克氏原螯虾病例报告及培养条件优化

克氏原螯虾病例报告及培养条件优化

克氏原虾是目前养殖最广泛的淡水溶菌虾育种方法。嗜水气单胞菌属弧菌科,气单胞菌属,是一种重要的人畜鱼共患病的病原菌。该菌广泛存在于水环境中,可单独或与其他致病菌一起协同感染多种水生爬行两栖鸟类及哺乳类动物,并引发该动物全身性败血症或局部感染甚至死亡,也可引发人类食物中毒、腹泻败血症以及局部的伤口感染等病症。20世纪90年代以来,大量报道表明,嗜水气单胞菌作为水产养殖动物的主要细菌病致病菌之一,常引起我国淡水养殖鱼类的暴发性败血症,并造成大量死亡,给淡水鱼养殖业造成重大的经济损失1材料和方法1.1保温箱与加冰样品患病克氏原螯虾样品采自南京市某克氏原螯虾养殖场,取典型患病样品20只,平均体重30g,所有样品均用保温箱加冰保存。在取样过程中,测量和记录养殖池水的常规水质指标,了解克氏原螯虾的养殖过程、养殖管理,观察和总结发病特征及流行情况。1.2优势菌落的分离纯化取典型患病克氏原螯虾,70%酒精进行体表消毒后,按照无菌操作的方法,分别取其肝、鳃、心肌、神经等,划线接种于普通营养琼脂平板,28℃恒温培养48h后,挑取形态特征一致的优势菌落进行分离纯化3次,斜面保存。1.3u3000配合饲料充氧清污实验将健康克氏原螯虾置于有效水体为1096cm×470cm×670cm的水族箱中暂养7d,实验水温为(28±1)℃,日换水量约50%,定期投喂配合饲料,及时充氧清污。设置三组平行组及一组对照组,每组l0只虾。代表菌株系从采回的患病克氏原螯虾肝脏中分离纯化获得,实验编号LX-H20110710,菌株在普通营养肉汤中培养36h后,每只虾100μL(活菌浓度为2.1×101.4细菌的鉴定病原菌生理生化特征的测定及有关分类鉴定参考文献进行1.5药敏胶片的贴放用高压灭菌的棉签蘸取扩大培养后的菌液,均匀涂布于普通肉汤固体培养基上,为了保证涂布均匀,重复涂布3次,待水分晾干后,贴好药敏纸片轻轻按压,确保贴稳,防止掉落和移动,药敏纸片需完全与培养基接触,一个平皿贴7片纸片,中间1块,其余6块均匀分布其周围。药敏试验操作方法按2005年版CLSI/NCCLSM100-S15所述方法进行。2结果2.1后期不摄食,应激发病克氏原螯虾在初期无明显症状,后期不摄食,反应迟钝,应激能力较弱;螯肢及附肢无力,无法支撑身体;肝胰腺颜色淡黄,腹节肌肉苍白。2.2普通营养琼物菌落的形态从采回病虾的多处组织中均分离到优势度在95%以上的病原菌(命名为LX-H20110710),菌落形态、大小、颜色在普通营养琼脂平板上均一致:菌落形态为边缘薄,颜色较白,中间略隆起,颜色较黄,光亮湿润,灰白色反光圆形菌落。该病原菌革兰氏染色阴性,短杆状,鞭毛染色后,观察到鞭毛,能运动,氧化酶阳性,葡萄糖发酵产酸产气(具体指标结果见表1),依据《伯杰氏细菌鉴定手册(第九版)》及有关资料2.3mm为0.0+低度敏感将贴好药敏纸片的培养皿置于37℃恒温箱中培养12~16h,观察测量抑菌圈大小。抑菌圈≥21mm为高度敏感,11~20mm为中度敏感,6~10mm为低度敏感,6mm以下为不敏感。结果表明该菌对依诺沙星、美满霉素、四环素、氯霉素、强力霉素、阿奇霉素、氨苄青霉素、红霉素、庆大霉素、灭滴灵、环氟哌酸、氟哌酸、氟苯尼考、恩诺沙星高度敏感;对青霉素类、盐霉素、盐酸林可霉素、磺胺间甲氧嘧啶钠、盐酸环丙沙星、土霉素、诺克沙胂、杆菌肽锌、黄霉素等不敏感;对表2中其他抗生素药物中度敏感。3嗜历史单胞菌的感染嗜水气单胞菌可引起多种淡水鱼类感染,由其导致的细菌性败血症在世界范围内广泛分布。我国淡水养殖鱼类的发病尤为严重,是我国养鱼史上危害淡水鱼的种类最多、危害鱼的年龄范围最大、流行地域最广、流行季节最长、危害养鱼水域最多、造成损失最大的一种急性传染病该菌为一种人畜共患病原,人类感染了嗜水气单胞菌主要表现为腹泻,严重时可引起食物中毒,还可引起败血症、脑膜炎、肺炎及伤口感染等嗜水气单胞菌存在很多血清型,不同物种间分离的致病菌株存在显著差异,即使相同物种也存在不同耐药性菌株,因此临床用药需建立在细菌的药敏实验基础上。在本实验中,分离菌对氟苯尼考、