解读全国艾滋病检测技术规范

解读《全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）》精选课件样品的采集根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临床采血技术规范的要求操作，遵守生物安全要求。用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1-2h待血液凝固，血块收缩后经3000r/min离心15min，吸出血清备用。精选课件抗凝血的采集用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸櫞酸钠；HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸櫞酸钠。用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4~8h内分离PBMC和血浆，否则应在24~48h内分离血浆和血细胞。精选课件样品保存用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2－8℃。用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80℃。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室，筛查阴性样品可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存1~2个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确证结果任何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。精选课件筛查试验呈阳性反应样品的转送

如需送上级实验室进行复检，需要核对身份，必须补充个人信息（姓名和身份证号码）并同时填写HIV抗体筛报告和复检单送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。（必要时采集第二份血样）精选课件样品的运送、运送条件用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。用于CD4和CD8T淋巴细胞测定的样品应在室温下（18~25℃）或4℃（特殊要求时）运送。用于病毒载量检测的样品应在-20℃以下运输。

DBS样品应在室温下（18~25℃）运送。每一件包装的体积以不超过50ml为宜。严禁使用玻璃容器。运送血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。包装采用WHO提出的三级包装系统。精选课件HIV抗体检测目的：监测、诊断、及血液筛查的HIV抗体检测要点：筛查试验阳性不能出阳性报告；严格遵守实验室标准操作程序；严格按照试剂盒说明书操作；注意防止样品间交叉污染。HIV抗体筛查试验的方法

ELISA

快速检测（RT）：明胶颗粒凝集试验（PA）；斑点EIA或斑点ELISA（dot-EIA）；斑点免疫胶体金（胶体硒）快速试验；艾滋病唾液检测卡；其他。精选课件确证实验检测的流程方法：免疫印迹试验（WB）条带免疫试验，放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）等。试剂选择：使用HIV-1/2混合型试剂进行检测。结果：阴性反应，报告HIV抗体阴性（—）阳性反应，报告HIV—1抗体阳性（+）不是阴性反应，又不满足阳性判断标准，报告HIV抗体不确定（±）结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或称阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。精选课件检测信息的上报各级艾滋病检测实验室所在结构每月应填写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》并于每月10日前完成网络直报。未开展网络直报的单位，由县级疾病预防控制结构收集信息后统一上报。精选课件质量控制质量控制具体内容：指将质控品和检测标本一起实验操作，从质控值了解分析实验过程的质量情况。为了便于观测和概括，又使用了一些统计学方法进行归纳和分析。质量控制贯穿实验的整个过程实验前的准备实验中的操作实验后数据的整理精选课件内部对照质控血清指每个试剂盒内厂方提供的一套阴性和阳性对照血清。外部对照质控血清各级实验室为了监控每次检测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异而设置的一套阴性和阳性对照血清。精选课件质控血清外部对照质控血清的组成理想的外部对照应该包括阳性对照、弱阳性对照、临界值对照和阴性对照。但是目前各实验室应该在每次实验时设置一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照的值以设定在各试剂盒Cut-off值的2—3倍为宜。精选课件质控血清外部对照质控血清的来源和制备

—通过向有关机构购买获得

—通过实验室制备获得混合HIV抗体阳性或阴性人血清，3000转/分钟离心15分钟，用0.2um生物滤膜过滤除菌后再进行56℃30分钟加热灭活处理.弱阳性对照可以通过使用HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体强阳性血清并经标定后得到.弱阳性对照的OD值以该试剂盒临界值Cut-off的2~3倍为宜。精选课件外部对照质控血清的保存

一次制备量应该足够本实验室使用一年；均一、无菌；标定后等量分装，每份应足够一周实验使用；分类作好标记，使用不同颜色的标签；存放在—70℃，如无条件则存在非自动除霜的—20℃冰箱；一旦融解以后应该存放在2-8℃，一周后必须弃去，不能重新冻存。精选课件建立质控图质控图把检验性能数据与计算出的“控制线”进行比较的图。质控图的构成一中心横线及其上、下各一或两条平行的控制线，并有按时间顺序填入的各质控血清测定的数值。精选课件建立质控图参数算术平均值（X）代表一组S/CO值的平均值，为了统计学上有显著意义，应该采用至少20次（天）所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。标准差（S）是描述样本与均数之间离散程度的一个指标，是与对照值的S/CO值均值有关的预期范围。变异系数（CV）是反映各次S/CO值相对于均值的离散程度的一个指标，可以用于衡量被检标本检测的重复性或精密度。控制限由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。精选课件建立质量控制图

