第二章核酸化学

第二章核酸化学第1页，课件共106页，创作于2023年2月核酸的概念和重要性核酸的组成成分DNA的结构DNA和基因组RNA的结构和功能核酸的性质核酸的序列测定第2页，课件共106页，创作于2023年2月第一节核酸的概念和重要性第3页，课件共106页，创作于2023年2月

1868年，瑞士的内科医生FriedrichMiescher从外科医院包扎伤口的绷带上的脓细胞核中提取到一种富含磷元素的酸性化合物，将其称为核素(nuclein)；后来他又从鲑鱼精子中分离出类似的物质，并指出它是由一种碱性蛋白质与一种酸性物质组成的，此酸性物质即是现在所知的核酸(nucleicacid)。第4页，课件共106页，创作于2023年2月第5页，课件共106页，创作于2023年2月

1944年,OswaldAvery,ColinMacleod和MaclynMcCarty发现，一种有夹膜、表面光滑、具致病性的肺炎球菌中提取的核酸DNA(deoxyribonucleicacid,脱氧核糖核酸)，可使另一种无夹膜，表面粗糙、不具致病性的肺炎球菌的遗传性状发生改变，转变为有夹膜，具有致病性的肺炎球菌，且转化率与DNA纯度呈正相关，若将DNA预先用DNA酶降解，转化就不发生。该项实验彻底纠正了蛋白质携带遗传信息这一错误认识，确立了核酸是遗传物质的重要地位；第6页，课件共106页，创作于2023年2月第7页，课件共106页，创作于2023年2月

DNA遗传作用的进一步肯定来自AlfredHershey和MarthaChase对一个感染大肠杆菌的病毒的研究。即用放谢性同位素32P标记噬菌体DNA，35S标记其蛋白质外壳，再用标记的噬菌体去感染培养的大肠杆菌，结果发现进入细菌体内，使细菌生长、繁殖发生变化的是32P标记的DNA，而不是35S标记的蛋白质，并且新繁殖生成的噬菌体不含35S，只含32P。第8页，课件共106页，创作于2023年2月第9页，课件共106页，创作于2023年2月第10页，课件共106页，创作于2023年2月核酸分为两大类.脱氧核糖核酸（DNA）DeoxyribonucleicAcid核糖核酸（RNA）RibonucleicAcid核酸的分类第11页，课件共106页，创作于2023年2月脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid,DNA）：遗传信息的贮存和携带者，生物的主要遗传物质。在真核细胞中，DNA主要集中在细胞核内，线粒体和叶绿体中均有各自的DNA。原核细胞没有明显的细胞核结构，DNA存在于称为类核的结构区。每个原核细胞只有一个染色体，每个染色体含一个双链环状DNA。核糖核酸（ribonucleicacid,RNA）：主要参与遗传信息的传递和表达过程，细胞内的RNA主要存在于细胞质中，少量存在于细胞核中，病毒中RNA本身就是遗传信息的储存者。另外在植物中还发现了一类比病毒还小得多的侵染性致病因子称为类病毒，它是不含蛋白质的游离的RNA分子，还发现有些RNA具生物催化作用（ribozyme）。第12页，课件共106页，创作于2023年2月第13页，课件共106页，创作于2023年2月分布含量

DNA含量恒定，RNA含量与细胞生长状态有关。第14页，课件共106页，创作于2023年2月第二节、核酸的组成成分核酸nucleicacid核苷酸nucleotide核苷nucleoside磷酸phosphate嘌呤碱purinebase

或嘧啶碱pyrimidinebase（碱基base）核糖ribose

或脱氧核糖deoxyribose

（戊糖amylsugar）第15页，课件共106页，创作于2023年2月（一）核糖和脱氧核糖OHOH2COHOHOH12OHOH2COHOH12β-D-2-核糖β-D-2-脱氧核糖O核糖+H+糠醛甲基间苯二酚FeCl3绿色产物Δ脱氧核糖+H+

