第三节 吸光光度法的仪器

第三节吸光光度法的仪器第1页，课件共13页，创作于2023年2月一、吸光光度计的基本部件一般由五部分组成：光源→单色器→吸收池→检测系统→信号显示系统第2页，课件共13页，创作于2023年2月（一）光源作用：提供一定波长范围的复合光。要求：能提供具有足够发射强度、稳定且波长连续的复合光，同时发射光的强度还应不随波长的变化而明显改变。常用的光源为6

12伏低压钨丝灯，发射的复合光的波长约在400

2500nm。当在近紫外光区测定时应使用氢灯或氘灯作光源，发射的波长为185

375nm。电源由恒温器供给；为了保持光源强度的稳定，以获得准确的测定结果，电压必须稳定。第3页，课件共13页，创作于2023年2月（二）单色器（分光系统）作用：把复合光中分出所需要的单色光。(1)棱镜是根据不同波长光的折射率不同来分光的。(2)光栅是根据光的衍射和干涉原理来分光的。1.玻璃应在波长360~3200nm范围使用，主要用于可见分光光度计。2.石英可用于波长范围一般为200~4000nm

，适用于紫外-可见分光光度计。第4页，课件共13页，创作于2023年2月（三）吸收池（比色皿）

作用：盛装参比溶液、试液溶液。比色皿是用透明无色的光学玻璃制作的。大多数比色皿为长方形，也有圆柱形的。一般厚度为0.5、1、2和3厘米。(1)在可见光区测定时，使用玻璃吸收池；(2)在紫外光区测定时，使用石英吸收池。第5页，课件共13页，创作于2023年2月（四）检测系统(又叫光电转化器)作用：检测被吸收的光。在光度计中，常用的是硒光电池。晒光电池和眼睛相似，对于各种不同波长的光线，灵敏度是不同的，对光的响应范围为300~800nm，对于波长为500~600nm的光线最灵敏，而对紫外线，红外线则不能应用。光电管和光电倍增管用于较精密的分光光度计中。具有灵敏度高、光敏范围广及不易疲劳等特点。第6页，课件共13页，创作于2023年2月（五）信号显示系统作用：记录、显示测量结果。早期使用的是检流计、微安表、电位计、数字电压表、自动记录仪等。现代的分光光度计广泛采用数字显示器、函数记录仪、示波器及数据处理台等。第7页，课件共13页，创作于2023年2月二、吸光度的测量原理分光光度计实际上测得的是光电流或电压，通过转换器将测得的电流或电压转换为对应的吸光度A。测定时，只要将待测物质推入光路，即可直接读出吸光度值。测定步骤：

1.调节检测器零点，即仪器的机械零点。

2.应用不含待测组分的参比溶液调节吸光零点。

3.测定待测组分的吸光度。第8页，课件共13页，创作于2023年2月三、分光光度计的类型1.可见分光光度计2.紫外-可见分光光度计3.红外分光光度计第9页，课件共13页，创作于2023年2月(一)单光束分光光度计分为：721、722、751型。

751型分光光度计是一种波长范围较宽(200~1000nm)、精密度较高的分光光度计。由光源(钨丝灯或氢灯)发出的光线由反射镜反射，使光线经狭缝的下半部，经准光镜进入单色器棱镜色散底，由准光镜将光聚焦于狭缝上半部而射出，经液槽照射于光电管上。由此可见，仪器用同一狭缝作入光和出光狭缝，它们始终具有相同的宽度。第10页，课件共13页，创作于2023年2月(1)波长200-320nm范围用氢灯作光源，波长320-1000nm范围用钨丝灯作光源。(2)棱镜和透镜均由石英材料作成，反光镜和准光镜表面镀铝。所以全部系统保证紫外光谱通过。(3)波长200-625nm用蓝敏光电管(GD-5)测量透射光强度，波长625-1000nm用红放光电管(GD-6)测量透射光强度。(3)吸光度和透光度通过显示屏读出。第11页，课件共