菊粉添加对克氏原螯虾消化酶活性、肠道组织形态和非特异性免疫能力的影响

菊粉添加对克氏原螯虾消化酶活性、肠道组织形态和非特异性免疫能力的影响

螃蟹通常被称为元尾虾。因为它丰富了肌肉和美丽的肉质，深受消费者喜爱。1材料和方法1.1饲料组成及营养水平试验共配制6种等氮等能的饲料，饲料中菊粉为市售品(纯度>99%)，饲料中菊粉添加水平分别为0(基础饲料，对照组)、0.20%、0.40%、0.60%、0.80%和1.00%。饲料组成及营养水平见表1。所有原料经粉碎后，过80目筛网，按照配方要求准确称量，并逐级混匀后，加入鱼油、豆油和适量水，再次混匀后，经制粒机(NBS-150)挤压为粒径为2mm的颗粒饲料，60℃烘干，密封袋分装，标记，-20℃冰箱储存备用。饲料的粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和水分含量的测定分别采用凯氏定氮法、索氏抽提法、灼烧法与105℃恒温烘干法。1.2克氏原螯虾养殖管理试验用克氏原螯虾购自湖北省公安县某小龙虾养殖基地，并通过湿法运至室内的养殖系统。在2周的室内暂养期间，每天饱食投喂基础饲料。正式试验开始前禁食24h，选用规格一致[(6.58±0.16)g]、附肢齐全和活力正常的克氏原螯虾240尾，随机分为6个组，每组4个重复，养殖密度为10尾/箱，放养于由24个容积为84L水族箱(0.6m×0.4m×0.35m)组成的室内养殖系统中，水位10cm，分别投喂6种饲料。每日投喂2次(09:00和18:00)，投喂量为体重的3%。试验期间养殖用水为充分曝气的自来水，每天换水1/3～1/2，用虹吸法吸出残饵和粪便。每天观察克氏原螯虾健康与摄食状况，定期检查水质，试验期间水温保持在(23±2)℃，pH为7.0～8.5，不间断增氧，溶解氧含量≥6mg/L，自然光照。试验期7周。1.3肠道切片检测养殖试验结束后禁食24h，每组随机抽取3尾虾，冰上解剖并取后肠段的中间部分固定于4%多聚甲醛溶液，委托武汉塞维尔生物科技有限公司进行肠道切片;养殖试验结束后禁食24h，每组随机抽取6尾虾，冰上解剖其胃和肝胰腺各0.10g，用滤纸擦干其表面水分后放入EP管中，加入0.9mL预冷生理盐水，4℃匀浆，3000r/min离心15min，吸取上清液，制成10%匀浆液，分装，-80℃保存备用。1.4肠道组织形态测量用光学显微镜系统对后肠组织切片进行观察和拍照。记录每张切片中所有肠道黏膜皱襞的长度和宽度。测量标准以肠道黏膜皱襞顶端至基部中线为肠道黏膜皱襞长度;以长度的中点位置作垂线交于肠道黏膜皱襞2侧，2交点之间的距离为肠道黏膜皱襞宽度。1.5肝胰腺组织匀浆acp和溶菌酶lmm活性的测定胃组织匀浆的上清液用于蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性的测定;肝胰腺组织匀浆的上清液用于酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和溶菌酶(LZM)活性的测定。所有酶活性均采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。1.6单因素方差分析及dunpan氏法多重比较数据经Excel2019初步处理，再使用SPSS26.0软件进行单因素方差分析(one-wayANO-VA)及Duncan氏法多重比较，以P<0.05表示差异显著，结果用“平均值±标准差”表示。2结果与分析2.1克氏原螯虾胃组织中各酶活性的变化由表2可知，饲料中添加不同水平菊粉显著影响克氏原螯虾胃组织中消化酶活性(P<0.05)。随着饲料中菊粉添加水平的提高，克氏原螯虾胃组织中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性呈现先升后降的变化趋势。其中，0.40%～1.00%菊粉添加组胃组织中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均显著高于对照组(P<0.05);0.20%菊粉添加组胃组织中消化酶活性与对照组相比无显著性差异(P>0.05);0.60%菊粉添加组胃组织中蛋白酶活性最高，而0.80%菊粉添加组胃组织中淀粉酶和脂肪酶活性最高。2.2不同菊粉添加量各组肠道组织形态的变化由图1可知，饲料中添加不同水平菊粉可以改善克氏原螯虾肠道组织形态。与对照组相比，随着饲料中菊粉添加水平的提高，后肠整体轮廓更为清晰，肠道黏膜皱襞形成的纵嵴数量增加;各菊粉添加组肠壁内的结缔组织更为紧密，肌层更加明显和完整。由表3可知，饲料中添加不同水平菊粉显著影响克氏原螯虾后肠黏膜皱襞长度和宽度(P<0.05)。0.40%～1.00%菊粉添加组后肠黏膜皱襞长度和宽度显著高于对照组(P<0.05);0.20%菊粉添加组后肠黏膜皱襞长度和宽度与对照组相比无显著性差异(P>0.05);0.40%菊粉添加组后肠黏膜皱襞长度和宽度最高。2.3肝胰腺akp、acp和lgm活性的变化由表4可知，饲料中添加不同水平菊粉显著影响克氏原螯虾肝胰腺免疫酶活性(P<0.05)。随着饲料中菊粉添加不同水平的提高，克氏原螯虾肝胰腺AKP、ACP和LZM活性呈现先升后降的变化趋势。0.20%～1.00%菊粉添加组肝胰腺AKP和ACP活性显著高于对照组(P<0.05);0.40%～1.00%菊粉添加组肝胰腺LZM活性显著高于对照组(P<0.05);0.20%菊粉添加组肝胰腺LZM活性与对照组相比无显著性差异(P>0.05);0.60%菊粉添加组肝胰腺AKP、ACP和LZM活性均为最高。3讨论3.1菊粉对原头虾胃组织中消化酶活性的影响消化酶活性的高低反映动物最基础的消化生理特征，以及其对饲料营养物质的利用能力3.2影响虾后肠形态的因素本试验结果表明，饲料中添加0.40%～1.00%菊粉可以改善克氏原螯虾后肠形态结构，其原因可能是由于菊粉发酵产生的短链脂肪酸促进了肠上皮细胞的增殖、分化和迁移，并维持肠道的内环境稳态目前，一般认为十足目动物的肝胰腺发挥着最主要的消化和吸收功能，而后肠仅具渗透调节和排粪的功能3.3菊粉对原生殖民肝胰