Δω-羟基-γ-酮戊醛二苯胺蓝色产物RNA和DNA定性、定量测定第16页，课件共106页，创作于2023年2月（二）嘌呤碱和嘧啶碱NNNNHHHHNNNNHHHH123456789嘌呤NH2腺嘌呤adenine（A）NNNNHHHHOH2N鸟嘌呤guanine（G）第17页，课件共106页，创作于2023年2月NNHHHH嘧啶123456NNHHHHNH2OH胞嘧啶Cytosine（C）NNHHHHOOHH尿嘧啶uracil（U）NNHHHHOOHHCH3胸腺嘧啶thymine（T）第18页，课件共106页，创作于2023年2月NNOOHHH酮式HNNOOHHH酮式HHH烯醇式第19页，课件共106页，创作于2023年2月（三）核苷OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHH9腺嘌呤腺苷NH2糖与碱基之间的C-N键，称为C-N糖苷键第20页，课件共106页，创作于2023年2月OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖OHOH2COHOH1′2′3′4′5′核糖NNOOHHH尿嘧啶H1尿苷NCOONHHH51OH假尿苷（ψ）第21页，课件共106页，创作于2023年2月（四）核苷酸OO（N=A、G、C、U、T）HH(O)H1´2´NOHCH2HH5´4´3´PO-OOO-核糖磷酸碱基第22页，课件共106页，创作于2023年2月核苷酸是核苷的磷酸酯。作为DNA或RNA结构单元的核苷酸分别是5′-磷酸-脱氧核糖核苷和5′-磷酸-核糖核苷。第23页，课件共106页，创作于2023年2月OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHHH9腺嘌呤胸苷PO--O—O‖胸苷-5′-磷酸AMPOPO--O—O‖~ADPATPP

O--O—O‖~ATP(腺嘌呤核糖核苷三磷酸)第24页，课件共106页，创作于2023年2月ATP的性质ATP分子的最显著特点是含有两个高能磷酸键。ATP水解时,可以释放出大量自由能。ATP是生物体内最重要的能量转换中间体。ATP水解释放出来的能量用于推动生物体内各种需能的生化反应。ATP也是一种很好的磷酰化剂。磷酰化反应的底物可以是普通的有机分子，也可以是酶。磷酰化的底物分子具有较高的能量（活化分子），是许多生物化学反应的激活步骤。第25页，课件共106页，创作于2023年2月各种核苷三磷酸和脱氧核苷三磷酸是体内合成RNA和DNA合成的直接原料。在体内能量代谢中的作用：ATP——能量“货币”UTP——参加糖的互相转化与合成CTP——参加磷脂的合成GTP——参加蛋白质和嘌呤的合成第26页，课件共106页，创作于2023年2月cAMP(3’,5’-环腺嘌呤核苷一磷酸)和cGMP(3’,5’-环鸟嘌呤核苷一磷酸)的主要功能是作为细胞之间传递信息的信使。第二信使——cAMP第27页，课件共106页，创作于2023年2月（五）核苷酸的连接方式核酸的一级结构多聚核苷酸是由四种不同的核苷酸单元按特定的顺序组合而成的线性结构聚合物，因此，它具有一定的核苷酸顺序，即碱基顺序。核酸的碱基顺序是核酸的一级结构。第28页，课件共106页，创作于2023年2月OHO-OO—CH2TO=P—O-3′5′OHOHO-OO—CH2GO=P—O-3′5′OHOO—CH2OHOHAO=P—OO-3′5′核苷酸之间的共价键3

