临床基因扩增检验标本的处理保存及核酸提取方法

临床基因扩增检查标本处理保存及核酸提取办法第1页临床PCR检查标本采集、处理、保存及核酸提取办法江西省肿瘤医院陈文学第2页检查误差发生率1997年,一位意大利著名检查专家对急诊检查误差发生种类和发生率进行了统计。成果显约有682%检查误差发生在检查前期,而来自检查中期和检查后期误差率分别为133%和18:5%■2023年,这位专家又进行了类似统计,成果显示,检查前期误差发生率仍高达61.9%第3页正确采集、运输、保存临床标本主要性质量确保关键性步骤处理包括试验室检查医患纠纷方法之第4页核酸提取主要性核酸提取是临床PCR检查最为关键部分■核酸提取成败关系到临床PR检查正确是否■临床PCR检查操作中最易出问题步骤第5页标本采集标本采集时间对扩增检测成果影响(过早或过晚都也许会出现假阴性成果)■标本采集部位准备(适度消毒)■标本类型和采集量(衣原体上皮细胞)■采样质量评价(评价办法:肉眼观测、显微镜下观测和化学分析)釆样及运输容器(次性无菌器材防腐剂抗凝剂)■标本采集中防污染(-次性无菌容器,避免混入操作者头发,表皮等,如玻璃容器要高压灭菌)第6页标本运输■样本一经采集,则应尽也许快送至检测试验室样本中如加入了合适稳定剂如用于RNA测定加入GITC血清(浆样本和用于DNA测定EDTA抗凝血等则可在室温下运输或邮寄。试验室应根据待测靶核酸特性,对多种临床样本运输条件作出对应要求第7页临床标本处理和保存血清(浆)全血外周血单个核细胞痰棉拭子脓液体液乳汁组织第8页血清(浆DNA测定,可按照一般血清标本处理序,对测定影响不大。RNA测定,标本获取和保存方式对测定成果,也许有决定性影响。最佳是使用EDTA抗凝(严禁使用肝素,因其对PCR扩增有抑制,且很难在核酸提取过程中完全清除全血标本,抗凝后6小时内分离血浆,如使用血清标本,则需尽快(2小时内)分离血清,标本短期1~2周)保存可在-20℃下,较长期保存应在70℃下。第9页全血■以全血作为待测标本时,必须注意抗凝剂选择,一般使用EDTA-Na2或枸椽酸钠,不可使用肝素。全血样本如用于DNA提取检测可4℃下短期保存,如用于RNA检测,则应在取血后,尽快提取RNA。第10页外周血单个核细胞外周血单个核细胞可从抗凝全血制备,主要有两条途径,一是使用淋巴细胞分离液分离制备;二是使用红细胞裂解液,裂解全血中红细胞,经生理盐水数次洗涤,即可得到单个核细胞。■外周血单个核细胞如暂不提取核酸,可保存于-70℃C下第11页第12页第13页第14页第15页第16页第17页第18页第19页第20页第21页第22页第23页第24页第25页第26页第27页第28页第29页第30页第31页第32页第33页第34页第35页第36页第37页第38页第39页第40页第41页第42页第43页第44页第45页第46页第47页第48页第49页第50页第51页第52页第53页第54页第55页第56页第57页第58页第59页第60页第61页第62页第63页第64页第65页谢谢！21、要懂得对好事称颂过于夸张，也会招来人们反感轻蔑和嫉妒。——培根

22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈

23、一切节省，归根究竟都归结为时间节省。——马克思

24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会所有推倒。——莎士比亚

25、学习是劳动，是充满思想劳