免疫球蛋白课件

医学免疫学医学免疫学1第四章免疫球蛋白

(Immunoglobulin)第四章免疫球蛋白

(Immunoglobulin)2概述免疫球蛋白的结构免疫球蛋白的异质性免疫球蛋白的功能五类免疫球蛋白的特性和功能抗体的人工制备免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)概述免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)3目的要求（一）掌握抗体和免疫球蛋白的概念；免疫球蛋白的结构；免疫球蛋白的功能；各类免疫球蛋白的特性与功能。（二）熟悉免疫球蛋白的水解片段；多克隆抗体和单克隆抗体的概念。（三）了解免疫球蛋白的异质性及抗体的制备方法。目的要求4EmilvonBehring,1901,antitoxinsGeoregesKohlerandCesarMilstein,1984,monoclonalantibodySusumuTonegama,1987,structureofIggeneGeraldEdelmanandRodneyPorter,1972,structureofantibodyPaulEhrlich,1908,productionofantibodyNobelPrizewinnersEmilvonBehring,1901,antito5与抗体有关的诺贝尔奖获得者1901vonBering血清治疗1908Ehrlich&Metchnikoff抗体生成、吞噬1972Edelman&Poter抗体分子结构1977Yalow放射免疫测定1984Koler,Milstein&Jerne单克隆抗体1987TonegawaIg基因结构与抗体有关的诺贝尔奖获得者1901vonBering血清治6正常人血清电泳分离图Antigen概述

+-

2白蛋白（Albumin）球蛋白（globulin）

1IgGIgAIgMIgD正常人血清电泳分离图Antigen概述+-2白蛋白（7二、外源因素所致的异质性——Ig的多样性该区的Aa组成和排列在同一动物种属中比较恒定。Spleencells不能在组织培养液中长期生长，它们一般在5-7天内也会死亡。▲KLH(keyholelimpethemocyanin)半衰期长，约20～23天，再次免疫主要抗体免疫球蛋白V区和C区结构示意图免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)免疫球蛋白重链和轻链折叠形成的环形功能区为结构域，只有Myleomacells和Spleencells相互融合的Hybridomacells由于具有两种亲代细胞的染色体（基因组），故在HAT生存下来的是Hybridomacells。▲蛋白质(MW>10000)免疫球蛋白重链和轻链折叠形成的环形功能区为结构域，免疫球蛋白V区和C区结构示意图Igl链的氨基酸序列▲多肽(﹥15aminoacids)★佐剂（Adjuvant）该区的Aa的组成和排列顺序有较大变异，这种变异决定了抗原与抗体结合的特异性。第五节人工制备抗体（一）类（class）分别为CDR1、CDR2和CDR3五类免疫球蛋白的特性和功能

抗体(antibody，Ab):

是B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的主要存在于血清等体液中的具有免疫功能的糖蛋白。基本概念:

免疫球蛋白(Ig)：具有抗体活性或化学

结构与抗体相似的球蛋白。生物学和功能上的定义

结构和化学上的定义所有抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不都是抗体!二、外源因素所致的异质性——Ig的多样性抗8概述免疫球蛋白按存在形式分为分泌型(SecretedIg,SIg)：分泌入体液中，介导体液免疫应答。膜型(MembraneIg,MIg)：构成B细胞膜上的抗原受体概述免疫球蛋白按存在形式分为分泌型(SecretedIg9第一节免疫球蛋白的结构

第一节免疫球蛋白的结构 10一、基本结构——四肽链结构

免疫球蛋白分子的基本结构是一“Y”字型的四肽链结构，由两条完全相同的重链(heavychain,H)和两条完全相同的轻链(lightchain,L)以二硫键连接而成。每条重链和轻链分为氨基端和羧基端。一、基本结构——四肽链结构免疫球蛋白分子的基本11Afour-chainunitofIgAfour-chainunitofIg12（一）重链和轻链1.重链（heavychain,H）：分子量50~75kD，450~550个Aa.

据H链C区氨基酸的不同将Ig分为五类，即

IgM，IgD，IgE，IgA，IgG

μ

δ

ε

α

γ

同一类免疫球蛋白又可以分亚类：如IgG1-G4、IgA1-A22.轻链（lightchain,L

）：分子量25kD，214个Aa.