-5

磷酸二酯键第29页，课件共106页，创作于2023年2月在多聚核苷酸中，两个核苷酸之间形成的磷酸二酯键通常称为5′—3′磷酸二酯键。多聚核苷酸链一端的C5′带有一个自由磷酸基，称为5′-磷酸端（常用5’-P表示）；另一端C3’带有自由的羟基，称为3′-羟基端（常用3’-OH表示）。多聚核苷酸链具有方向性，当表示一个多聚核苷酸链时，必须注明它的方向是5′→3′或是3′→5′。第30页，课件共106页，创作于2023年2月5´3´结构式5´3´

p

p

p

pOH3´ACTG1´线条式5´

ACTGCATAGCTCGA3´字母式核酸一级结构的表示法第31页，课件共106页，创作于2023年2月碱基（嘧啶、嘌呤）核糖/脱氧核糖

核苷酸3´-5´磷酸二酯键核酸糖苷键核苷＋磷酸5´磷酯键RNA：AMP、GMP、CMP、UMPDNA：dAMP、dGMP、dCMP、dTMP第32页，课件共106页，创作于2023年2月一、DNA一级结构

二、DNA的二级结构三、DNA的三级结构

第三节DNA的结构第33页，课件共106页，创作于2023年2月定义：

DNA分子中各脱氧核苷酸之间的连接方式（3´-5´磷酸二酯键）和排列顺序叫做DNA的一级结构，简称为碱基序列。一级结构的走向的规定为5´→3´。不同的DNA分子具有不同的核苷酸排列顺序，因此携带有不同的遗传信息。一级结构的表示法：结构式，线条式，字母式一、DNA的一级结构第34页，课件共106页，创作于2023年2月5´3´结构式5´3´

p

p

p

pOH3´ACTG1´线条式5´

ACTGCATAGCTCGA3´字母式DNA一级结构的表示法第35页，课件共106页，创作于2023年2月1DNA的双螺旋结构(Watson-Crick模型)2双螺旋结构模型的主要依据3DNA双螺旋结构特征及意义4DNA双螺旋的多态性二、DNA的二级结构第36页，课件共106页，创作于2023年2月1DNA的双螺旋结构(Watson-Crick模型)第37页，课件共106页，创作于2023年2月

2双螺旋结构模型的主要依据

（1）Wilkins和Franklin发现不同来源的DNA纤维具有相似的X射线衍射图谱。第38页，课件共106页，创作于2023年2月1950年，Chargaff首先注意到DNA碱基组成的某些规律性，在总结出DNA碱基组成的规律：A、腺嘌呤和胸腺嘧啶的摩尔数相等，即A=T。B、鸟嘌呤和胞嘧啶的摩尔数也相等，即G=C。C、嘌呤的总数等于嘧啶的总数，即A+G=C+T。2、DNA碱基组成的Chargaff规则第39页，课件共106页，创作于2023年2月（3）电位滴定行为证明嘌呤与嘧啶的可解离基团由氢键连接。

Pauling和Corey发现A与T生成2个氢键、C与G生成3个氢键第40页，课件共106页，创作于2023年2月3、DNA的双螺旋模型特点A、两条反向平行的多聚核苷酸链沿一个假设的中心轴右旋相互盘绕而形成（右手螺旋），螺旋表面有一条大沟和一条小沟。5´3´第41页，课件共106页，创作于2023年2月B、磷酸和脱氧核糖单位作为不变的骨架组成位于外侧，作为可变成分的碱基位于内侧，链间碱基按A–T（两个氢键），G-C配对（三个氢键）。第42页，课件共106页，创作于2023年2月C、螺旋直径2nm，相邻碱基平面垂直距离0.34nm，螺旋结构每隔10个碱基对（basepair,bp）重复一次，间隔为3.4nm3.4Å34Å第43页，课件共106页，创作于2023年2月第44页，课件共106页，创作于2023年2月1、氢键2、碱基堆集力3、磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和4、碱基处于疏水环境中稳定DNA双螺旋结构的因素第45页，课件共106页，创作于2023年2月DNA双螺旋结构模型揭示了DNA作为遗传物质的稳定性特征，确认了碱基配对原则，这是DNA复制、转录和反转录的分子基础，亦是遗传信息传递和表达的分子基础。该模型的提出，是本世纪生命科学的重大突破之一，它奠定了生物化学和分子生物学乃至整个生命科学飞速发展的基石。3、DNA的双螺旋结构的意义第46页，课件共106页，创作于2023年2月4,DNA双螺旋的不同构象第47页，课件共106页，创作于2023年2月第48页，课件共106页，创作于2023年2月第49页，课件共106页，创作于2023年2月ABZ外型粗短适中细长螺旋方向右手右手左手螺旋直径2.55nm2.37nm1.84nm碱基直升0.23nm0.34nm0.38nm每圈碱基数111012碱基倾角19000