关键是对控制限的选择。—在常规条件下，对同一批血清连续测定20次或20次以上，获得一组数据，求均数和标准差，20个数据中超出2S或3S的数据不应删除。—将均值和标准差分别在质控框架图中标示出来。每个质控对照的OD值/Cut-off比值（S/CO，S为样品A值，CO为Cut-off值）作纵座标（Y轴），每一次（天）实验作横座标（X轴）建立质控图

—从第21次起，每次检测的质控血清的结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。精选课件质控图的判定分析

质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。要求：出现一次2S范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。出现下列情况时，应暂停检测查找原因：出现一次3S范围的变化。连续两次出现同一方向2S范围的变化。连续四次出现同一方向的1S范围的变化。连续10次结果都在1S范围内，但落在均值线的同一侧。精选课件质量控制图建立和分析的注意要点如果改用新批号试剂盒，必须重新制定质控框架图，并建议对新旧两批试剂盒进行平行性试验，平行性试验包括外部对照质控血清和前一批试剂盒中的内部对照质控血清。这种平行性试验有利于质量控制和分析。要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO比值绘制质控图。对同一批质控物连续测定得到20个数据，求均值和标准差，超出2S或3S的数据不应删除。由专人负责建立质控图，每月定期召开质量控制会，讨论本月检测的质量控制情况，检验人员在每次检验之前，了解一个质控图的结果，做到心中有数。精选课件质量控制图建立和分析的注意要点建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒。由于不同厂家生产的ELISA试剂盒所使用的HIV抗原的构成以及使用比例不同，因此对同一标本的反应会有差异，表现在A值相差较大，对外部对照质控血清结果的分析造成困难。使用新批号或使用不同厂家的试剂盒都必须在质控图上注明使用日期。原则上，更换不同厂家生产的试剂盒后，结果偏离程度较大时，必须重新计算均值和标准差并建立新的质控图。精选课件质量控制图建立和分析的注意要点发现全部对照值剧烈位移，立即报告室主管，分析原因是试剂盒质量问题，立刻通知厂家。外部和内部阴性对照质控血清出现高值倾向，应该注意试剂，技术或设备出现问题（如洗板机等）。实验室配制新批次的外部对照质控或变动外部对照质控的值时，必须重新计算均值和标准差，建立新的质控图。操作者在测定质控血清时，发现质控血清数据违背了控制规则，应填写失控报告单，上交室负责人，由室负责人决定是否发出检验报告。精选课件变异系数（CV）分析变异系数（CV）反映各次S/CO值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度.在<20%区间可表示对照值处稳定状态，虽然对均值仍有一定的离散，但从标准差所规定的可信限而言，仍然可靠的。在不同的试剂盒对照之间持续出现高值CV（>20%），可以提示加样量不一。校准加样器以及每次更换吸头加样可以减少CV值使对照值更趋一致。精选课件快速检测质控试剂内对照在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部阴性过程质控。如实验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品须重检。外部质控品对照可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性样品和阴性样品。自制质控品可使用本室保留的阳性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。需做质量控制的情况：更换试剂批号；更换检测人员；更换包装；每个检测日；更换试剂厂家。精选课件提示存在质量隐患，应引起重视的情况：运输包装、内盒或试剂盒的物理损伤；在单包装内存在混杂物质；标签出现错误、缺失或字迹模糊（产品名称或出产厂家名称，批号和货号，失效期或/和生产日期）；缺失目录；泄露或污染；不适宜的存放条件；保护包装纸破损或污染；未达到质量控制标准（阳性/阴性控制结果以及质控条带出现与否等标志）。建议每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于50份样品，至少应做2次质控。精选课件生物危害人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL—2）要求的艾滋病检测实验室中进行：

HIV抗体检测（筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测；

HIV核酸提取和检测；

HIV阳性样品的保存，包括全血、血清、血浆和其他组织（液）、核酸提取物。应在符合Ⅲ级生物安全实验室（BSL—3）要求的艾滋病检测实验室中进行：

HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其他需要应用活病毒的研究工作；

HIV病毒株的保存。精选课件职业暴露原则及时处理原