分子生物学原理基因工程

第十四章基因重组与基因工程5/26/2023分子生物学原理基因重组：genomic

recombination重组DNA：recombinant

DNA5/26/2023分子生物学原理第一节、自然界的基因重组转化：transformation整合：integration转导：transduction转位：transposition5/26/2023分子生物学原理转化转化：由外来

DNA引起生物类型改变的过程称为转化。细菌的转化5/26/2023分子生物学原理转化病毒癌基因感染宿主细胞后，可整合到宿主染色体上，从而使宿主细胞癌变。转染：噬菌体感染宿主菌后，核酸进入菌体程。细胞的转化内5/2的6/202过3分子生物学原理整合整合：λ

噬菌体感染大肠杆菌的第一步λ

噬菌体粘附于细胞壁上，将自身的λDNA注入菌体中。此λ

DNA可与细菌染色体重组，成为细菌染色体的一部分。溶原菌：整合了噬菌体基因组的细菌。裂解：λ

噬菌体感染大肠杆菌的第二步

λ

DNA利用菌体的酶系统，复制自身及外壳蛋白，组装成大量新λ

噬菌体，并将5/26/细2023

菌涨破。分子生物学原理整合溶原和裂解可以相互转变。5/26/2023分子生物学原理转导溶原菌中λ

DNA可以原样地切离出来，也可以把邻近的宿主DNA在切离时带走一部分。后者称转导。带有宿主DNA的噬菌体称转导噬菌体。来源于宿主的基因称转导基因。5/26/2023分子生物学原理转位转位：一个或一组基因从一处转到基因组的另一个位置。这些游动的基因称为转位子(transposon)。5/26/2023分子生物学原理转位7/27/2023分子生物学原理第二节、基因工程基因工程：是用分离纯化或人工合成的

DNA在体外与载体DNA结合，成为重组

DNA，用以转化宿主，筛选出能表达重组DNA的活细胞，加以纯化、传代、扩增，成为克隆。也叫基因克隆或重组

DNA技术。分子水平上操作，细胞水平上表达。赋予重组DNA以新的生命力。7/27/2023

分子生物学原理基因工程肿瘤细胞的转移与细胞表面的糖链类型有关，而后者又与糖基转移酶的表达相关。已经证实GnT-Ⅴ与转移有关。肝癌细胞株SMMC7721转入GnT-Ⅴ基因 转入反义GnT-Ⅴ基因观察其迁移、侵袭、粘附等生物学行为转移↑7/27/2023分子生转物学移原理↓基因克隆分切接转筛7/27/2023分子生物学原理载体和目的基因载体：vector在宿主细胞内可独立复制的完整DNA分子。但必须利用宿主的酶系统，才能有进一步的基因表达能力。常用的载体有：质粒、λ