90大沟很窄很深很宽较深平坦小沟很宽、浅窄、深较窄很深Z-DNAA-DNAB-DNA三种DNA双螺旋构象比较第50页，课件共106页，创作于2023年2月三、DNA的三级结构1、什么是DNA的三级结构？（定义）2、超螺旋DNA（SupercoiledDNA）第51页，课件共106页，创作于2023年2月DNA的三级结构，是指双螺旋DNA分子通过扭曲和折叠所形成的特定构象，包括不同二级结构单元间的相互作用、单链和二级结构单元间的相互作用以及DNA的拓扑特征。DNA三级结构的定义Back第52页，课件共106页，创作于2023年2月超螺旋螺旋超螺旋第53页，课件共106页，创作于2023年2月L=25,T=25,W=0松弛环形1152010523L=23,T=23,W=0解链环形15101520231510152025L=23,T=25,W=–2负超螺旋121482316131510152023右手旋转拧松两匝后的线形DNADNA超螺旋的形成第54页，课件共106页，创作于2023年2月L为连环数（linkingnumber）：DNA双螺旋中一条链以右手螺旋与另一条链缠绕的次数。T指DNA分子中的螺旋数（twistingnumber）W为超螺旋数或缠绕数（writhingnumber）超螺旋的拓扑学公式：L=T+W超螺旋状态的定量描述第55页，课件共106页，创作于2023年2月DNA超螺旋结构形成的意义使DNA形成高度致密状态从而得以装入核中；推动DNA结构的转化以满足功能上的需要。如负超螺旋分子所受张力会引起互补链分开导致局部变性，利于复制和转录。Back第56页，课件共106页，创作于2023年2月染色体包装的结构模型多级螺旋模型压缩倍数76405（8400）

DNA→核小体→螺线管→超螺线管→染色单体2nm10nm30(10)nm400nm2~10μm

一级包装二级包装三级包装四级包装

第57页，课件共106页，创作于2023年2月第58页，课件共106页，创作于2023年2月四、DNA与基因组织DNATranscription

RNA（mRNA、tRNA、rRNA）TranslationProtein基因基因是DNA片段的核苷酸序列，DNA分子中最小的功能单位。结构基因调节基因基因组（一）DNA与基因第59页，课件共106页，创作于2023年2月（二）原核生物基因组的特点1.DNA大部分为结构基因，每个基因出现频率低。2.功能相关基因串联在一起，并转录在同一mRNA中（多顺反子）。3.有基因重叠现象。ABCDEFG第60页，课件共106页，创作于2023年2月（三）真核生物基因组的特点1.重复序列单拷贝序列：在整个DNA中只出现一次或少数几次，主要为编码蛋白质的结构基因。中度重复序列：在DNA中可重复几十次到几千次。高度重复序列：可重复几百万次高度重复序列一般富含A-T或G-C，富含A-T的在密度梯度离心时在离心管中形成的区带比主体DNA更靠近管口；富含G-C的更靠近管底，称为卫星DNA（satelliteDNA）富含A-T富含G-C主体DNA第61页，课件共106页，创作于2023年2月2.有断裂基因mRNA1872bp内含子（intron)：基因中不为多肽编码，不在mRNA中出现。ABCDEG7700bpF外显子（exons）：为多肽编码的基因片段。：由于基因中内含子的存在。例外：组蛋白基因(histongene)和干扰素基因(interferongene)没有内含子。transcription第62页，课件共106页，创作于2023年2月一、RNA一级结构和类别二、tRNA的分子结构三、rRNA的分子结构四、mRNA的分子结构第五节RNA的分子结构Back第63页，课件共106页，创作于2023年2月