轻链分为κ和λ链两种，据此可将Ig分为κ和λ两型(type)。根据λ链恒定区个别氨基酸残基的差异，又可将λ分为λ1、λ2、λ3和λ4四个亚型。（一）重链和轻链1.重链（heavychain,H）：13（二）可变区和恒定区1.可变区（variableregion,V

）：

110个Aa，位于Ig的N端，占轻链的1/2和重链的1/4或1/5。该区的Aa的组成和排列顺序有较大变异，这种变异决定了抗原与抗体结合的特异性。2.恒定区（constantregion,C）：位于Ig分子的C端，占轻链的1/2和重链的3/4或4/5。该区的Aa组成和排列在同一动物种属中比较恒定。3.高变区（hypervariableregion,HVR）：重链和轻链V区（分别称为VH和VL）各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变的区域。即Ab与Ag特异性结合的位置。又称互补决定区（complementaritydeterminingregion,CDR）。分别为CDR1、CDR2和CDR34.骨架区（frameworkregion,FR）：

CDR以外区域的氨基酸组成和排列顺序相对不易变化的区域。（二）可变区和恒定区1.可变区（variableregi14

0102030405060708090100110120130140150160170180190200210220

5040

302010

0CDR1CDR2CDR3

抗体分子的多样性Igl链的氨基酸序列酸残基的变异率相应位置上氨基对来自不同B细胞克隆的Ig轻链氨基酸序列进行比较，发现V区的变化主要集中在3个分别由6－10个氨基酸残基组成的狭小区域内。这3个区又被称作高可变区或互补决定区（CDR），参与抗原结合部位的组成。01020304015免疫球蛋白V区和C区结构示意图

免疫球蛋白重链和轻链折叠形成的环形功能区为结构域，CDR为互补决定区，FR为骨架区免疫球蛋白V区和C区结构示意图免疫球蛋白重16免疫球蛋白课件17（三）铰链区（hingeregion）

位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。绞链区能改变两个Y形臂之间的距离，有利于两臂同时结合两个不同的抗原表位。IgD、IgG、IgA有绞链区，IgM和IgE则无。（三）铰链区（hingeregion）位于18（一）类（class）（2）抗原受体；Ig分子超家族的成员多数为细胞膜表面分子。主要的抗感染抗体（激活补体、调理、ADCC）各类免疫球蛋白的特性与功能。免疫球蛋白超家族这3个区又被称作高可变区或互补决定区（CDR），参与抗原结合部位的组成。不同抗原表位诱导的同一类型的Ig(如IgG)，其识别抗原的特异性不同。价廉，低技术，能得到高特异性和高效价的抗血清。免疫球蛋白超家族HATselectionsystem四个亚类:IgG1IgG2IgG3IgG4小、易掌握、经济，如果抗体需求量小，小鼠是最佳选择。（一）木瓜蛋白酶水解片段（图）粘膜局部浆细胞合成；半衰期长，约20～23天，再次免疫主要抗体多克隆抗体和单克隆抗体的概念。IgA、IgE和IgG4的聚合物可活化补体的旁路途径。IgA、IgE和IgG4的聚合物可活化补体的旁路途径。免疫球蛋白分子的基本结构是一“Y”字型的四肽链CDR为互补决定区，FR为骨架区（四）结构域（功能区，domain）轻链:VL，CL重链:VH，CH1，CH2，CH3(IgG、IgA

和

IgD)，CH4(IgM和IgE)1.分类（一）类（class）（四）结构域（功能区，domain）轻19（四）结构域（功能区，domain）2.Ig的二级结构——“三明治”状的“β桶状”结构

