TSH荧光酶免疫分析法1

TSH荧光酶免疫检测法相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!一、先天性甲低的新生儿筛查方法1、酶免疫分析法(enzymelmmunoassay，EIA)2、放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)3、免疫放射法(immunoradiometricassay，IRMA)

本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!一、先天性甲低的新生儿筛查方法4、时间分辨荧光免疫分析法TRFIAme-resolvedfluorescenceimmunoas—say5、荧光酶免疫分析法FEIAfluoreseenceenzymeimmunoassay6、自动新生儿疾病筛查系统(automatednewbornscreeningsystem)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!TSH荧光酶免疫分析法FEIAFluorescenceenzymeimmunoassay本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!1、原理本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!1．原理荧光酶免疫分析法(FEIA)是一种高度灵敏的检测方法，用FEIA测定血hTSH基于一步夹心法原理，采用固相、双位点荧光酶免疫分析法。干血斑中洗涤出的hTSH，同时与包被在酶标板上抗hTSH的单克隆抗体分子和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH—亚基的第二抗体结合。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!被测TSH抗原被测TSH抗原有两个抗原决定簇故叫双位点β位点α位点本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!TSH单克隆抗体TSH单克隆抗体TSH单克隆抗体包被在反应板上的TSH单克隆抗体故叫固相本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HRP辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH—亚基（β位点）的第二抗体本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!TSH单克隆抗体被测TSH抗原TSH单克隆抗体TSH单克隆抗体被测TSH抗原被测TSH抗原HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HRP被测TSH抗原被测TSH抗原HRPHRPHRP打入血斑（TSH）并加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH—亚基的第二抗体溶液于已包被TSH单克隆抗体的酶标反应孔内。（一步法）PH：6.5本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!TSH单克隆抗体被测TSH抗原TSH单克隆抗体TSH单克隆抗体被测TSH抗原被测TSH抗原HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HRP被测TSH抗原被测TSH抗原HRPHRPHRPHPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体被测TSH抗原被测TSH抗原HRPHRP干血斑中洗涤出的hTSH，同时与包被在酶标板上抗hTSH的单克隆抗体分子和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH—亚基的第二抗体结合。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!TSH单克隆抗体被测TSH抗原TSH单克隆抗体TSH单克隆抗体被测TSH抗原被测TSH抗原HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HRPHRPHRP过量的酶结合物和未结合的hTSH被洗涤去掉。只剩下TSH同时与包被在酶标板上抗TSH的单克隆抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TSH—亚基的第二抗体结合物。被检测TSH抗原被夹在中间，故又称夹心法。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!TSH单克隆抗体被测TSH抗原TSH单克隆抗体TSH单克隆抗体被测TSH抗原被测TSH抗原HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HPR标记的抗TSH亚基单克隆抗体HRPHRPHRP加入荧光底物3-P-羟基苯丙酸(HPPA)和双氧水进行酶反应。HPPAH2O2HPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAH2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2PH：7.8本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!

2HPPA+H2O2DPDPA+2H2O

无荧光3-P-羟基苯丙酸HRPH2O22HPPADPDPA2H2O荧光物质作用1小时本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!原理以甘氨酸缓冲液终止酶反应。DPDPA甘氨酸缓冲液DPDPAPH：10.3本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!原理用荧光读数仪以320nm为激发光，405nm为发射光测定荧光值。由于荧光强度与酶标反应板上结合的hTSH数量成正比，因此，通过已知浓度的标准血斑荧光值和样本的荧光值，也就可换算出样本血斑中hTSH的含量。用TSH荧光酶免疫分析法FEIA检测hTSH的灵敏度达0.037mIU／L本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!特点：①荧光物质为DPDPA，是由HPPA与双氧水在HRP的作用下脱氢结合而成，它吸收特定波长（320nm）的光能后，发生原子重排，同时发射出更长波长（405nm）的光。DPDPA激发光波长320nm发射光波长405nm本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!特点：②鉴于HPPA（3-P-羟基苯丙酸）敏感性高、动力学范围广，已被广泛用于替代传统EIA显色剂，作为辣根过氧化物酶的底物。以HPPA作底物的FEIA可检测极低和极高浓度，具有明显优势，由于hTSH样本正常值与非正常值之间差异大，故该法特别适用于hTSH检测。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!特点：③HPPA／H2O2反应生成的荧光强度的影响因素中，最重要的是底物浓度、反应液和终止液的pH值。酶反应最佳pH值为7.8。加入碱性缓冲液终止酶反应，又可显著增强荧光强度。经测定，使用pH10.3、1.5mol／L甘氨酸缓冲液可获得最大荧光强度。在低浓度hTSH下，该缓冲液可使荧光强度增加5倍，当hTSH浓度高于80mIU／L时，增强作用依次减弱。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!特点：④荧光产物稳定，可放置过夜后测定。无论在室温(20～25℃)或30℃孵育用FEIA测定hTSH的敏感性无变化；而在37℃条件下孵育会增加背景荧光，降低灵敏度。建议底物孵育温度为20～30℃。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!特点⑤FEIA检测法方法先进，重复性高。一般情况下，批内分析变异系数和批间分析变异系数均小于10％。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!特点⑥应用FEIA法进行hTSH检测时，其他垂体激素和人绒毛膜促性腺激素(HCG)对实验的干扰极小。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!2、仪器和试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!以下仪器均由