RNA分子中各核苷之间的连接方式（3´-5´磷酸二酯键）和排列顺序叫做RNA的一级结构OHOHOH5´3´

RNA与DNA的差异

DNARNA糖脱氧核糖核糖碱基AGCTAGCU

不含稀有碱基含稀有碱基RNA的一级结构Back第64页，课件共106页，创作于2023年2月1、信使RNA

（messengerRNA，mRNA）：在蛋白质合成中起模板作用；2、核糖体RNA

（ribosomalRNA，rRNA）：与蛋白质结合构成核糖体（ribosome）,核糖体是蛋白质合成的场所；3、转移RNA

（transferRNA，tRNA）：在蛋白质合成时起着携带活化氨基酸的作用。RNA的类别Back第65页，课件共106页，创作于2023年2月二级结构特征：单链三叶草叶形四臂四环一、tRNA的结构三级结构特征：在二级结构基础上进一步折叠扭曲形成倒L型Back第66页，课件共106页，创作于2023年2月D环IGC反密码子反密码环氨基酸臂可变环TψC环CCAAla3´5´酵母tRNAAla的二级结构Back第67页，课件共106页，创作于2023年2月tRNA的三级结构Back第68页，课件共106页，创作于2023年2月二、rRNA占细胞RNA总量的80%，rRNA（60%）与蛋白质（40%）共同组成核糖体。原核生物

真核生物核糖体rRNA核糖体rRNA70S（30S、50S）16S、5S、23S80S（40S、60S）18S、5S、5.8S、28S

第69页，课件共106页，创作于2023年2月特征：单链，螺旋化程度较tRNA低与蛋白质组成核糖体后方能发挥其功能5sRNA的二级结构

rRNA的分子结构Back第70页，课件共106页，创作于2023年2月三、mRNA与hnRNAmRNA约占细胞RNA总量的3－5%，是蛋白质合成的模板。真核生物mRNA的前体在核内合成，包括整个基因的内含子和外显子的转录产物，形成分子大小极不均匀的hnRNA。第71页，课件共106页，创作于2023年2月原核生物mRNA：

先导区-翻译区（多顺反子）-末端序列真核生物mRNA：

“帽子”-单顺反子-“尾巴”三、mRNA的分子结构（m7G-5´ppp5´-N-3´p）（PolyA）Back第72页，课件共106页，创作于2023年2月5´3´顺反子顺反子顺反子插入顺序插入顺序先导区末端顺序原核细胞mRNA的结构特点Back第73页，课件共106页，创作于2023年2月AAAAAAA-OH5´

