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文献应用|通过Sapphire平台研究基于荧光的一种蛋白质-RNA相互作用的小分子调节剂AzureBiosystems国立首尔大学化学系CRI化学蛋白组学WanGiByun团队在《Chembiochem》发表了他们最新的研究成果，基于荧光的紧密结合分析发现了一种蛋白质-RNA相互作用的小分子调节剂。那为什么要研究RNA-蛋白之间的相互作用呢？RNA和蛋白是可以相互作用的生物分子，可以通过物理性相互作用，调节彼此的生命周期和功能。mRNA编码序列指导蛋白质和一些调节序列的合成，而mRNA的非翻译区域通过调控蛋白质的翻译、定位和与其他蛋白质的相互作用，影响编码蛋白的命运。另一方面，从RNA合成到降解的过程中，蛋白质反过来可以结合和调控RNA的表达和功能。RNA与蛋白质的相互作用对于维持细胞稳态是非常重要的，而干扰两者的相互作用会造成细胞功能失调和相关疾病的发生。那如何来检测蛋白-RNA间的相互作用呢？让我们一起来看看WanGiByun团队是怎么做的：蛋白质结合会引起微环境的变化，而这将会显著改变与之结合的核酸偶联的荧光基团的荧光强度。鉴于此，WanGiByun团队构建了一种简单而强大的分析方法来检测let-7miRNA及其转录后调控蛋白Lin28之间的相互作用。通过荧光EMSA来确定化合物的活性以及IC50，测定荧光结合强度后，经4%丙烯酰胺凝胶电泳后，使用AzureSapphire对Cy3和TAMRA以及Cy5的荧光信号进行可视化检测。Figure3.Hitidentificationandvalidation(a)Chemicalstructureofhitcompounds.(b)Dose-responsecurveobtainedbyfluorescenceintensitybasedbindingassay.Errorbarsrepresentthestandarddeviationfromthreeindependentmeasurements.(c)HitvalidationbyEMSA.此外，通过WesternBlot来检测下游信号通路蛋白的含量变化。仅需一台Sapphire即可完成EMSA和Western

Blot的检测，Sapphire的功能绝不仅限于此……Sapphire是市面上唯一可以进行扫描式和CCD成像化学发光的双模式成像系统，也是唯一使用3种检测器检测信号的成像系统（APD，PMT，CCD），具有更宽的动态范围，灵敏度更高，分辨率可达10-1000微米。Sapphire除了完成Paper中使用的EMSA凝胶阻滞实验外，还能完成哪些实验呢？可以完成DNA/Protein凝胶成像，WesternBlot化学发光，多通道荧光检测，in-cellwestern检测，2D和2D-DIGE以及磷屏成像检测……看到这里

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