芬兰Labsystems公司提供荧光读数仪孵育振荡仪自动洗板仪3mm打孔器单道加样器八道加样器电脑显示屏本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!(1)、仪器：①、荧光读数仪；

②、孵育／振荡仪；

③、自动洗板仪；

④、3mm打孔器，或打孔钳；

⑤、加样器；八道加样器。

以上仪器均由芬兰Labsystems公司提供。

⑥、3mm实验血片塑料支架；

⑦、电脑、打印机；

⑧、冰箱。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!材料①、新生儿筛查滤纸干血斑标本：用S&S903滤纸，按新生儿疾病筛查滤纸干血斑标本采集方法采集；

本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!试剂芬兰LabsystemshTSH-FEIA试剂盒，包含如下物品抗hTSH包被的酶标板（1）抗hTSH—HRP酶结合物（2）酶结合物稀释液（3）HPPA荧光底物（4a）H2O2溶液（4b）终止液（5）洗涤液（6）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!试剂①、抗hTSH包被的酶标板（1）：抗hTSH抗体IgG(小鼠单克隆抗体)包被的酶标板，浓度>1.0μg/m1。所有包被酶标板均置于有干燥剂的锡箔密封袋中以防止潮湿。潮湿将破坏酶标板的包被，严重缩短试剂盒保存期。试剂盒通常储存在2—8℃，为防止打开锡箔密封袋时水蒸气凝结破坏酶标板性能，试剂盒使用前需置室温半小时后再打开。若锡箔密封袋在使用前受损或干燥剂变色，请勿使用；本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!②、抗hTSH—HRP酶结合物（2）：辣根过氧化物酶标记的抗hTSH(小鼠单克隆抗体浓度>50ngIgG／m1)抗体，加0．2％的KathonCGe作为防腐剂；试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!③、酶结合物稀释液（3）：缓冲盐溶液，pH6.5，加0.2％的KathonCG~作为防腐剂。用于酶结合物的稀释；试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!④、HPPA荧光底物（4a）：3—P—羟基苯丙酸溶于Tris缓冲液(pH7.8)中，加0.2％的KathonCGe作为防腐剂；试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!⑤、H2O2溶液（4b）：柠檬酸—醋酸缓冲液，pH6.0，含过氧化氢。避免与氧化／还原剂接触；试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!⑥、终止液：甘氨酸缓冲液（5），pH10.3；试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!⑦、洗涤液（6）：含有吐温20的磷酸盐缓冲液，加入0.05％Broni—dox作为防腐剂。按1:9比例加入蒸馏水稀释。由于储于4℃可能形成结晶，稀释前温度需达18—30℃；试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!⑧、hTSH标准品（7）：TSH存在于干血滤纸片的血斑中，包括一个零空白。存于装有干燥剂的铝箔袋中。加入0.05％Bronidox作为防腐剂。标准品由红细胞压积为50％一55％的人血液制得，所含的hTSH浓度经过WHO2ndIRP(80／558)校正；试剂本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!⑨、质控物（8）：hTSH存在于滤纸上的干血滤纸血斑中。加入0．05％Bronidox作为防腐剂。1张滤纸中具有5套2种浓度质控物(品)，存于装有干燥剂的铝箔袋中。标准品和质控物(品)的TSH浓度有批号差异，需参照每一试剂盒中的标准品和质控物(品)的记录单。试剂全血样品中TSH含量与血清样品中TSH含量的转化公式TSHmIU／L血清＝TSHmIU／L全血×lOO／(100—HCR)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!试剂盒内的TSH标准品和质控物的浓度本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!3、实验操作本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验操作步骤(1)用编码机给每一张血片按次序盖上卡片号，此卡片号也就是我们的检验编号。在检验前，所有的试剂和酶标反应板应放置