“帽子”PolyA3´

顺反子m7G-5´ppp-N-3´p真核细胞mRNA的结构特点Back第74页，课件共106页，创作于2023年2月四、snRNA和asRNAsnRNA主要存于细胞核中，占细胞RNA总量的0.1－1%，与蛋白质以RNP（核糖核酸蛋白）的形式存在，在hnRNA和rRNA的加工、细胞分裂和分化、协助细胞内物质运输、构成染色质等方面有重要作用。asRNA可通过互补序列与特定的mRNA结合，抑制mRNA的翻译，还可抑制DNA的复制和转录。第75页，课件共106页，创作于2023年2月五、RNA的其它功能1981年，Cech发现RNA的催化活性，提出核酶（ribozyme）。大部分核酶参加RNA的加工和成熟，也有催化C-N键的合成。23SrRNA具肽酰转移酶活性。RNA在DNA复制、转录、翻译中均有一定的调控作用，与某些物质的运输与定位有关。第76页，课件共106页，创作于2023年2月六、核酸的性质（一）一般理化性质1.为两性电解质，通常表现为酸性。2.DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末，不溶于有机溶剂。3.DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多。4.RNA能在室温条件下被稀碱水解而DNA对碱稳定。5.利用核糖和脱氧核糖不同的显色反应鉴定DNA与RNA。第77页，课件共106页，创作于2023年2月核酸的两性性质与蛋白质相似，核酸分子中既含有酸性基团（磷酸基）也含有碱性基团（氨基），因而核酸也具有两性性质。由于核酸分子中的磷酸是一个中等强度的酸，而碱性（氨基）是一个弱碱，所以核酸的等电点比较低。如DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。RNA的等电点比DNA低的原因，是RNA分子中核糖基2′-OH通过氢键促进了磷酸基上质子的解离。DNA没有这种作用。第78页，课件共106页，创作于2023年2月pK1=0.9第一磷酸基pK3=6.2第二磷酸基pK2=3.7含氮环腺嘌呤核苷酸pK1=0.7第一磷酸基pK3=6.1第二磷酸基pK2=3.7含氮环烯醇式羟基鸟嘌呤核苷酸pK1=0.8第一磷酸基pK3=6.3第二磷酸基pK2=4.3含氮环胞嘧啶核苷酸pK1=1.0第一磷酸基pK3=6.4第二磷酸基烯醇式羟基尿嘧啶核苷酸pH离子化程度小牛胸腺DNA的滴定曲线pH核苷酸的解离曲线Back第79页，课件共106页，创作于2023年2月核酸的水解酸或碱水解

核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断。DNA和RNA对酸或碱的耐受程度有很大差别。例如，在0.1mol/LNaOH溶液中，RNA几乎可以完全水解，生成2′-或3′-磷酸核苷；DNA在同样条件下则不受影响。这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的邻基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。Back第80页，课件共106页，创作于2023年2月核糖+H+糠醛甲基间苯二酚FeCl3绿色产物Δ脱氧核糖+H+

Δω-羟基-γ-酮戊醛二苯胺蓝色产物RNA和DNA定性、定量测定第81页，课件共106页，创作于2023年2月（二）核酸的紫外吸收性质核酸的碱基具有共扼双键，因而有紫外吸收性质，吸收峰在260nm（蛋白质的紫外吸收峰在280nm）。2202402602800.10.20.30.4波长（nm）光吸收123123天然DNA变性DNA核苷酸总吸收值第82页，课件共106页，创作于2023年2月核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少30~40%，当核酸变性或降解时光吸收值显著增加（增色效应），但核酸复性后，光吸收值又回复到原有水平（减色效应）。变性DNA天然双链DNA-ATGCCGGAATTCCGATTGCA--TACGGCCTTAAGGCTAACGT--ATGCCGGAATTCCGATTGCA--TACGGCCTTAAGGCTAACGT-降解产物An，Tn，Gn，Cn增色效应和减色效应Back第83页，课件共106页，创作于2023年2月核酸的定量分析及纯度鉴定（粗略）1、定量分析：1OD260nm2、纯度初步鉴定：A260nm／A280nm50mg/ml双链DNA20mg/ml单链寡核苷酸40mg/ml单链DNA或RNA=2.0=1.8<1.8RNA纯品DNA纯品？？？蛋白质或酚污染核酸紫外吸收性质的应用第84页，课件共106页，创作于2023年2月（三）核酸结构的稳定性1.碱基对间的氢键；2.碱基堆积力；3.环境中的正离子。第85页，课件共106页，创作于2023年2月（四）核酸的的变性1、变性的概念双螺旋区氢键断裂，空间结构破坏，形成单链无规线团状，只涉及次级键的破坏。增色效应粘度下降、浮力密度增高生物学功能部分或全部丧失核酸降解：磷酸二酯键断裂第86页，课件共106页，创作于2023年2月DNA变性是个突变过程，类似结晶的熔解。将紫外吸收的增加量达到最大增量一半时的温度称熔解温度（Tm）TmTm2、热变性与Tm第87页，课件共106页，创作于2023年2月影响Tm的因素：（1）G-C的相对含量