具有免疫球蛋白折叠结构的分子统称为免疫球蛋白超家族（immunoglobulinsuperfamily,IgSF）（四）结构域（功能区，domain）2.Ig的二级结构——“20“Ig-likeDomain(Ig样结构域)”“Ig-likeDomain(Ig样结构域)”21IgSuperfamily-S-S-CL-S-S-CL-S-S--S-S-CL-S-S-CL-S-S--S-S-CL-S-S-CL-S-S--S-S--S-S--S-S--S-S-CL-S-S-CL--S-S---S-S-V-S-S-V-S-S-CL-S-S-CL--S-S---S-S-V-S-S-V-S-S-CL-S-S-CL-S-S--S-S-V-S-S-V-S-S--S-S--S-S--S-S-CLCL-S--S--S-S--S-S--S-S-CLCL-S--S-免疫球蛋白超家族-S-S-V-S-S-V-S-S-C2C2-S-S--S-S-C2-S-S-C2-S-S-C2-S-S-C2-S-S-V-S-S--S-S-V-S-S--S-S-C2-S-S-V-S-S-V-S-S-V-S-S-VC2C2-S-S--S-S-C2C2-S-S--S-S-C2C2-S-S--S-S-C2-S-S-C2C2-S-S--S-S-C2C2C2C2C2C2C2-S-S--S-S--S-S--S-S--S-S--S-S--S-S-CD2LAF-3CD3CD4CD8VCAM-1ICAM-1ICAM-2Ig受体gdeMHC-IMHC-IIb2m免疫球蛋白（IgM）TCRIga/bIg分子超家族的成员多数为细胞膜表面分子。图中显示的是Ig分子超家族的一些主要成员及其分子结构。IgSuperfamily-S-S-CL-S-S-CL-S22（四）结构域（功能区，domain）3.各功能区的功能:(1)VH和VL—抗原结合部位；(2)CH1～3和CL—Ig遗传标志所在；(3)CH2(IgG)、CH3(IgM)—C1q结合部位；(4)CH2～CH3(IgG)—结合并通过胎盘；(5)CH3(IgG)—FcγR结合部位；(6)CH4(IgE)—FcεR结合部位。（四）结构域（功能区，domain）3.各功能区的功能:(123二、Ig的其他成分（一）J链（joiningchain）

是一富含半胱氨酸的多肽链，由浆细胞合成，主要功能是将单体Ig分子连接为多聚体。IgA二聚体和IgM五聚体均含J链；IgG、IgD和IgE常为单体，无J链。（二）分泌片（secretorypiece,SP）

为一含糖肽链，由黏膜上皮细胞合成和分泌，以非共价形式结合于IgA二聚体上，使其成为分泌型IgA（SIgA）。SP的作用是：使IgA分泌到黏膜表面，发挥黏膜免疫作用；可保护SIgA绞链区，使其免遭蛋白水解酶降解。二、Ig的其他成分（一）J链（joiningchain）24免疫球蛋白课件25免疫球蛋白课件26三、Ig的水解片段（一）木瓜蛋白酶水解片段（图）木瓜蛋白酶IgG2Fab+Fc（二）胃蛋白酶水解片段（图）胃蛋白酶IgGF(ab’)2+pFc’三、Ig的水解片段（一）木瓜蛋白酶水解片段（图）木瓜蛋白酶27FabFcPapainFabFcPapain28细胞的DNA的生物合成有两条途径。一种抗原物质可具有多种不同表位，每一表位可刺激机体一种抗体形成细胞产生一种特异性抗体。1、同种型(isotype)：存在于同种抗体分子中的抗原表位即为同种型，是同一种属所有个体Ig分子所共有的抗原特异性标志，主要存在于Ig的C区中，据H链C区的不同又分为五个大类，每一类又分若干亚类；球蛋白（globulin）是治疗用丙球的主要成分（人工被动免疫）四个亚类:IgG1IgG2IgG3IgG4免疫球蛋白超家族第四节各类免疫球蛋白的特性与功能免疫球蛋白超家族五类免疫球蛋白的特性和功能存在形式分泌型—血清中，功能不清；半衰期长，约20～23天，再次免疫主要抗体亲细胞抗体，介导Ⅰ型超敏反应；★载体（Carrier）Koler,Milstein&Jerne每条重链和轻链分为氨基端和羧基端。价廉，低技术，能得到高特异性和高效价的抗血清。独特型（idiotype）：每个Ig分子所特有独特位（Id)HVR/CDR/Id抗体依赖的细胞介导的的细胞毒作用（ADCC)：gde位于Ig分子的C端，占轻链的1/2和重链的3/4或4/5。主要的抗感染抗体（激活补体、调理、ADCC）（一）类（class）IgG+抗原(靶细胞)→FcγR（NK细胞）→杀伤靶细胞EmilvonBehring,1901,antitoxins免疫球蛋白V区和C区结构示意图免疫球蛋白重链和轻链折叠形成的环形功能区为结构域，（一）掌握抗体和免疫球蛋白的概念；血清中含量最低(占Ig的0.一、IgV区的功能——识别并特异性结合抗原第一节免疫球蛋白的结构μδεαγ免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)五聚体，分子量最大(900kd)，又称巨球蛋白；小、易掌握、经济，如果抗体需求量小，小鼠是最佳选择。GeraldEdelmanandRodneyPorter,1972,structureofantibody恒定区（constantregion,C）：IgA、IgE和IgG4的聚合物可活化补体的旁路途径。亲细胞抗体，介导Ⅰ型超敏反应；初次和再次免疫应答示意图重链:VH，CH1，CH2，CH3(IgG、IgA和pepsinF(ab`)2pFc`细胞的DNA的生物合成有两条途径。主要的抗感染抗体（激活补体29第二节免疫球蛋白的异质性免疫球蛋白的异质性表现在：

