起和云雾状等。色泽和透明度：色泽有白、乳白、黄、橙、红及无色等；透明度有透明、半透明、不透明等。细菌群体形态－菌落质地：有坚硬、柔软和粘稠等。溶血性：分为α－溶血、β－溶血和γ－溶血三种。细菌群体形态－菌落菌落形态炭疽菌落炭疽菌落土霉菌菌落葡萄球菌菌落大肠杆菌菌落大肠杆菌菌落分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开。菌落：单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌群落。菌苔：多个菌落连成一片。固体培养基中生长细菌在培养基上的生长特性观察大小：不同细菌，其菌落大小变化很大。常用其直径来表示，单位是mm或μm。形状：主要有圆形、露滴状、乳头状或油煎蛋状、云雾状、放射状或蛛网状、同心圆状、扁平和针尖状等。边缘特征：有整齐、波浪状、锯齿状、卷发状等。表面性状：有光滑、粗糙、皱褶、颗粒状、同心圆状、放射状等