噬菌体、M13

噬菌体逆转录病毒DNA、昆虫病毒DNA载体与宿主共培育可大量生成，经纯化后可用于基因工程。7/27/2023

分子生物学原理质粒质粒：plasmid环形双链DNA，大小约为数千碱基对，存在于大多数细菌的胞质中。拷贝数：每个细菌能容纳的质粒数目。质粒的性质：易于从一个细菌转移入另一个细菌。有两三个抗药性基因。7/27有/2023一个限制性内切分子生酶物学切原理口。质粒pBR屑3百22：常用潜的质抖粒5/1站8/缩慧2进023杏分子雁生物洒学原手理噬菌摊体载窗体λ羽噬菌粱体娘、M13饼噬菌园体易于些感染坝大肠惜杆菌λ们噬菌收体DNA馒比质威粒大批，对毕限制障性内蹈切酶夺有不采止一临个切摆口，某需经弹过改矩造。一个菌切口浩：插题入型策载体旗。二个闯切口后：置丹换型妻载体岁。5/1窄8/挥2羊023息分子站生物驱学原铺理噬菌街体载些体5/1服8/摩2亚023雾分子莫生物隐学原姨理目的宋基因程的来括源直接梁从染玩色体DNA岗中分快离：或原核醒生物人工戴合成滋：简晒单的俗多肽从mR朋NA合成cD坟NA：真核朴生物基因望文库半：(gen亦el具i玩br乱ar齿y）G文库前：用况基因边组的片全部DNA据制备露。c文库拔：桐用细敏胞的萄全部mR跪NA制备伍出全勤套cD化NA后建挠库。5/1务8/械2辨023扮分子腔生物咽学原鸟理从mR禽NA合成cD攀NA5/1裂8/钥2愤023别分子亿生物学原理限制擦性内为切酶竹的应期用限制策性内圾切酶采可辨兵认4~6笛个核孔苷酸马：回锋文结值构回文凤结构：pal亲i营ndr沉om免eD梨勿NA双链隆具有筑方向你相反波顺序孩一致凳的结泻构。平端害：bl栽unt垮e乌nd爷在同谷一水享平上信切断泊两条煤链。(钝型械末端)粘性费末端绪：sti喉c详kye漂nd写碱基虑序列造被酶弹以错泰开几体个核谨苷酸额的形荷式切碌开。5/1革8/云2蝴023来分子址生物土学原聚理限制仗性内融切酶帝的应盈用Alu与I奴….A希GC遇T钞…..库登….阳AG鹊C逝T.件..栋平端…..叮TC爬G启A….择.呼….T照CG警A承..拆.Bam岔HI喂…GG固AT疮C虾C….城.施.G薪G溜A洒TT斥C…粘性...劣CC翼TG……CC聚T额AA脆GG…末端5/1捐8/歼2驻023粗分子走生物匠学原汇理限制湖性内覆切酶阁的应军用切载葡体切目脸的基吃因限制绍性内树切酶相同绩粘性逐末端两者代相连要点表：避蜜免切敬断目狼的基粗因5/1箱8/剃2叫023释分子滑生物塌学原预理载体和蹄目咱的基傍因的奖连接人工献连接目器：li跌nke肿r人工目合成拥的寡撤核苷具酸，咸安置路有限洪制性钩内切魔酶的好识别氏序列垮。DNA朝连接昂酶：可棵用于奔连接笨碱基脱互补勺的二饺段核迷酸链假。连接例方式猾：粘端校连接嫌方式尾接艰法5/1秀8/症2据023惯分子游生物淘学原币理粘端连棍接5/1贷8/胆2啄023锦分子尾生物响学原蹲理尾接法魄5/1议8/晨2叹023聪分子生物胁学原驻理重组练体的爱转化基因歌的转旱移：尊重组酬体进帽入宿出主细得胞的倒过程菌，已道开发俭了很颜多方外法。化学边法：CaC旋l2转移键法、写碱金银属离发子转舱移法物理敲法：垂显微家注射平法、猫基因暗枪法坡、电凡穿孔毒法生物怠学法窝：逆害转录锐病毒共载体抵、腺泪病毒路载体5/1馋8/萝2卵023牙分子桐生物潮学原叮理重组次体的克转化转化远：重窝组载灯体导外入宿桑主后委，利墓用宿蓬主的闹酶系伪统表氧达的泼过程御。即召改变愤宿主教性状量的过列程。5/1抗8/驴2痕023怒分子若生物菌学原絮理基因工异程唉的表哨达体擦系的删发展5/1艇8/禾2抢023氏分子陵生物府学原仪理DNA必重组敞体的寨筛选宴与鉴量定根据总重组移载体柏的表期型进壮行筛犬选：正如质励粒的个抗药饶性、欺营养浴素的沸依赖劝型DNA希限制服酶切悼图谱汁分析邮：锦提巾取经兴粗选据后的著宿主

DNA信，用限翁制性郑内切悼酶切痕割后工与原洞来载沾体比莲较。利用侨核酸番杂交睁和放标射自京显影拆进行迁鉴定祝：用蹦目的超基因犹作探序针监铲测宿芬主DNA爆是否段重组为体。5/1妄8/导2毯023其分子纹生物赌学原恶理DNA妄重组井体的慢筛选笑与鉴荣定膏灭活眯法筛抵选重组体妨。5/1森8/离2诞023作分子句生物重学原挥理提取答转化蔑细胞DNA曲限制性沉内抗切酶琼脂测糖凝灶胶电擦泳与原际来载从体及徐重组袭体比较酸DNA嫁重组仓体的雹筛选福与鉴定德5/1茧8/杠2钉023绕分子膀生物耕学原勒理DNA鱼重组新体的讽筛选郊与鉴绝定菌落硝酸纤维素滤膜探针X线底片显影平板5/1保8/口2鲜023胞分子垦生物累学原男理基因妖工程碎策略5/1杨8/钟2揪023强分子喜生物梢学原撒理第三节谎、画基因盛工程麦的应刚用生命叠科学旋研究铜趋势基因湾诊断杨和基鄙因治伞疗基因瘦工程榴产品兴的开魔发和仅应用5/1宰8/纠2破023序分子铅生物破学原敞理生命恒科学绿研究窄趋势基因投的结痒构与香功能垂研究基因闹表达犬的调劝控各种短生物价大分除子之逗间的甘识别波及结球合了解然生命图的奥斜秘5/1泥8/碗2售023矮分子盘生物埋学原鸽理基因小诊断献和基运因治酱疗5/18/2023分子粱生物熄学原旨理基因工欺程珍产品满的开艰发和川应用基因愈工程菌疫苗振：安必全廉感价骑乙瓶肝疫狮苗、有甲肝塌疫苗纱巨细沫胞病疗毒、景流行躲性出延血热绝、轮肉状病五毒、基因醋工程附生产片激素烧类：驰胰让岛素蒜、生州长激垄素细胞这因子赞：押生注长因孙子、筐肿瘤氏坏死厨因子益、造防血因浮子、

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