1.不同抗原表位刺激机体产生不同类型的Ig,其识别抗原的特异性不同，其重链类别和轻链型别也不同；

2.不同抗原表位诱导的同一类型的Ig(如IgG)，其识别抗原的特异性不同。导致免疫球蛋白异质性的因素外源性因素内源性因素第二节免疫球蛋白的异质性免疫球蛋白的异质性表现在：导致免30一、Ig的类型（一）类（class）

在同一种属的所有个体内，Ig重链C区所含抗原表位不同，据此将重链分为γ、α、μ、δ、ε链5种，与此对应的Ig为5类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。（二）亚类（subclass）

依同一类Ig重链的抗原性及二硫键数目和位置不同，将Ig分为亚类。人IgG：IgG1，IgG2，

IgG3，

IgG4,IgA：IgA1，IgA2,IgM：IgM1，IgM2,IgD和IgE尚未发现亚类。（三）型（type）

根据Ig轻链C区所含抗原表位不同将Ig分为λ和κ2型。（四）亚型（subtype）一、Ig的类型（一）类（class）在同一种属31二、外源因素所致的异质性——Ig的多样性

外源性抗原数目繁多（蛋白质、多糖、脂类等），多样性抗原的存在是导致Ig异质性（即特异性）的外源因素，是Ig异质性的物质基础。二、外源因素所致的异质性——Ig的多样性外源32三、内源因素所致的异质性——Ig的血清型Ig分子上有三类不同的抗原表位同种型（isotype）：种属型标志，IgC区同种异型（allotype）：个体标志，IgC区独特型（idiotype）：每个Ig分子所特有独特位（Id)HVR/CDR/Id三、内源因素所致的异质性——Ig的血清型Ig分子上有三类不331、同种型(isotype)

：存在于同种抗体分子中的抗原表位即为同种型，是同一种属所有个体Ig分子所共有的抗原特异性标志，主要存在于Ig的C区中，据H链C区的不同又分为五个大类，每一类又分若干亚类；按L链的不同分为两型，每型又分为若干亚型。免疫球蛋白课件34免疫球蛋白课件35免疫球蛋白课件362、同种异型（allotype)

：同一种属中不同个体所产生的同一类型Ig,由于重链或轻链恒定区内一个或数个氨基酸（即遗传标志）不同而表现的免疫原性的差异同种异型可以为同一物种的某些个体所共有，但绝不会为同一物种的所有个体所共有，是个体型标志。2、同种异型（allotype)：373、独特型（idiotype)

：是指每一个B细胞克隆产生的特异性Ig分子上特有的氨基酸序列。因为每种特异性IgV区都不相同，故成为某种Ig分子独特的抗原决定簇或独特的标记。3、独特型（idiotype)：是指每一个B细胞克隆产生的38免疫球蛋白课件39第三节免疫球蛋白的功能第三节免疫球蛋白的功能40一、IgV区的功能——识别并特异性结合抗原1.抗体的结合价单体(IgG,IgE)—2价二聚体(分泌型IgA)—4价五聚体(IgM)—10价（5价）中和效应—中和毒素和病毒与Ag结合—促吞噬细胞吞噬2.实际意义一、IgV区的功能——识别并特异性结合抗原1.抗体的结合价单41二、IgC区的功能（一）激活补体