（G+C）%=（Tm—69.3）×2.44（2）介质离子强度低，Tm低。（3）高pH下碱基广泛去质子而丧失形成氢键的能力。（4）变性剂如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键，妨碍碱基堆积，使Tm下降。第88页，课件共106页，创作于2023年2月变性（加热）复性（缓慢冷却）复性：在一定条件下，变性DNA单链间碱基重新配对恢复双螺旋结构，伴有A260减小（减色效应），DNA的功能恢复。（五）核酸的复性第89页，课件共106页，创作于2023年2月

变性核酸的互补链在适当条件下重新缔合成双螺旋的过程。（Annealing，退火）？？？影响复性速度的因素：（1）单链片段浓度（2）单链片段的大小（3）片段内重复序列的多少（4）溶液离子强度的大小（5）溶液温度变化（Tm－25）热变性：上火影响核酸复性的因素第90页，课件共106页，创作于2023年2月5’3’5’3’聚合酶链式反应（PCR）DNAPolymeraseChainReaction5’5’3’3’5’3’5’3’变性、退火、延伸（30个循环）加热变性加入引物后降温退火在DNA聚合酶作用下延伸扩增百万倍第91页，课件共106页，创作于2023年2月不同来源的DNA单链间或单链DNA与RNA之间只要有碱基配对的区域，在复性时可形成局部双螺旋区，称核酸分子杂交（hybridization）（六）分子杂交第92页，课件共106页，创作于2023年2月制备总RNA/DNA样品琼脂糖凝胶电泳印迹转移至薄膜与同位素标记的特异性探针杂交放射性自显影对照组空白组实验组Northern/SouthernBlot基本流程图第93页，课件共106页，创作于2023年2月限制性酶切割转移至硝酸纤维素膜上与放射性标记DNA探针杂交放射自显影带有DNA片段的凝胶吸附有DNA片段的膜DNA分子SouthernBlot图解琼脂糖电泳DNA片段X-光片第94页，课件共106页，创作于2023年2月NorthernDNA阵列被固定物被标记物探针probemRNAmRNA???探针probeDNA微阵列（DNAMicroArray）cDNA第95页，课件共106页，创作于2023年2月七、核酸的序列测定目前多采用Sanger的酶法和Gilbert的化学法OHOH2CHHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHHH9腺嘌呤ddATPPPP第96页，课件共106页，创作于2023年2月DNA序列分析原理CCGTACGTAA5’3’DNA单链模板CTACTAGG5’＊寡核苷酸引物GT3’试管1ddATP1/10用量DNA聚合酶dATPdGTPdTTPdCTPdNTPs混合物dA--GGCdA问题？--GGCACTAdATGT------?续图第97页，课件共106页，创作于2023年2月3’--CCGTGATACA--5’模板测序引物5’--GGddATP管ddCTP管ddGTP管ddTTP管GGCGGCAGGCACGGCACTGGCACTAGGCACTATGGCACTATGGGCACTATGT读取序列CACTATGTAGTGATAC模板序列5’端5’端3’端3’端3’--CCGTGATACA--5’模板DNA序列分析原理图（续）Back第98页，课件共106页，创作于2023年2月——CCGGTAGCAATT——3′5′模板引物——GG—5′3′GGCGGCCGGCCATCCddCTPGGCCAGGCCATCGTTGAddATPAGGCCATCGGGCCATCGTTGGddGTPGGCCATGGCCATCGTGGCCATCGTTTddTTPCCATCGTTGA5′3′