微生物的实验室培养自制

一、微生物概念：个体微小，结构简单，个体难以用肉眼观察到，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清一切微小生物之统称微生物的实验室培养自制第1页1、微生物类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:酵母菌、霉菌大型食用菌单细胞动植物无细胞结构真核细胞细、线、支、蓝、衣原核细胞微生物的实验室培养自制第2页2、细菌芽孢：有些细菌（多为杆菌）在一定条件下，细胞质高度浓缩脱水所形成一个抗逆性很强球形或椭圆形休眠体。

微生物的实验室培养自制第3页单个或少数菌体（2）特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。（3）功效：（1）定义：3.菌落判定菌种主要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体微生物的实验室培养自制第4页二.培养基

1.概念：

按照微生物对营养物质不一样需求，配制供其生长繁殖营养基质。2.基本成份：碳源、氮源、水、无机盐微生物的实验室培养自制第5页⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON有机物是异养型微生物碳源、氮源、能源微生物的实验室培养自制第6页3.种类：按物理形态分：液体培养基：固体培养基：半固体培养基：应用微生物分离、判定、计数等按照培养基用途分

选择培养基判别培养基按照培养基成份来分合成培养基、天然培养基、半合成培养基主要用于工业生产观察生物运动和菌种保藏等微生物的实验室培养自制第7页4、选择培养基不加氮源无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物无碳培养基:

分离自养型微生物加入四环素等抗生素培养基:分离导入了目标基因受体细胞加入高浓度食盐培养基:

分离金黄色葡萄球菌微生物的实验室培养自制第8页5.配制标准⑴目标明确：⑵营养全方面、浓度适宜、百分比恰当⑶pH值适宜：有机碳源异养型：依据微生物种类、培养目标选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）生产科研微生物的实验室培养自制第9页1、概念：泛指培养微生物操作中，全部防止杂菌污染方法。无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。三.无菌技术微生物的实验室培养自制第10页耐高温需保持干燥物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包含芽孢、孢子）强烈理化方法，杀死全部微生物（包含芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min2.消毒与灭菌：微生物的实验室培养自制第11页高压蒸汽灭菌锅干热灭菌箱微生物的实验室培养自制第12页判断以下各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择适当方法。1、豆浆2、游泳池3、超净工作台4、玻棒、试管、吸管、锥形瓶5、培养细菌用培养皿6、无菌水7、牛肉膏蛋白胨培养基8、接种环、接种针9、实验操作者双手微生物的实验室培养自制第13页2.无菌范围：试验操作空间消毒操作者手、衣着消毒试验用具灭菌试验操作过程酒精灯旁操作超净工作台微生物的实验室培养自制第14页1000ml牛肉膏蛋白胨培养基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g四.大肠杆菌纯化培养：1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）.计算：培养基用量依配方计算各成份用量（2）.称量：（3）.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少许水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容（4）.调pH、分装、封口：（5）.灭菌：（6）.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落微生物的实验室培养自制第15页2、倒平板约50℃预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基微生物的实验室培养自制第16页1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？提醒：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基问题讨论微生物的实验室培养自制第17页3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。

不要；空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生微生物的实验室培养自制第18页5、平板划线时不能划破培养基原因一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。微生物的实验室培养自制第19页菌种划3个平板1个不划线接种环预防划破培养基（重复试验）（空白对照）⑴平板划线操作：微生物的实验室培养自制第20页问题讨论1、为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物杀死上次残留菌种，确保使下一次划线时，菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。微生物的实验室培养自制第21页2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。

划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落微生物的实验室培养自制第22页6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器微生物的实验室培养自制第23页b.涂布平板操作：不超出0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释10