和厚朴酚羟丙基-环糊精包合物的制备

和厚朴酚羟丙基--环糊精包合物的制备

和厚朴酚（honokiol，香港）是中国传统的中医木兰科植物。etwilsbaile，etwils）或扁平厚朴（meniarehs）是从干燥的干皮、根皮和分枝皮中提取的生物活性物质。研究发现,和厚朴酚具有明显的抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗辐射及心血管保护作用等药理活性1仪器和试剂UV-3150型紫外分光光度计(日本岛津公司);综合热分析仪STA449(SimultaneousTG-DTA/DSCApparatusSTA449C,德国Netzsch公司);红外光谱仪(AVATAR330FT-IR,美国ThermoNicolet公司);DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器);AR2140精密电子天平(美国OHAUS公司);SHZ-88台式水浴恒温振荡器(江苏太仓市实验设备厂)。和厚朴酚(西安小草植物科技有限公司,纯度>98.48%);羟丙基-β-环糊精(西安德立生物化工有限公司);实验用水为超纯水,其余所用试剂均为分析纯。2方法和结果2.1包剂中的药物含量是通过测定包剂中的药物含量来确定的2.1.1测量波长的选择精密称取10mgHK,置于50mL的量瓶中,用无水乙醇溶解定容,获得质量浓度为200μg·mL2.1.2标准曲线精密称取HK适量,配制成质量浓度为4、8、12、16、20、24、28和32μg·ml2.1.3包合率和工艺曲线的测定精密称取100mg包合物,加适量水使溶解,用0.45μm的微孔滤膜过滤,取续滤液0.5mL置于10mL的量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,于292nm处测其吸光度A,根据标准曲线方程计算和厚朴酚的含量,并按下式计算包合率。包合率(%)=包合物中和厚朴酚的质量/和厚朴酚投药质量×100%2.2hp-hplc包装工艺的筛选2.2.1u3000加入hpcd水溶液精密称取适量HK和HPCD,HK用适量乙醇溶解。在搅拌的条件下,将HK乙醇溶液缓慢加入HPCD水溶液中,室温搅拌24h。然后将上述反应体系用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液冷冻干燥获得固体包合物2.2.2超声过滤精密称取适量HK和HPCD,在HPCD水溶液中加入HK后,立即超声30min,用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液冷冻干燥。平行制备3份。2.2.3包合物的制备精密称取适量HK和HPCD,加适量蒸馏水将HPCD研匀,在研磨的条件下,缓慢分次加入HK,充分研磨30min,获得的糊状物冷冻干燥。平行制备3份。溶液搅拌法、超声法及研磨法3种方法制备获得包合物的包合率分别为(43.98±0.24)%,(48.67±4.5)%,(49.54±6.5)%(n=3)。考虑到超声法和研磨法不利于工业化生产,而溶液搅拌法的稳定性和可重复性较好,最终选择溶液搅拌法制备包合物。2.3制备工艺对包合物包合率的影响2.3.1包合物包合率的变化按“2.2.1”项下,考察HK与HPCD的摩尔比分别为1∶1,1∶1.5,1∶2,1∶3和1∶5时包合物包合率的变化。结果显示,包合物的包合率分别为(25.67±1.97)%,(41.45±3.30)%,(50.63±6.14)%,(65.03±2.79)%,(73.30±4.87)%(n=3)。2.3.2时对包合物包合率的影响按“2.2.1”项下,考察反应温度分别为30、40、50和60℃时对包合物包合率的影响。结果显示,包合率分别为(41.99±2.62)%,(42.03±1.20)%,(49.21±1.80)%,(48.48±1.60)%(n=3)。2.3.3各合率的影响按“2.2.1”项下,考察反应时间分别为1、2、4、8、12和24h对包合物包合率的影响。结果显示,包合物的包合率分别为(41.99±2.62)%,(43.06±4.09)%,(47.90±1.42)%,(46.99±2.33)%,(47.10±1.20)%,(45.71±1.00)%(n=3)。2.3.4搅拌速度按“2.2.1”项下,考察转速分别为150、200及300r·min2.3.5结论通过对以上影响因素的考察,初步确定各影响因素的实验范围,投料比1∶1~1∶5,反应温度30~70℃,反应时间1~5h。2.4投料摩尔比值以包合率为效应指标,对影响包合率的处方因素、制备工艺中的各种影响因素进行单因素考察,结果表明HK与HPCD的投料摩尔比值(X以包合率为因变量,对各因素各水平进行二次多项式拟合,拟合方程如下。Y=-50.22+77.95X由图1可知,随着投料摩尔比值(X2.5包合率及预测值按优化后的处方:HK与HPCD投药摩尔比1∶5,反应温度为50℃,反应时间为3h。按优化后的处方制备3批样品,包合率为(79.64±1.67)%,预测值为(74.22±2.13)%。偏差为-7.3%,绝对值小于10%,提示建立的数学模型预测性良好。2.6表观溶解度测定根据HiguchiandConnors原理,测定HK在不同浓度的HPCD溶液37,50,60℃下的表观溶解度,同时计算在不同温度下对和厚朴酚的增溶倍数见表3。结果表明,随HPCD浓度的增加,HK在水中的溶解量逐渐增加。当HPCD的浓度为30mmol·L2.7包组分的检查2.7.1表1处有吸热峰HK、HPCD、HK-HPCD包合物和HK/HPCD物理混合物的DSC图谱见图2,HK在90℃附近有吸热峰,这是HK的特征熔点峰;HPCD在60℃附近有吸热峰;物理混合物在60~100℃内有一个较宽的吸热峰,这个峰基本上是HPCD与HK在此温度范围内图谱的叠加;包合物在60~100℃内没有吸热峰,而是在110~140℃内出现了新的吸热峰,证明包合物已形成。2.7.2红外光谱法HK、HPCD、HK-HPCD包合物和HK/HPCD物理混合物的红外图谱见图3。HK在2360cm3羟基自由基磺酸钠包合物3.1和厚朴酚是中药厚朴中提取的主要有效成分。传统中医将厚朴用于消除胸腹满闷、湿滞伤中、脘痞吐泻、活血化瘀及腹胀便秘等。现代药理研究表明,和厚朴酚具有多靶点、多效应、多环节等作用特点,特别是在抗炎、抗氧化、抗肿瘤和治疗糖尿病等方面表现出巨大的潜力。3.2羟丙基-β-环糊精是β-环糊精的一种衍生物,是由羟丙基取代β-环糊精2、3或6位羟基H原子所得。与β-环糊精相比羟丙基-β-环糊精的水溶性更好(>500g·L3.3本实验采用相溶解度法测定表观溶解度,大量预试结果显示,温度在30~60℃内包合物的包合率较高且较稳定,故选择37、50、60℃测定其表观溶解度。实验37℃条件下,测定和厚朴酚在水中的溶解量约为99μ