金匮肾气丸对羟基脲致小鼠肾阳虚的影响

金匮肾气丸对羟基脲致小鼠肾阳虚的影响

金桂肾丸是经典的补阳方。它由地黄、炒山药、山茱萸、腹泻、椰子叶、附子、肉桂等药物组成。具有加热、补充肾阳、益气、固本的功效。它也用于临床治疗各种疾病。本实验以羟基脲造成小鼠肾阳虚模型,以金匮肾气丸作为治疗药,从多种指标观察本方对肾阳虚小鼠的药理作用,为其临床应用提供一定的实验依据。1实验材料1.1动物1.2金盏肾丸6g丸-11.3基质溶胶片1.4sod测试盒1.5仪器2方法和结果2.1模型小鼠皮肤温度和自主活动次数的测定昆明种♂小鼠90只,体重20～24g,分为6组,即正常对照组、模型组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。给药组分别ig给予金匮肾气丸混悬液5.0、2.5和1.25g生药·kg-1,正常组和模型组ig给予同体积的蒸馏水,阳性药组ig给予右归丸10.0g·kg-1,小鼠均ig给药21d,在造模过程中记录小鼠死亡数。并于给药的第8～21天,除正常对照组外,各组动物在ig给水或药物的同时ig给予羟基脲300mg·kg-1。于末次给药后1h,采用数字温度计测定并记录各组动物尾巴中段的皮表温度,采用旷野法测定小鼠自主活动的次数:将小鼠置于圆形无盖箱中,箱底划分为36个等格,箱上方约100cm处挂一150W灯泡,亮灯时进行实验,记录小鼠放入箱中4min内在箱内活动的格数。试验前一天加水,采用常温下,取65cm×35cm×25cm规格的水浴锅,将小鼠负重(1g橡皮泥/10g体重)放入水中游泳,并开始计时,以小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面为小鼠游泳时间。结果见表1。表1可见,金匮肾气丸给药组小鼠与模型组小鼠相比,高、中剂量组皮温明显升高(P<0.05～0.01);各组动物自主活动次数明显增加(P<0.05～0.01);高剂量组的负重游泳时间显著延长(P<0.01),中、小剂量组虽有延长,但无统计学差异。2.2模型小鼠的存活率测定昆明种♂小鼠110只,体重20～24g,随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。肾阳虚模型制作、分组给药方法及时间、剂量同实验2.1,并在造模过程中记录小鼠死亡数。于末次给药后1h,将各组小鼠皮毛淋水后置于笼中,放入-18℃低温冰箱中,40min后取出,统计各组小鼠存活数,计算存活百分率,用x2检验进行统计,结果可见高剂量组的动物死亡率与模型组比较虽无显著性差异,但却呈现明显下降趋势。(见表2)2.3血清中sod、mda、gsh-px水平昆明种♂小鼠110只,体重20～24g,随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。肾阳虚模型制作、分组给药方法及时间、剂量同实验2.1,并在造模过程中记录小鼠死亡数,于末次给药后1h测定血清中SOD、MDA、GSH-PX水平及血清中睾酮含量。血清中SOD、MDA、GSH-PX的测定参照试剂盒说明书操作(结果见表3)。血清中睾酮含量测定采用时间分辨荧光分析技术,以多标记检测仪测定各组动物血清中睾酮含量,具体操作参照试剂盒说明书(结果见表4)。由表3可见,金匮肾气丸给药后高、中剂量组小鼠血清中SOD活力明显增强、MDA含量明显下降(P<0.05～0.01);高剂量组的GSH-PX活力明显升高(P<0.05)。表4可见,金匮肾气丸高、中剂量组小鼠血清中睾酮水平明显高于模型组(P<0.01),且已恢复到正常水平。2.4动物死亡计数以上几个实验中,其分组方法、给药剂量及天数、造模手段等均相同,且造模过程中均出现动物死亡,现将几批动物死亡总数累积,计算其死亡率,统计结果见表5。结果可见,金匮肾气丸高剂量组小鼠在羟基脲造模过程中死亡率明显低于模型组(P<0.01)。3金保持和血清中sod、gsh-px活力,为小鼠肾肾阳虚模型组小鼠与正常对照组小鼠相比,其皮温降低,自主活动次数明显减少,负重游泳时间明显缩短,耐寒能力明显下降,血清中SOD、GSH-PX活力显著降低,MDA含量显著升高,血清中睾酮含量明显降低,且小鼠死亡率明显高于给药组。而金匮肾气丸给药组小鼠与模型组相比,皮温明显升高,自主活动次数明显增加,负重游泳时间显著延长,耐寒能力明显提高,血清中睾酮含量明显升高,且高剂量组小鼠死亡率明显降低,表明本品有一定的温肾助阳作用;给药组血清中SOD、GSH-PX活力显著升高,MDA含量显著降低,则表明服用本品后,小鼠的体内过氧化自由基清除能力增强。以上结果表明金匮肾气丸对于羟基脲引起的小鼠肾阳虚有明显的防治作用,这就为金匮肾气丸这一经典名方温补肾阳的传统功效提供了一定的实验依据。昆明种小白鼠,♂,清洁级,购于中国医学科学院上海实验动物中心,合格证号:中科(沪)动管第99004号。批号20011115,江苏省中医药研究院制剂研究室提供。用时加蒸馏水研匀,配成适宜浓度的混悬液供ig给药。右归丸(1.8g·10丸-1):批号20010302,河南省宛西制药股份有限公司提供。用时加蒸馏水研匀,配成适宜浓度的混悬液供ig给药。鲁卫药准字(1995)第024014号,批号20010401,济南制药厂生产,用时研细加适量蒸馏水配成所需浓度的混悬液备用(批号20020112)、MDA测试盒(批号20020123)、GSH-PX测试盒(批号20020116)均购自南京建成生物工程研究所。睾酮