火炬果树粗提物抗氧化活性的研究

火炬果树粗提物抗氧化活性的研究

0基于过剩自由基造成的不确定反应自由基是生物氧化过程中产生的中间代谢产物。水体继续产生自由基，并立即去除自由基。当机体清除自由基的能力下降或体内自由基生成过多时,过剩的自由基在体内堆积,作用于生物膜多不饱和脂肪酸,使之发生脂质过氧化而引起膜结构和功能的紊乱;攻击蛋白质引起蛋白质交联、酶活性改变;损伤DNA引起突变等等火炬树(RhusTyphinaLinn)系漆树科(Anacardiaceae)植物,其树皮、叶含有单宁,是制取鞣酸的原料。果实含有柠檬酸和Vc,可作饮料1材料和方法1.1试剂与仪器火炬果穗:采于青岛大学校园,室温下自然干燥,粉碎过40目筛备用;亚油酸:上海来泽精细化学品公司;茶多酚:福建松溪生化工厂,纯度>95%;乙醇、乙酸乙酯、三氯醋酸等其他试验所用试剂:均为分析纯;猪油:市售新鲜板油文火熬制,过滤后备用。721型分光光度计:上海第三分析仪器厂产品;7530G型紫外分光光度计:上海惠普;SHA-C水浴恒温振荡器;ZFQ-8HA型真空旋转蒸发器。1.2实验方法1.2.1水浸率的测定称取粉碎干燥的火炬果穗各5g,按固液比1∶10的比例分别加入95%乙醇、60%乙醇、水、氯仿-95%乙醇(1∶1)溶液,于40℃恒温水浴振荡浸提6h,过滤。滤渣再分别加等量溶剂用同法提取,过滤。合并滤液,混匀,减压浓缩蒸至粘稠,然后转移到真空干燥器,干燥,称重,计算浸出率。用无水乙醇溶解定容,于冰箱存放,用时逐级稀释。1.2.2火果提取物的抗氧化性测定1.2.2.硫代巴比妥酸法检测脂肪酸氧化产物丙二醛生成量配制0.5%的亚油酸磷酸缓冲液作为底物,分别加入底物质量0.05%、0.1%的火炬果穗95%乙醇提取物、BHT及茶多酚,用力搅匀,同时以底物作为空白。将上述各样置于(40±1)℃恒温培养箱中,定期取样用硫代巴比妥酸法测定亚油酸氧化产物丙二醛的生成量。丙二醛生成量以反应液吸光度值表示,吸光度越小,丙二醛的生成量越少,即抗氧化剂的抗氧化能力越强。1.2.2.抗氧化活性的测定各称取一定量的火炬果穗95%乙醇提取物,用少量乙醇溶解,加入100g温热猪油,用力搅拌均匀。使其在猪油中的含量分别为0.2%和0.02%。另称取0.02g茶多酚和BHT各一份,用少量乙醇溶解,加入100g同样猪油,用力搅匀。同时做样品空白。将所有样品放入(65±1)℃恒温箱中,定时搅拌、并交换在恒温箱中的位置。定期取样测定猪油的过氧化值(POV),并以此来表示油脂的氧化速度,进而衡量提取物的抗氧化活性。POV值测定:取双份平行样,按照GB5009.37-85方法测定。1.2.2.%红细胞悬液的制备鸡断颈取血,制成抗凝血,3000×g离心得红细胞,冷生理盐水洗3次,制成2%的红细胞悬液。取2%的红细胞悬液1.5mL于各管中,分别加入不同浓度火炬果穗提取物,再分别加入终浓度为0.078mol/L的H1.2.2.火炬果穗提取物对tda含量的影响鸡断颈取血,迅速取出肝脏,在0～4℃下用生理盐水制成2%的肝匀浆。实验分为对照组和3个剂量组。取2%肝匀浆各2.0mL加入各管中,分别加入不同浓度的火炬果穗提取物,最后用生理盐水补充体积至3.0mL。置于37℃恒温水浴加热1.5h,取出加2.0mL10%TCA终止反应,再加入2.0mL0.67%TBA,置于沸水浴中显色15min,冷却后离心,取上清液测532nm处吸光值,以吸光值表示MDA含量多少。吸光值越大,MDA含量越高。抑制率(%)=(MDA对照-MDA处理)/MDA对照×100%1.2.2.半胱氨酸和硫酸亚铁对mda含量测定的影响实验分为对照组和3个剂量组。各管中先分别加入肝匀浆2mL,3个剂量组分别加入不同浓度的提取物,对照组加入1.0mL生理盐水,再向各管分别加入半胱氨酸和硫酸亚铁(终浓度分别为0.16mmol/L和0.032mmol/L),以硫代巴比妥酸法测定MDA含量,计算抑制率。1.2.2.6、进口实验分为对照组(加相应的组织匀浆)和6个剂量组(分别加入不同浓度的提取物和相应组织匀浆1.0mL),加入FeSO2结果2.1提取物对脂质过氧化反应的阻断作用以95%乙醇粗提物为试样,用硫代巴比妥酸比色法测定火炬果穗粗提物对亚油酸脂质过氧化的抑制作用。由图1可见,火炬果穗粗提物对亚油酸的脂质过氧化反应有阻断作用,其阻断作用随提取物浓度增加而增加,呈量效关系。与常用抗氧化剂相比,0.1%的火炬果穗粗提物对亚油酸自动氧化反应的抑制能力强于0.05%的茶多酚,但弱于同浓度的茶多酚和BHT。值得注意的是本实验所用茶多酚、BHT基本上为纯品,而火炬果穗试样为粗提物,其有效成分含量较低,纯化后是否有助于提高其抗氧化作用,有待于进一步研究。2.2抗氧化能力的测定火炬果穗乙醇提取物对猪油的抗氧化效果如表1所示。火炬果穗乙醇提取物对猪油的自动氧化有一定的抑制作用,且随着提取物浓度的增加,其抗氧化能力逐渐增强,这与硫代巴比妥酸比色法测定的结果相符。当火炬树果穗提取物在猪油中的添加量为0.2%时,在测定时间内其抗氧化性优于0.02%茶多酚和0.02%BHT,但添加量为0.02%时其抗氧化作用不如同浓度的茶多酚和BHT。2.3火果提取物与h由表2可见,火炬果穗提取物对H2.4火煮食品对鸡肝脏自发脂质过氧化的影响由表3可见,火炬果穗提取物对鸡肝脏自发性脂质过氧化产物MDA的生成有抑制作用,随提取物浓度增加,抑制率相应增加。2.5fe公司由表4可见,试验组鸡肝中的MDA吸光度值均低于由Fe2.6入量：由入量的变化而增加出入量加入火炬树果穗提取物后,对鸡肝MDA生成的抑制率随