IgM、IgG1-3与抗原结合活化补体的经典途径；

IgA、IgE和IgG4的聚合物可活化补体的旁路途径。二、IgC区的功能（一）激活补体42（二）结合Fc受体

调理作用：

IgG+抗原(颗粒性)→FcγR（单核、巨噬细胞及中性粒细胞）→促吞噬细胞吞噬；抗体依赖的细胞介导的的细胞毒作用（ADCC)：

IgG+抗原(靶细胞)→FcγR（NK

细胞）→

杀伤靶细胞

介导Ⅰ型超敏反应：IgE为亲细胞抗体。二、IgC区的功能（三）穿过胎盘和黏膜（二）结合Fc受体二、IgC区的功能（三）穿过胎盘和43μδεαγ三、内源因素所致的异质性——Ig的血清型Ig的二级结构——“三明治”状的“β桶状”结构小、易掌握、经济，如果抗体需求量小，小鼠是最佳选择。(1)VH和VL—抗原结合部位；每条重链和轻链分为氨基端和羧基端。根据Ig轻链C区所含抗原表位不同将Ig分为λ和κ2型。同一类免疫球蛋白又可以分亚类：如IgG1-G4、IgA1-A2第五节人工制备抗体分别为CDR1、CDR2和CDR3多克隆抗体为第一代人工抗体，由多克隆细胞产生的多种抗体的混合物IgA二聚体和IgM五聚体均含J链；Ig分子上有三类不同的抗原表位三、内源因素所致的异质性——Ig的血清型再次应答：初次应答后，当抗体下降并恢复正常时，再用相同的抗原进行免疫，则抗体产生的潜伏期明显缩短，抗体含量明显上升，且维持时间更为长久，这种现象称为～，也叫回忆应答。F(ab’)2+pFc’（四）结构域（功能区，domain）第五节人工制备抗体IgA：IgA1，IgA2,小、易掌握、经济，如果抗体需求量小，小鼠是最佳选择。轻链（lightchain,L）：分子量25kD，214个Aa.多抗目前极少用于治疗。μδεαγ44免疫球蛋白课件45免疫球蛋白课件46免疫球蛋白课件47第四节各类免疫球蛋白的特性与功能

第四节各类免疫球蛋白的特性与功能48一、IgG单体，血清和细胞外液中含量最高四个亚类:IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

半衰期长，约20～23天，再次免疫主要抗体是治疗用丙球的主要成分（人工被动免疫）主要的抗感染抗体（激活补体、调理、ADCC）介导超敏反应唯一通过胎盘的抗体（自然自动免疫）一、IgG单体，血清和细胞外液中含量最高491.五聚体，分子量最大(900kd)，又称巨球蛋白；2.人类发育过程中最早合成的Ig；3.体液免疫应答最先产生的Ig

—

感染早期免疫；4.占血清Ig含量的5～10%；5.半衰期5天—

血清中特异性IgM

水平增高提示有近期感染；6.激活补体；7.IgM

不能通过胎盘→脐带血或新生儿血清中IgM水平升高表明胎儿有宫内感染；8.膜表面IgM是BCR的主要成分，也是B细胞发育成熟的标志。9.自身抗体→自身免疫病二、IgM1.五聚体，分子量最大(900kd)，又称巨球蛋白；501.两种类型

2.半衰期：6天；3.占血清Ig含量的5～15%；4.粘膜局部抗感染免疫

血清型：IgA1，单体；分泌型：IgA2，二聚体,

粘膜局部浆细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；三、IgA1.两种类型血清型：IgA1，单体；三、IgA511.单体分子2.存在形式分泌型—血清中，功能不清；膜结合型—B细胞表面,3.意义（1）是B细胞成熟的重要标志；（2）抗原受体；4.占血清Ig含量的1%；5.半衰期3天。四、IgD1.单体分子四、IgD521.单体分子；2.血清中含量最低(占Ig的0.002%)；3.半衰期：3天；4.呼吸道和胃肠道浆细胞产生；5.亲细胞抗体，介导Ⅰ型超敏反应；6.过敏性疾病和某些寄生虫感染患者血清中特异性IgE水平增高。五、IgE1.单体分子；五、IgE53第五节人工制备抗体

抗体技术的发展经历了三个阶段第一代：多克隆抗血清第二代：细胞工程抗体（单克隆抗体）第三代：基因工程抗体第五节人工制备抗体54

体内存在千百种抗体形成细胞，每种细胞只识别特定的抗原表位，并在后者刺激下增殖分化，而来得细胞群称为克隆（clone）。

一种抗原物质可具有多种不同表位，每一表位可刺激机体一种抗体形成细胞产生一种特异性抗体。

多克隆抗体为第一代人工抗体，由多克隆细胞产生的多种抗体的混合物一、多克隆抗体（pollyclonalantibody，pAb）

体内存在千百种抗体形成细胞，每种细胞只识别特定的55抗体产生的一般规律初次应答：机体初次接受适量抗原刺激后，经过一段相对较长的潜伏期后，才能在血清中出现含量较低、持续时间较短、以IgM为主的抗体，这种现象称为～。此时产生的抗体与抗原结合的强度较低，IgG出现的时间较晚。再次应答：初次应答后，当抗体下降并恢复正常时，再用相同的抗原进行免疫，则抗体产生的潜伏期明显缩短，抗体含量明显上升，且维持时间更为长久，这种现象称为～，也叫回忆应答。抗体产生的一般规律初次应答：机体初次接受适量抗原刺激后，经过56初次和再次免疫应答示意图初次和再次免疫应答示意图57多克隆抗血清的制备

