高效液相色谱-紫外法测定水产品中磺胺类药物残留

高效液相色谱-紫外法测定水产品中磺胺类药物残留

磺胺类药物（sa）的母核结构为对氨基苯磺酰胺。磺胺类药物通过饲喂进入水产品和畜禽动物体内,最终在人体器官组织中形成富集残留,从而引发过敏与变态反应、致癌、致畸、致突变等症状;此外,磺胺类药物残留问题也是目前水产品进出口中的贸易壁垒;我国在水产养殖中允许限量使用此类药物,限量为0.10mg/kg,这也使得水产养殖中药物的超量使用造成隐患,同时对养殖中各阶段的磺胺类药物检测提出更及时、准确的要求。目前,水产品中磺胺类药物多残留检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法、和高效液相色谱—质谱法。本文采用高效液相色谱仪-紫外检测器,通过改善提取液对样品的提取效果,进一步强化净化柱的选择吸附能力和洗脱效果,提高方法回收率,以期为水产品中磺胺类的多组分残留检测提供参考。1实验部分1.1清洗器和标准品Waterse2695高效液相色谱仪(配紫外检测器,美国Waters公司);Q-101平行蒸发器(瑞士Buchi公司);Z323K高速冷冻离心机(德国Hemel公司);KQ5200DE超声波清洗器(昆山超声波仪器厂);C18柱:500mg/3mL(美国Varian公司);HLB柱:500mg/3mL(美国Waters公司);MCX柱:500mg/3mL(美国Waters公司)。磺胺嘧啶(SD)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲基嘧啶(SM1)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲基异噁唑(SMZ)、磺胺多辛(SDM)、磺胺异噁唑(SIZ)、磺胺喹噁啉(SQ)标准品均购于国家标准物质研究中心。试剂均为分析纯或以上级别,纯水(≥18.2MΩ/cm)。1.2u3000流动相及洗脱条件色谱柱:WatersShield-RP柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温40℃,进样量50μL,流动相:V(乙腈)∶V(甲醇+2%乙酸溶液)=10∶5∶85,检测波长:270nm,梯度洗脱条件如表1。1.3液-液法提取mx称取5.00g鱼糜样品置于50mL具塞塑料离心管中,加入10mLNa2EDTA-Mcllvaine缓冲液提取,超声提取5min,5000r/min离心10min,将提取液转入鸡心瓶中,然后在样品中加入20mL甲醇-氯仿溶液,超声提取5min,5000r/min离心10min,将提取液一并倒入蒸发瓶中,45℃平行蒸发仪浓缩至少量液体,加入10mL水溶解残渣,待过柱。用6mL甲醇活化MCX柱,转移提取液到柱上,然后在蒸发瓶中加入3mL水清洗,一并转移到柱上。用5mL5%甲醇溶液清洗柱子,最后用1mL的流动相洗脱,洗脱液过0.45μm滤膜供液相色谱测定。2结果与讨论2.1与甲醇-检测方法的对比参考水产品检测标准推荐的提取液乙腈、傅宏庆等使用的提取液乙腈-氯仿(10:1,V/V)以及笔者采用的Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液和甲醇-氯仿(10:1,V/V)分次提取模式进行比较,结果表明:较乙腈和乙腈-氯仿,采用强极性的Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液和极性较弱的甲醇-氯仿(10:1,V/V)提取的效果要好于前两者,尤其是磺胺噻唑(ST)和磺胺喹恶啉(SQ)提取能力上,后者要高10%以上,且提取的样品基质对分析组分无干扰影响,提取效果好。故选用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液与甲醇-氯仿(10:1,V/V)作为提取液。2.2净化效果和吸附交换能力参考孟勇等使用的C18柱、刘振伟等使用的HLB柱以及Water公司推荐使用MCX柱(混合阳离子交换柱)进行净化能力比较,实验发现:采用C18柱(图1)时多种组分的净化效果和吸附交换能力都明显低于同规格的HLB柱和MCX柱,同时发现HLB柱(图2)也存在磺胺喹恶啉(SQ)的吸附交换能力不足,而MCX柱(图3)的采用很好的解决了净化效果和吸附交换能力不足等问题,减少了磺胺甲基异噁唑(SMZ)、磺胺异噁唑(SIZ)存在的干扰物影响和磺胺喹恶啉(SQ)回收率偏低两个关键难题。故选用MCX柱作为净化柱。2.3分析柱的选择比较了传统配置的WatersX-Bridge和WatersShield-RP两款色谱柱,对其进行样品的分析能力测试,实验发现:采用WatersShield-RP柱(图4)对磺胺类各组分的分离度和分析时间上都要优于WatersX-Bridge柱(图5),综合分析考虑选用WatersShield-RP柱作为分析柱。2.4线性范围与检出限按1.2节色谱条件分别对质量浓度为0.01,0.02,0.05,0.10和0.25μg/mL混合标准工作液进样分析,以磺胺类各组分的峰面积A对应其质量浓度ρ(μg/mL)进行线性回归,线性范围在0.01～0.25μg/mL相关系数均在0.9997以上,以3倍信噪比(S/N)对应的浓度计算方法的检测限,磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺多辛、磺胺异噁唑、磺胺喹噁啉检出限分别为1.43,1.65,1.58,2.02,2.59,2.78,2.96,2.25μg/kg。2.5加标回收率试验按照1.2节仪器条件和1.3节处理方法,在鱼糜样品中分别加入1.0mL