木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷b和黄芩苷的含量测定

木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷b和黄芩苷的含量测定

木槿是紫穗科植物的木槿或偶氮（l.）和泰康的干燥成熟种子。它首先被记录在云南南部的草本植物上，原名数千张纸。《本草纲目》最初被称为木槿。它又甜又甜，具有润肺、咽喉、疏肝、胃的作用。木蝴蝶的化学成分以黄酮及其苷类为主,黄酮苷类主要有木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷等活性成分。2010年版《中国药典》一部收载了木蝴蝶苷B的质量分数测定,文献中多以黄芩苷的质量分数为指标对木蝴蝶进行质量评价;文献报道采用HPLC法测定了木蝴蝶提取物中木蝴蝶苷A的质量分数;文献报道了HPLC法测定木蝴蝶药材中黄芩素和白杨黄素的质量分数;另有HPLC法测定木蝴蝶药材中木蝴蝶苷A和木蝴蝶苷B质量分数的报道,而对木蝴蝶配方颗粒的研究则较少。木蝴蝶配方颗粒是木蝴蝶饮片经水提取后制粒而成,供临床调配组成复方汤剂使用,具有免煎易服、水冲即溶、携带方便、剂量准确等特点。目前6家试点生产企业对木蝴蝶配方颗粒的质量控制仅限于性状和鉴别,并没有建立其有效成分的含量控制方法。本文在参考文献[13-14]的基础上,采用HPLC法同时测定木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷B和黄芩苷的质量分数,为木蝴蝶配方颗粒质量标准的建立提供参考。1仪器和试剂盒1.1紫外分离器Agilent1260高效液相色谱仪(G1311C泵,G1314B紫外检测器,Chemstation工作站);BS110S万分之一天平(德国赛多利斯公司);ABT220-5DM十万分之一电子天平(德国KERN公司);CQ-25-6超声波清洗器(上海音波声电科技公司)。1.2日性酰精、木1.木蝴蝶苷B(批号:111915-201202)、黄芩苷(批号:110715-201117,质量分数以91.7%计),均购自中国食品药品检定研究院;麦芽糊精(河南鑫源食品有限公司,批号:F1207005);木蝴蝶配方颗粒(广东一方制药有限公司,批号:1107143、1111055、1211151);甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1流动相及洗脱溶液色谱柱:VenusilASBC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:A为甲醇,B为乙腈,C为0.3%(体积分数,下同)H3PO4溶液,按表1程序进行梯度洗脱;检测波长:280nm,流速:0.8mL/min,柱温:30℃。2.2对照品溶液的制备精密称取木蝴蝶苷B对照品12.54mg,置200mL容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即得每1mL含62.7μg的木蝴蝶苷B对照品溶液;精密称取黄芩苷(质量分数为91.7%)对照品11.74mg,置250mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即得每1mL含43.06232μg的黄芩苷对照品溶液。2.3超声减失取木蝴蝶配方颗粒适量,研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%(体积分数,下同)甲醇50mL,密塞,称定质量,超声处理(功率200W,频率25kHz)30min,放冷,再称定质量,用70%甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过。取续滤液,即得。2.4阴性样品溶液的制备取麦芽糊精约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50mL,同“2.3”项下方法制成阴性样品溶液。2.5色谱条件测定分别精密吸取木蝴蝶苷B对照品、黄芩苷对照品、阴性样品溶液及木蝴蝶配方颗粒供试品溶液各10μL,分别按“2.1”项下色谱条件测定,结果理论板数按木蝴蝶苷B峰计算应不低于2000,阴性样品无干扰,见图1。2.6木蝶苷b和麻黄苷a回归方程分别精密吸取木蝴蝶苷B、黄芩苷对照品溶液1、2、4、8、12、16、20μL,分别按“2.1”项下色谱条件测定,记录峰面积,以对照品进样量为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)进行回归处理。得木蝴蝶苷B和黄芩苷的回归方程分别为Y=1.991×103X+5.875(r=0.9995);Y=3.331×103X+1.264(r=0.9997)。表明木蝴蝶苷B进样量在0.0627~1.2540μg、黄芩苷进样量在0.0431~0.8612μg呈良好线性关系。2.7测定木聚糖酸峰面积取同一批木蝴蝶配方颗粒供试品溶液(批号:1211151),按“2.1”项下色谱条件重复测定6次,分别记录木蝴蝶苷B和黄芩苷峰面积。结果木蝴蝶苷B峰面积的RSD值为0.16%,黄芩苷峰面积的RSD值为0.10%,表明仪器精密度较好。2.8测定木聚糖酸酯及其衍生物的含量取同一批号供试品溶液(批号:1211151),分别于0、2、4、8、12、24h,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录木蝴蝶苷B和黄芩苷峰面积,木蝴蝶苷B峰面积的RSD值为0.24%,黄芩苷峰面积的RSD值为0.28%。表明供试品溶液在24h内稳定。2.9下方法制备供试品溶液取同一批(批号:1211151)木蝴蝶配方颗粒,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,平行操作6份,按“2.1”项下色谱条件测定。结果得到木蝴蝶苷B和黄芩苷质量分数分别为33.76、17.21mg/g,其RSD分别为1.31%、1.33%,表明方法重复性良好。2.10供试品溶液取已知质量分数(木蝴蝶苷B质量分数33.76mg/g,黄芩苷质量分数17.21mg/g)的木蝴蝶配方颗粒(批号:1211151)0.05g,共6份,精密称定,分别加入木蝴蝶苷B对照品溶液(质量浓度为62.7μg/mL)25mL、黄芩苷对照品溶液(质量浓度为43.06232μg/mL)20mL,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定,结果见表2。2.11木聚糖复合制剂质量分数的测定取3批(批号分别为1107143、1111055、1211151)木蝴蝶配方颗粒,分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定,以外标法计算制剂中木蝴蝶苷B的质量分数分别为40.86、40.58、33.96mg/g,黄芩苷的质量分数分别为15.09、14.99、17.19mg/g。3提取时间的选择在供试品溶液制备方法考察时,比较了超声提取与加热回流提取的效果,发现超声提取效果优于加热回流提取;试验过程中比较了甲醇、70%甲醇、30%甲醇、水作为溶媒的提取效果,发现70%甲醇作为溶剂时所测得的木蝴蝶苷B和黄芩苷的质量分数最高,因此选择70%甲醇作为提取溶媒;还考察了不同提取时间的影响,比较了20、30、50min的提取效果,确定提取时间30min为宜。试验对甲醇-H3PO4、甲醇-醋酸、乙腈-H3PO4、甲醇-乙腈-H3PO4等多个流动相系统进行了考察,结果表明,甲醇-乙腈-0.3%(体积分数)H3PO4溶液梯度洗脱能使相邻成分的分离度达到要求,且色谱图基线平稳、色谱峰形良好。本试验采用HPLC法同时测定木蝴蝶配方颗粒中木蝴蝶苷B、黄芩苷质量分数,方法简便快捷、重复性好,为木蝴蝶配方颗粒的质量控制提供了依据。结果显示,木蝴蝶配方颗粒