这是最经典、传统的制备抗体的方法，也是技术上最容易和最简单的。★免疫原▲细胞（cell)▲蛋白质(MW>10000)▲多肽(﹥15aminoacids)★佐剂（Adjuvant）★载体（Carrier）▲KLH(keyholelimpethemocyanin)▲BSA(bovineserumalbumin)多克隆抗血清的制备581.Mice

小、易掌握、经济，如果抗体需求量小，小鼠是最佳选择。一般从眼球取血能得到0.1～1.0ml。2.Rabbits

100ml血清3.Chichens

IgY,蛋黄，量多。4.其它

羊、马等1.Mice59多克隆抗体的优点1.价廉，低技术，能得到高特异性和高效价的抗血清。2.能用无关抗原吸收而去除非特异反应。3.多抗能用于依靠形成沉淀带的实验（如免疫扩散，火箭电泳等）。缺点1.不同抗体的混合体，用无关抗原去吸收效果不佳。2.多抗批间差异大。3.多抗目前极少用于治疗。多克隆抗体的60二、单克隆抗体（monoclonalantibody，McAb)

第二代人工抗体；

由一个B细胞克隆产生的、只作用于单一抗原表位的高度特异性抗体，称为单克隆抗体。其优点为：结构均一、纯度高、特异性强、效价高、少或无交叉反应、制备成本低。二、单克隆抗体（monoclonalantibody，Mc61(一)基本原理杂交瘤技术是利用肿瘤细胞容易体外培养和长期生存的性质，将肿瘤细胞和能分泌特异性抗体的B淋巴细胞进行融合制备杂交瘤细胞，后者继承了肿瘤细胞和B淋巴细胞的性质，即能分泌特异性抗体，又能长期生存。它是建立在杂交瘤细胞的选择培养系统基础上，采用的HAT选择性培养系统是在普通细胞培养液中加入次黄嘌呤（H，Hypoxanthine），氨基蝶呤（A，Aminopterin），胸腺嘧啶核苷（T，Thymidine）,它是根据细胞内嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成途经设计的，用于分离杂交瘤细胞的选择培养液。

(一)基本原理62细胞的DNA的生物合成有两条途径。

1.主要途径（MainPathways）；由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，进而合成DNA。

2.应急或补救途径（SalvagePathways）；它是利用外源性的核苷酸的“前体”，如次黄嘌呤（H，Hypoxanthine）和胸腺嘧啶核苷（T,Thymidine），在次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖核酸转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的催化下合成核苷酸，进而合成DNA。

细胞的DNA的生物合成有两条途径。63

HAT培养液中的氨基蝶呤（A）是一种叶酸拮抗剂，它可阻断细胞内DNA合成的主要途径，而HAT培养液中又提供了核苷酸的“前体”次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）。杂交瘤技术中常用的肿瘤细胞为Balb/c小鼠骨髓瘤细胞系（Myleomacellline）如SP2/0，NS-1及X63-Ag8等，均是人为使其缺乏HGPRT酶的细胞株。当细胞融合后，将细胞置于HAT培养液中进行培养时，Myleomacells及其相互融合形成的同核体细胞的DNA合成的主要途径被氨基蝶呤阻断，同时又缺乏HGPRT，不能利用补救途径，故它们在HAT中不能生长。Spleencells不能在组织培养液中长期生长，它们一般在5-7天内也会死亡。只有Myleomacells和Spleencells相互融合的Hybridomacells由于具有两种亲代细胞的染色体（基因组），故在HAT生存下来的是Hybridomacells。

HAT培养液中的氨基蝶呤（A）是一种叶酸拮抗64HATselectionsystemRNADNAA

M

I

N

O

P

T

E

R

I

NMainbiosyntheticpathwaySalvagepathwayHGRPThypoxanthinethymidineTKTK:thymidinekinaseHGRPT:hypoxanthineguaninephosphoribosyltransferaseHATselectionsystemRNADNAA

M

65一、IgV区的功能——识别并特异性结合抗原与Ag结合—促吞噬细胞吞噬二、外源因素所致的异质性——Ig的多样性μδεαγ三、内源因素所致的异质性——Ig的血清型(2)CH1～3和CL—Ig遗传标志所在；μδεαγ100ml血清